SIRT7在病理性乳腺细胞中的功能和作用机制研究
发布时间：2021-04-26 00:44
SIRT7作为去乙酰化蛋白家族一员,是一种NAD+依赖性脱乙酰酶,定位于核仁,参与多种生物学过程,包括rRNA和蛋白质合成、DNA损伤反应、细胞应激以及肿瘤的发生等。有研究表明SIRT7在LPS致炎的THP-1细胞中表达降低,在甲状腺癌、膀胱癌、肝癌、结肠癌以及乳腺癌等组织中高表达,被认为是一种潜在的癌症因子,但SIRT7在乳房炎和乳腺癌中的研究较少,具体的调控机制还不清楚。因此本研究将通过构建敲低和过表达SIRT7的细胞模型,深入研究SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的作用和分子机制,以及SIRT7对人乳腺癌细胞的生长调控机制,为奶牛乳房炎和人类乳腺癌分子诊治提供新靶点及新线索。研究结果主要包括以下几个部分:1、SIRT7降低LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤奶牛乳腺组织的健康直接关乎着养殖者的经济效益和乳品质量。尽管预防和治疗方法已经实施了几十年,但奶牛乳房炎仍然是一种棘手的疾病。LPS是引起奶牛乳房炎症反应的关键细胞毒性因子。所以急需发展有效控制LPS引起奶牛乳房炎的新型药物和疫苗等。本试验中我们分别采集5头炎症和5头正常奶牛乳腺组织,通过Western blot...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：152 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词（ABBREVIATION）
绪论
第一篇 文献综述
第一章 乳房炎和乳腺癌
1 炎症的概述
2 炎症反应
3 炎症反应的控制
4 奶牛乳房炎
5 炎症与癌症
6 乳腺癌
6.1 乳腺癌的发病机制
6.2 乳腺癌的致病因素
6.3 预防和治疗
第二章 去乙酰化蛋白7的研究进展
1 SIRT7的基因组成
2 SIRT7的定位
3 SIRT7的表达
4 SIRT7在核糖体DNA转录中的作用
5 SIRT7在蛋白合成中的作用
6 SIRT7在细胞应激中的作用
6.1 低氧应激
6.2 低糖应激
6.3 内质网应激
6.4 基因组应激
7 SIRT7在疾病和癌症中的作用
7.1 SIRT7与心脏健康
7.2 SIRT7与脂肪肝
7.3 SIRT7与炎症
7.4 SIRT7与癌症
8 SIRT7与衰老
9 SIRT7的酶催化活性
本研究的目的和意义
第二篇 试验研究
第三章 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤的作用
1 试验材料
1.1 试验动物
1.2 主要相关试剂
1.3 主要仪器
2 试验方法
2.1 奶牛乳腺组织样本的采集
2.2 奶牛乳腺组织病理学检查
2.3 奶牛乳腺上皮细胞的培养
2.4 LPS处理乳腺上皮细胞
2.5 总RNA提取及反转录
2.6 实时荧光定量PCR（Quantitative Real Time PCR, qRT-PCR）
2.7 组织和细胞蛋白的提取及变性
2.8 Western blot检测
2.9 SIRT7-siRNA的设计和合成
2.10 SIRT7基因克隆和过表达载体的构建
2.11 siRNA和质粒的转染
2.12 转染效率的检测
2.13 NO荧光染色
2.14 ROS荧光染色
2.15 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养及鉴定
3.2 SIRT7在奶牛乳房炎组织和细胞中的表达
3.3 转染效率检测
3.4 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞促炎性因子分泌的影响
3.5 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞的炎性介质NO产生的作用
3.6 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞促炎性介质ROS产生的影响
4 讨论
5 小结
第四章 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤的作用机制
1 试验材料
1.1 试验材料
1.2 主要相关试剂
1.3 主要仪器
2 试验方法
2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养
2.2 荧光定量PCR
2.3 Western blot检测
2.4 免疫荧光染色
2.5 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞NF-κB通路上游信号因子的影响
3.2 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞NF-κB p65激活的影响
3.3 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞NF-κB p65核转移的影响
3.4 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响
3.5 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞的调控过程
4 讨论
5 小结
第五章 SIRT7对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、迁移和凋亡的影响
1 试验材料
1.1 细胞系
1.2 主要相关试剂
1.3 主要仪器
2 试验方法
2.1 乳腺癌细胞的培养
2.2 乳腺上皮细胞的传代培养
2.3 乳腺癌细胞的冻存及复苏
2.4 SIRT7-siRNA干扰
2.5 SIRT7基因克隆和过表达载体的构建
2.6 总RNA提取及反转录
2.7 实时荧光定量PCR （qRT-PCR）
2.8 组织或细胞蛋白的提取及变性
2.9 CCK-8细胞活性检测
2.10 EDU标记细胞增殖
2.11 细胞划痕
2.12 Transwell细胞迁移检测
2.13 细胞周期检测
2.14 细胞凋亡检测
2.15 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 SIRT7的转染效率检测
3.2 SIRT7对乳腺癌细胞增殖的影响
3.3 SIRT7对乳腺癌细胞迁移的影响
3.4 SIRT7对乳腺癌细胞周期的影响
3.5 SIRT7对乳腺癌细胞凋亡的影响
4 讨论
5 小结
第六章 敲低SIRT7对MDA-MB-231细胞成瘤及DOX治疗的影响
1 试验材料
1.1 细胞系和裸鼠
1.2 主要相关试剂
1.3 主要仪器
2 试验方法
2.1 细胞培养
2.2 慢病毒shRNA
2.3 裸鼠皮下成瘤
2.4 阿霉素注射
2.5 Tunel染色
2.6 HE染色
2.7 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 敲低SIRT7对MDA-MB-231细胞裸鼠成瘤的影响
3.2 组织病理学观察瘤体
3.3 DOX对稳定敲低SIRT7的MDA-MB-231细胞活性的影响
3.4 敲低SIRT7对DOX治疗裸鼠成瘤的影响
3.5 组织病理学观察瘤体
3.6 敲低SIRT7对DOX处理的瘤体p38MAPK激活的影响
3.7 SIRT7调控乳腺癌细胞的作用机制
4 讨论
5 小结
全文结论
创新点
参考文献
致谢
攻读博士学位期间论文发表情况（第一作者）
本文编号：3160400
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：152 页
【学位级别】：博士
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摘要
ABSTRACT
缩略词（ABBREVIATION）
绪论
第一篇 文献综述
第一章 乳房炎和乳腺癌
1 炎症的概述
2 炎症反应
3 炎症反应的控制
4 奶牛乳房炎
5 炎症与癌症
6 乳腺癌
6.1 乳腺癌的发病机制
6.2 乳腺癌的致病因素
6.3 预防和治疗
第二章 去乙酰化蛋白7的研究进展
1 SIRT7的基因组成
2 SIRT7的定位
3 SIRT7的表达
4 SIRT7在核糖体DNA转录中的作用
5 SIRT7在蛋白合成中的作用
6 SIRT7在细胞应激中的作用
6.1 低氧应激
6.2 低糖应激
6.3 内质网应激
6.4 基因组应激
7 SIRT7在疾病和癌症中的作用
7.1 SIRT7与心脏健康
7.2 SIRT7与脂肪肝
7.3 SIRT7与炎症
7.4 SIRT7与癌症
8 SIRT7与衰老
9 SIRT7的酶催化活性
本研究的目的和意义
第二篇 试验研究
第三章 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤的作用
1 试验材料
1.1 试验动物
1.2 主要相关试剂
1.3 主要仪器
2 试验方法
2.1 奶牛乳腺组织样本的采集
2.2 奶牛乳腺组织病理学检查
2.3 奶牛乳腺上皮细胞的培养
2.4 LPS处理乳腺上皮细胞
2.5 总RNA提取及反转录
2.6 实时荧光定量PCR（Quantitative Real Time PCR, qRT-PCR）
2.7 组织和细胞蛋白的提取及变性
2.8 Western blot检测
2.9 SIRT7-siRNA的设计和合成
2.10 SIRT7基因克隆和过表达载体的构建
2.11 siRNA和质粒的转染
2.12 转染效率的检测
2.13 NO荧光染色
2.14 ROS荧光染色
2.15 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养及鉴定
3.2 SIRT7在奶牛乳房炎组织和细胞中的表达
3.3 转染效率检测
3.4 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞促炎性因子分泌的影响
3.5 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞的炎性介质NO产生的作用
3.6 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞促炎性介质ROS产生的影响
4 讨论
5 小结
第四章 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤的作用机制
1 试验材料
1.1 试验材料
1.2 主要相关试剂
1.3 主要仪器
2 试验方法
2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养
2.2 荧光定量PCR
2.3 Western blot检测
2.4 免疫荧光染色
2.5 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞NF-κB通路上游信号因子的影响
3.2 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞NF-κB p65激活的影响
3.3 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞NF-κB p65核转移的影响
3.4 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响
3.5 SIRT7对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞的调控过程
4 讨论
5 小结
第五章 SIRT7对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、迁移和凋亡的影响
1 试验材料
1.1 细胞系
1.2 主要相关试剂
1.3 主要仪器
2 试验方法
2.1 乳腺癌细胞的培养
2.2 乳腺上皮细胞的传代培养
2.3 乳腺癌细胞的冻存及复苏
2.4 SIRT7-siRNA干扰
2.5 SIRT7基因克隆和过表达载体的构建
2.6 总RNA提取及反转录
2.7 实时荧光定量PCR （qRT-PCR）
2.8 组织或细胞蛋白的提取及变性
2.9 CCK-8细胞活性检测
2.10 EDU标记细胞增殖
2.11 细胞划痕
2.12 Transwell细胞迁移检测
2.13 细胞周期检测
2.14 细胞凋亡检测
2.15 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 SIRT7的转染效率检测
3.2 SIRT7对乳腺癌细胞增殖的影响
3.3 SIRT7对乳腺癌细胞迁移的影响
3.4 SIRT7对乳腺癌细胞周期的影响
3.5 SIRT7对乳腺癌细胞凋亡的影响
4 讨论
5 小结
第六章 敲低SIRT7对MDA-MB-231细胞成瘤及DOX治疗的影响
1 试验材料
1.1 细胞系和裸鼠
1.2 主要相关试剂
1.3 主要仪器
2 试验方法
2.1 细胞培养
2.2 慢病毒shRNA
2.3 裸鼠皮下成瘤
2.4 阿霉素注射
2.5 Tunel染色
2.6 HE染色
2.7 数据统计与分析
3 结果与分析
3.1 敲低SIRT7对MDA-MB-231细胞裸鼠成瘤的影响
3.2 组织病理学观察瘤体
3.3 DOX对稳定敲低SIRT7的MDA-MB-231细胞活性的影响
3.4 敲低SIRT7对DOX治疗裸鼠成瘤的影响
3.5 组织病理学观察瘤体
3.6 敲低SIRT7对DOX处理的瘤体p38MAPK激活的影响
3.7 SIRT7调控乳腺癌细胞的作用机制
4 讨论
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全文结论
创新点
参考文献
致谢
攻读博士学位期间论文发表情况（第一作者）
本文编号：3160400
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