黄连解毒汤治疗小鼠急性溃疡性结肠炎疗效的评价及其作用机制研究
发布时间：2021-06-23 13:52
黄连解毒汤（Huang-lian-Jie-du decoction,HLJDD）是清热解毒的代表方剂,可用于治疗胃肠道疾病。溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）是一种以结直肠黏膜及黏膜下层炎症和溃疡性病变为主的炎症性肠病。为探讨HLJDD对急性UC的治疗效果及其作用机制,本研究评价了HLJDD对小鼠急性UC模型的疗效,并从分子水平对其部分作用机制进行了研究。进一步通过体内药效学实验筛选了HLJDD抗溃疡有效部位,并探讨了HLJDD及其有效部位对UC模型小鼠肠道菌群的影响。在此基础上,结合代谢组学技术与分子模拟对接技术,深入探讨了HLJDD及其有效部位抗溃疡作用机制。方法及结果:（1）给予BABL/c小鼠3.5%葡聚糖硫酸钠饮水使其连续自由饮用7天以建立小鼠急性UC模型,造模的同时每天分别灌胃高（9.2 g/kg）、中（4.6 g/kg）、低（2.3 g/kg）剂量的HLJDD进行治疗,并以柳氮磺胺吡啶（0.45 g/kg）为阳性对照药物。试验期间对各组小鼠临床症状进行疾病活动指数（Disease activity index,DAI）评分。实验结束后,取各组小鼠血...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
HLJDD改善DSS诱导的小鼠急性UCFigure2-1HLJDDinterventionrelievesDSS-inducedUCinmice.
黄连解毒汤治疗小鼠急性溃疡性结肠炎疗效的评价及其作用机制研究31白组相比，模型组小鼠结肠组织病理学评分显著升高（图2-2B）。不同剂量HLJDD干预治疗组小鼠结肠黏膜上皮仅有少量破损，肠绒毛大体结构清晰可见，仅见黏膜层不同程度的炎性细胞浸润（图2-2A）。结果表明，与模型组相比，HLJDD干预治疗可显著降低结肠组织病理学评分（图2-2B），且HLJDD-M组效果最佳（p<0.001）。说明HLJDD对DSS诱导的小鼠结肠粘膜损伤具有显著的保护作用。图2-2HLJDD改善UC小鼠结肠病理学损伤Figure2-2HLJDDattenuatescolonicpathologicaldamageinacuteUCmice.注：A：各组小鼠结肠组织HE染色照片（200×）；B：组织病理学评分。数据以mean±SD表示，n=3。与空白组相比：###p<0.001；与模型组相比：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；ns表示无显著性差异。Note:(A)Representativeimagesshowingcolonpathologicdamageswithhematoxylinandeosin(H&E)staining,(200×magnification).(B)Histologicalscoresofcolons.Dataareexpressedasthemean±SD,n=3pregroup.###p<0.001vs.NCgroup;*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001vs.modelgroup.3.3HLJDD对急性UC小鼠血浆细胞因子的作用取各组小鼠血浆进行细胞因子检测，结果表明，与空白组相比，模型组小鼠血浆IL-1β，TNF-α含量极显著升高（p<0.001），IL-10含量极显著降低（p<0.001）（图2-3A-C），说明模型组小鼠体内存在显著的炎症反应。与模型组相比，不同剂量HLJDD干预治疗均可显著降低UC小鼠血浆IL-1β，TNF-α含量（p<0.001），HLJDD-H和HLJDD-M治疗均可显著升高血浆IL-10含量（p<0.01）（图2-3），表明HLJDD具有显著的抗炎活性，可通过抑制炎症反应治疗DSS诱导的小鼠
甘肃农业大学2020届博士学位论文32UC。图2-3HLJDD对UC小鼠血浆细胞因子的影响Figure2-3EffectsofHLJDDonplasmacytokinesinUCmice注：各组小鼠血浆中IL-1β（A），TNF-α（B）和IL-10（C）含量水平。数据以mean±SD表示，n=5。与空白组相比：###p<0.001；与模型组相比：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；ns表示无显著性差异。Note:TreatmentwithHLJDDdown-regulatedplasmaIL-1β(A),TNF-α(B),andup-regulatedIL-10(C)levelsinUCmice.Dataareexpressedasthemean±SD,n=5pergroup.###p<0.001vs.NCgroup;**p<0.01,***p<0.001vs.modelgroup.ns:nosignificant.3.4HLJDD对急性UC小鼠结肠氧化应激参数的影响各组小鼠结肠组织匀浆抗氧化能力检测结果表明，造模后模型组小鼠结肠组织匀浆氧化应激产物NO，MDA含量显著升高（p<0.001）（图2-4A，B），抗氧化剂GSH含量及抗氧化酶SOD活力显著降低（p<0.001）（图2-4C，D），说明模型组小鼠体内氧化应激水平显著升高。给予不同剂量的HLJDD干预治疗均可显著升高抗氧化剂GSH含量及抗氧化酶SOD活力（p<0.01），显著降低NO含量水平（p<0.05）（图2-4A，C，D）。此外，不同剂量HLJDD治疗组小鼠MDA含量水平均有降低趋势，但仅HLJDD-M治疗组差异显著（p<0.001）（图2-4）。该结果表明，HLJDD可通过抗氧化作用缓解DSS诱导的氧化应激对小鼠肠道的损伤。
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄连解毒汤中13种活性成分的HPLC检测及其有效部位的筛选[J]. 杨丽宏,袁子文,纪鹏,张晓松,华永丽,魏彦明. 中草药. 2019(16)
[2]VSL#3 can prevent ulcerative colitis-associated carcinogenesis in mice[J]. Chun-Sai-Er Wang,Wen-Bin Li,Hong-Ying Wang,Yi-Ming Ma,Xin-Hua Zhao,Hong Yang,Jia-Ming Qian,Jing-Nan Li. World Journal of Gastroenterology. 2018(37)
[3]汉黄芩苷通过抑制PI3K/Akt/Nrf2/ARE通路逆转SGC7901/cDDP细胞耐药性[J]. 王丽君,王世广,邓同兴. 生理学报. 2018(04)
[4]Relationship between intestinal microbiota and ulcerative colitis: Mechanisms and clinical application of probiotics and fecal microbiota transplantation[J]. Zhao-hua Shen,Chang-xin Zhu,Yong-Sheng Quan,Zhen-Yu Yang,Shuai Wu,Wei-Wei Luo,Bei Tan,xiao-Yan Wang. World Journal of Gastroenterology. 2018(01)
[5]中药多成分药代动力学研究:思路与方法[J]. 李川. 中国中药杂志. 2017(04)
[6]Molecular mechanism of action of anti-tumor necrosis factor antibodies in inflammatory bowel diseases[J]. Ulrike Billmeier,Walburga Dieterich,Markus F Neurath,Raja Atreya. World Journal of Gastroenterology. 2016(42)
[7]Overview of cytokines and nitric oxide involvement in immuno-pathogenesis of inflammatory bowel diseases[J]. Imene Soufli,Ryma Toumi,Hayet Rafa,Chafia Touil-Boukoffa. World Journal of Gastrointestinal Pharmacology and Therapeutics. 2016(03)
[8]Fecal microbiota transplantation broadening its application beyond intestinal disorders[J]. Meng-Que Xu,Hai-Long Cao,Wei-Qiang Wang,Shan Wang,Xiao-Cang Cao,Fang Yan,Bang-Mao Wang. World Journal of Gastroenterology. 2015(01)
[9]黄连解毒汤源出《肘后备急方》考辨[J]. 梅全喜. 时珍国医国药. 2013(11)
[10]Fluctuations in butyrate-producing bacteria in ulcerative colitis patients of North India[J]. Reena Kumari,Vineet Ahuja,Jaishree Paul. World Journal of Gastroenterology. 2013(22)
硕士论文
[1]葛根芩连汤合异功散加味治疗溃疡性结肠炎大肠湿热证的临床研究[D]. 保继琼.甘肃中医药大学 2016
本文编号：3245054
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
HLJDD改善DSS诱导的小鼠急性UCFigure2-1HLJDDinterventionrelievesDSS-inducedUCinmice.
黄连解毒汤治疗小鼠急性溃疡性结肠炎疗效的评价及其作用机制研究31白组相比，模型组小鼠结肠组织病理学评分显著升高（图2-2B）。不同剂量HLJDD干预治疗组小鼠结肠黏膜上皮仅有少量破损，肠绒毛大体结构清晰可见，仅见黏膜层不同程度的炎性细胞浸润（图2-2A）。结果表明，与模型组相比，HLJDD干预治疗可显著降低结肠组织病理学评分（图2-2B），且HLJDD-M组效果最佳（p<0.001）。说明HLJDD对DSS诱导的小鼠结肠粘膜损伤具有显著的保护作用。图2-2HLJDD改善UC小鼠结肠病理学损伤Figure2-2HLJDDattenuatescolonicpathologicaldamageinacuteUCmice.注：A：各组小鼠结肠组织HE染色照片（200×）；B：组织病理学评分。数据以mean±SD表示，n=3。与空白组相比：###p<0.001；与模型组相比：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；ns表示无显著性差异。Note:(A)Representativeimagesshowingcolonpathologicdamageswithhematoxylinandeosin(H&E)staining,(200×magnification).(B)Histologicalscoresofcolons.Dataareexpressedasthemean±SD,n=3pregroup.###p<0.001vs.NCgroup;*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001vs.modelgroup.3.3HLJDD对急性UC小鼠血浆细胞因子的作用取各组小鼠血浆进行细胞因子检测，结果表明，与空白组相比，模型组小鼠血浆IL-1β，TNF-α含量极显著升高（p<0.001），IL-10含量极显著降低（p<0.001）（图2-3A-C），说明模型组小鼠体内存在显著的炎症反应。与模型组相比，不同剂量HLJDD干预治疗均可显著降低UC小鼠血浆IL-1β，TNF-α含量（p<0.001），HLJDD-H和HLJDD-M治疗均可显著升高血浆IL-10含量（p<0.01）（图2-3），表明HLJDD具有显著的抗炎活性，可通过抑制炎症反应治疗DSS诱导的小鼠
甘肃农业大学2020届博士学位论文32UC。图2-3HLJDD对UC小鼠血浆细胞因子的影响Figure2-3EffectsofHLJDDonplasmacytokinesinUCmice注：各组小鼠血浆中IL-1β（A），TNF-α（B）和IL-10（C）含量水平。数据以mean±SD表示，n=5。与空白组相比：###p<0.001；与模型组相比：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；ns表示无显著性差异。Note:TreatmentwithHLJDDdown-regulatedplasmaIL-1β(A),TNF-α(B),andup-regulatedIL-10(C)levelsinUCmice.Dataareexpressedasthemean±SD,n=5pergroup.###p<0.001vs.NCgroup;**p<0.01,***p<0.001vs.modelgroup.ns:nosignificant.3.4HLJDD对急性UC小鼠结肠氧化应激参数的影响各组小鼠结肠组织匀浆抗氧化能力检测结果表明，造模后模型组小鼠结肠组织匀浆氧化应激产物NO，MDA含量显著升高（p<0.001）（图2-4A，B），抗氧化剂GSH含量及抗氧化酶SOD活力显著降低（p<0.001）（图2-4C，D），说明模型组小鼠体内氧化应激水平显著升高。给予不同剂量的HLJDD干预治疗均可显著升高抗氧化剂GSH含量及抗氧化酶SOD活力（p<0.01），显著降低NO含量水平（p<0.05）（图2-4A，C，D）。此外，不同剂量HLJDD治疗组小鼠MDA含量水平均有降低趋势，但仅HLJDD-M治疗组差异显著（p<0.001）（图2-4）。该结果表明，HLJDD可通过抗氧化作用缓解DSS诱导的氧化应激对小鼠肠道的损伤。
【参考文献】：
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[4]Relationship between intestinal microbiota and ulcerative colitis: Mechanisms and clinical application of probiotics and fecal microbiota transplantation[J]. Zhao-hua Shen,Chang-xin Zhu,Yong-Sheng Quan,Zhen-Yu Yang,Shuai Wu,Wei-Wei Luo,Bei Tan,xiao-Yan Wang. World Journal of Gastroenterology. 2018(01)
[5]中药多成分药代动力学研究:思路与方法[J]. 李川. 中国中药杂志. 2017(04)
[6]Molecular mechanism of action of anti-tumor necrosis factor antibodies in inflammatory bowel diseases[J]. Ulrike Billmeier,Walburga Dieterich,Markus F Neurath,Raja Atreya. World Journal of Gastroenterology. 2016(42)
[7]Overview of cytokines and nitric oxide involvement in immuno-pathogenesis of inflammatory bowel diseases[J]. Imene Soufli,Ryma Toumi,Hayet Rafa,Chafia Touil-Boukoffa. World Journal of Gastrointestinal Pharmacology and Therapeutics. 2016(03)
[8]Fecal microbiota transplantation broadening its application beyond intestinal disorders[J]. Meng-Que Xu,Hai-Long Cao,Wei-Qiang Wang,Shan Wang,Xiao-Cang Cao,Fang Yan,Bang-Mao Wang. World Journal of Gastroenterology. 2015(01)
[9]黄连解毒汤源出《肘后备急方》考辨[J]. 梅全喜. 时珍国医国药. 2013(11)
[10]Fluctuations in butyrate-producing bacteria in ulcerative colitis patients of North India[J]. Reena Kumari,Vineet Ahuja,Jaishree Paul. World Journal of Gastroenterology. 2013(22)
硕士论文
[1]葛根芩连汤合异功散加味治疗溃疡性结肠炎大肠湿热证的临床研究[D]. 保继琼.甘肃中医药大学 2016
本文编号：3245054
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