蛹虫草的人工培育及其多糖抗肿瘤活性研究
发布时间：2021-07-10 23:22
“虫草”是广义虫草属（Cordyceps）真菌的总称。我国的虫草产业主要涉及自然资源较为匮乏的冬虫夏草（Cordyceps sinensis）、蛹虫草（C.militaris）等真菌。其中,蛹虫草的成分、药理作用与冬虫夏草相似,尤其是CMPs-4多糖,具有重要的经济价值。由于蛹虫草能够人工培育,是解决野生虫草资源严重不足的有效手段;长期以来,一直是药用真菌研究领域的热点之一。我国新疆丰富的水稻、小麦资源,为蛹虫草的人工培育提供了充足的物质条件。菌种退化是制约蛹虫草人工培育技术发展的最突出问题。本文对蛹虫草的优质高产菌种选育和培养液配方优化开展了研究,旨在为蛹虫草的规模化生产提供理论和技术指导。同时,本文还对蛹虫草多糖CMPs-4对人工食道癌细胞Eca109的增殖抑制作用、及其对Eca109细胞周期和细胞凋亡的影响等问题进行了研究与讨论,以期揭示CMPs-4的抗癌机制。本论文首先从野生蛹虫草子实体中筛选了亲本菌株,在此基础上,培育子实体;利用单孢子分离技术分离单子囊孢子,并对其交配型进行鉴定;从不同交配型单子囊孢子菌株杂交产生的子实体中分离菌种,筛选出子实体产量较高的F1代杂交菌株。其次...
【文章来源】：东北师范大学吉林省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：91 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
单子囊孢子分离Fig.2.1Isolationofsingle-ascosporesofCordycepsmilitaris
东北师范大学博士学位论文25火30s，72℃延伸60s，35个循环；72℃下延伸10min。PCR产物通过1.6%琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果确定其交配型的类型。分析不同群体的交配型分离率，得到交配型分离特征。最后通过卡方检验群体是否符合理论交配型分离比。2.2.5营养亲和性试验将不同交配型的单孢子菌株的代表菌株，置于在PDA培养基上进行对峙培养。以同一菌株的自配对为对照组，每个培养皿中上放两对菌株，以便观察交配型相同菌株与不同菌株之间的亲和关系。将接种后的培养皿置于23℃培养箱中暗培养4天，在第5天进行明/暗（16h/8h）交替培养。观察并记录气生菌丝是否存在、菌落生长状况及菌落颜色等指标；着重观察第14天菌落结合亲和力、原基形成及子实体发育的情况。参照李沛利等人的划分方法，观察菌株在28天内组合配对结果的差异，并对菌株配对进行分析。[176]2.2.6单子囊孢子菌株菌落特征和实体产生情况的观察在OlympusIX71体式解剖镜下对蛹虫草子实体下进行显微观察并照相。2.3结果与分析2.3.1菌株分离及培养结果从人工栽培的蛹虫草子实体上分离得到10个菌株。10个菌株单独培养进行出草试验，发现大部分菌种都能够出草（图2.2）。图2.2大米培养基出草试验Fig．2.2CordycepsmilitarisFruitingfigure通过对蛹虫草子实体的形态观察发现，野生蛹虫草子实体呈深棕黄色，棒状，
东北师范大学博士学位论文26柄部光滑如图2.3A。子实体上的子囊壳分布相对稀疏，子囊壳大部分埋生于子实体中，突出部分形成乳状突（图2.3B）。而人工栽培的蛹虫草子实体颜色橙色深浅不一，子实体圆柱形诸多，也有部分头部较尖（图2.3C）。子实体上子囊壳排列比较紧密，子囊壳大部分外露、细长（图2.3D）。人工栽培的蛹虫草在产量和质量上要比野生蛹虫草好（图2.3E-F）。同时观察到有些人工栽培的蛹虫草只产生原基没有形成子实体，甚至有的没有原基形成（图2.3G-H）。图2.3A和B：野生蛹虫草子实体及子囊壳的着生状态；C和D人工栽培的蛹虫草子实体及子囊壳着生状态；E正在生长的人工栽培蛹虫草子实体；F发育成熟的人工栽培蛹虫草子实体G、H没有子实体的形成Fig．2.3AandB:Wildfruitbodyandperitheciagrowingonit;CandD:cultivatedfruitbodyandperitheciagrowingonit;E:thegrowingcultivatedfruitbody;F:thematurecultivatedfruitbody;GandH:nofruitbodyprodaction2.3.2单子囊孢子菌株分离结果及交配型鉴定从不同来源4个单子囊孢子群体分离得到60个单子囊孢子菌株。被测的60单子囊孢子菌株PCR鉴定结果显示，37菌株扩增出特异性片段，其中22个菌株扩增出MAT1-1的-box片段，其特异性产物大小为233bp；其余的15株单子囊孢子菌株能扩增MAT1-2的HMG-box片段，特异性产物大小为191bp。结果显示，37株代表菌株只能扩增MAT1-2或MAT1-1的一个，说明MAT1-1和MAT1-2不能共存，是一个非常明显的二极异配体系（图2.4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]适合培育蚕蛹虫草的蓖麻蚕品种和蛹虫草菌株筛选试验[J]. 张俊,张晓,颜新培,廖模祥,钱何英,李刚,张月华,李一平. 蚕业科学. 2019(06)
[2]蛹虫草菌丝体液体发酵条件的优化研究[J]. 刘然,曲亮璠,王祥河,许勤虎,史连生. 食品工程. 2019(03)
[3]蛹虫草SOD高活性菌株筛选及液体培养条件优化[J]. 马婕馨,蔡程山,高苏,方晔晨,赵国柱. 食品与发酵工业. 2019(10)
[4]分生孢子杂交配对筛选高价值蛹虫草新菌株试验[J]. 阳武雄,田云. 现代农业科技. 2019(04)
[5]2002-2014年中国恶性肿瘤死亡城乡差异分析[J]. 王苗,霍俊锋,孔军辉. 实用预防医学. 2018(11)
[6]新疆食用菌产业生态的优劣势分析[J]. 简浪波. 福建热作科技. 2018(02)
[7]新疆设施农业发展现状[J]. 吴乐天,孙小丽,马彩雯. 农业工程技术. 2018(16)
[8]北冬虫夏草瓶栽栽培技术及品质标准[J]. 王剑虹,贾国军,赵凤舞,郝楠. 现代农业科技. 2018(01)
[9]紫外-硫酸二乙酯复合诱变高通量筛选虫草素高产蛹虫草突变株[J]. 汤佳鹏,汪建雄. 食品工业科技. 2018(03)
[10]蛹虫草优良菌株的筛选[J]. 于海洋,王延锋,史磊,王金贺,潘春磊,盛春鸽,刘姿彤,张鹏,董雪梅. 中国食用菌. 2017(05)
硕士论文
[1]蛹虫草多肽对脂肪肝大鼠血脂及血流变的影响[D]. 蔡琦.吉林大学 2016
[2]人工蛹虫草的化学成分研究[D]. 陈策.吉林农业大学 2012
[3]虫草素引起肿瘤细胞凋亡以及抑制增殖作用的研究[D]. 雷坤.福建师范大学 2012
[4]蛹虫草液体深层发酵的研究[D]. 孙佳岩.中国农业科学院 2012
[5]蛹虫草多糖的分子结构及生物学活性研究[D]. 吴凤瑶.江苏科技大学 2011
[6]蛹虫草的生物学特性及抗衰老功效研究[D]. 王奇.华中农业大学 2010
本文编号：3276847
【文章来源】：东北师范大学吉林省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：91 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
单子囊孢子分离Fig.2.1Isolationofsingle-ascosporesofCordycepsmilitaris
东北师范大学博士学位论文25火30s，72℃延伸60s，35个循环；72℃下延伸10min。PCR产物通过1.6%琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果确定其交配型的类型。分析不同群体的交配型分离率，得到交配型分离特征。最后通过卡方检验群体是否符合理论交配型分离比。2.2.5营养亲和性试验将不同交配型的单孢子菌株的代表菌株，置于在PDA培养基上进行对峙培养。以同一菌株的自配对为对照组，每个培养皿中上放两对菌株，以便观察交配型相同菌株与不同菌株之间的亲和关系。将接种后的培养皿置于23℃培养箱中暗培养4天，在第5天进行明/暗（16h/8h）交替培养。观察并记录气生菌丝是否存在、菌落生长状况及菌落颜色等指标；着重观察第14天菌落结合亲和力、原基形成及子实体发育的情况。参照李沛利等人的划分方法，观察菌株在28天内组合配对结果的差异，并对菌株配对进行分析。[176]2.2.6单子囊孢子菌株菌落特征和实体产生情况的观察在OlympusIX71体式解剖镜下对蛹虫草子实体下进行显微观察并照相。2.3结果与分析2.3.1菌株分离及培养结果从人工栽培的蛹虫草子实体上分离得到10个菌株。10个菌株单独培养进行出草试验，发现大部分菌种都能够出草（图2.2）。图2.2大米培养基出草试验Fig．2.2CordycepsmilitarisFruitingfigure通过对蛹虫草子实体的形态观察发现，野生蛹虫草子实体呈深棕黄色，棒状，
东北师范大学博士学位论文26柄部光滑如图2.3A。子实体上的子囊壳分布相对稀疏，子囊壳大部分埋生于子实体中，突出部分形成乳状突（图2.3B）。而人工栽培的蛹虫草子实体颜色橙色深浅不一，子实体圆柱形诸多，也有部分头部较尖（图2.3C）。子实体上子囊壳排列比较紧密，子囊壳大部分外露、细长（图2.3D）。人工栽培的蛹虫草在产量和质量上要比野生蛹虫草好（图2.3E-F）。同时观察到有些人工栽培的蛹虫草只产生原基没有形成子实体，甚至有的没有原基形成（图2.3G-H）。图2.3A和B：野生蛹虫草子实体及子囊壳的着生状态；C和D人工栽培的蛹虫草子实体及子囊壳着生状态；E正在生长的人工栽培蛹虫草子实体；F发育成熟的人工栽培蛹虫草子实体G、H没有子实体的形成Fig．2.3AandB:Wildfruitbodyandperitheciagrowingonit;CandD:cultivatedfruitbodyandperitheciagrowingonit;E:thegrowingcultivatedfruitbody;F:thematurecultivatedfruitbody;GandH:nofruitbodyprodaction2.3.2单子囊孢子菌株分离结果及交配型鉴定从不同来源4个单子囊孢子群体分离得到60个单子囊孢子菌株。被测的60单子囊孢子菌株PCR鉴定结果显示，37菌株扩增出特异性片段，其中22个菌株扩增出MAT1-1的-box片段，其特异性产物大小为233bp；其余的15株单子囊孢子菌株能扩增MAT1-2的HMG-box片段，特异性产物大小为191bp。结果显示，37株代表菌株只能扩增MAT1-2或MAT1-1的一个，说明MAT1-1和MAT1-2不能共存，是一个非常明显的二极异配体系（图2.4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]适合培育蚕蛹虫草的蓖麻蚕品种和蛹虫草菌株筛选试验[J]. 张俊,张晓,颜新培,廖模祥,钱何英,李刚,张月华,李一平. 蚕业科学. 2019(06)
[2]蛹虫草菌丝体液体发酵条件的优化研究[J]. 刘然,曲亮璠,王祥河,许勤虎,史连生. 食品工程. 2019(03)
[3]蛹虫草SOD高活性菌株筛选及液体培养条件优化[J]. 马婕馨,蔡程山,高苏,方晔晨,赵国柱. 食品与发酵工业. 2019(10)
[4]分生孢子杂交配对筛选高价值蛹虫草新菌株试验[J]. 阳武雄,田云. 现代农业科技. 2019(04)
[5]2002-2014年中国恶性肿瘤死亡城乡差异分析[J]. 王苗,霍俊锋,孔军辉. 实用预防医学. 2018(11)
[6]新疆食用菌产业生态的优劣势分析[J]. 简浪波. 福建热作科技. 2018(02)
[7]新疆设施农业发展现状[J]. 吴乐天,孙小丽,马彩雯. 农业工程技术. 2018(16)
[8]北冬虫夏草瓶栽栽培技术及品质标准[J]. 王剑虹,贾国军,赵凤舞,郝楠. 现代农业科技. 2018(01)
[9]紫外-硫酸二乙酯复合诱变高通量筛选虫草素高产蛹虫草突变株[J]. 汤佳鹏,汪建雄. 食品工业科技. 2018(03)
[10]蛹虫草优良菌株的筛选[J]. 于海洋,王延锋,史磊,王金贺,潘春磊,盛春鸽,刘姿彤,张鹏,董雪梅. 中国食用菌. 2017(05)
硕士论文
[1]蛹虫草多肽对脂肪肝大鼠血脂及血流变的影响[D]. 蔡琦.吉林大学 2016
[2]人工蛹虫草的化学成分研究[D]. 陈策.吉林农业大学 2012
[3]虫草素引起肿瘤细胞凋亡以及抑制增殖作用的研究[D]. 雷坤.福建师范大学 2012
[4]蛹虫草液体深层发酵的研究[D]. 孙佳岩.中国农业科学院 2012
[5]蛹虫草多糖的分子结构及生物学活性研究[D]. 吴凤瑶.江苏科技大学 2011
[6]蛹虫草的生物学特性及抗衰老功效研究[D]. 王奇.华中农业大学 2010
本文编号：3276847
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