山茶花APX、CPI、GA20ox1基因功能研究及木糖筛选体系建立
发布时间：2021-08-10 16:10
利用RT-PCR同源克隆以及3’,5’-RACE扩增技术,从杜鹃红山茶（Camellia azalea）嫩叶中分离获得山茶花抗逆基因以及从云南山茶矮生品种‘恨天高’（C.reticulate Lindl.‘Hentiangao’）茎尖中分离获得株型生长相关的同源基因c DNA全长序列,所分离的基因包括杜鹃红山茶CaAPX（GenBank登录号:KP635267）、杜鹃红山茶CaCPI（GenBank登录号:KP635269）以及‘恨天高’CrGA20ox1（GenBank登录号:KP635268）。序列分析及生物信息学分析发现,这些基因皆为所要分离的目的基因。利用荧光定量Real-time RT-PCR技术,分别对CaAPX、CaCPI以及CrGA20ox1的表达模式进行了研究。CaAPX在杜鹃红山茶7种检测组织中均有表达,但表达水平不一,表达量由高到低依次为:未成熟果实>嫩叶>花苞>叶芽>种胚>花瓣>花芽,其中未成熟果实中的表达量最高,高达其他组织的2.6811.44倍。杜鹃红山茶在温度胁迫下的表达分析结果显示,温度胁迫可以诱...
【文章来源】：中国林业科学研究院北京市
【文章页数】：173 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 引言
1.1.1 植物抗寒、耐热性研究
1.1.2 植物抗虫性研究
1.1.3 赤霉素与植物株高的研究
1.1.4 山茶属植物遗传转化过程中木糖筛选体系的研究
1.1.5 研究目的和意义
1.1.6 项目来源及经费支持
1.2 研究目标和主要研究内容
1.2.1 关键的科学问题与研究目标
1.2.2 主要研究内容
1.3 研究技术路线
第二章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因全长克隆与生物信息学分析
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 杜鹃红山茶CaAPX、CaCPI及‘恨天高’CrGA20ox1基因cDNA全长克隆
2.2.2 生物信息学分析
2.3 小结
第三章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因表达模式研究
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 CaAPX基因组织特异性及胁迫表达分析
3.2.2 CaCPI基因组织特异性表达分析
3.2.3 GA20ox1在不同株型山茶中的表达分析
3.3 小结
第四章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因植物表达载体构建及转化烟草
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与分析
4.2.1 目的基因植物表达载体的构建
4.2.2 转基因烟草的RT-PCR鉴定
4.2.3 转基因烟草的Southern杂交鉴定
4.2.4 转基因植株不同株系间目的基因表达分析
4.3 小结
第五章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因功能分析
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果与分析
5.2.1 正义CaAPX基因转化烟草抗寒、耐热性检测
5.2.2 正义CaCPI转化烟草抗虫检测
5.2.3 正、反义CrGA20ox1基因转化烟草株型及内源激素的检测
5.3 小结
第六章 木糖筛选系统对杜鹃红山茶愈伤组织诱导及生长的影响
6.1 材料与方法
6.1.1 材料
6.1.2 方法
6.2 结果与分析
6.2.1 xylA基因获得及其酶切验证
6.2.2 pCAMBIA1300-xylA重组载体的鉴定
6.2.3 xylA基因对模式植物遗传转化的影响
6.2.4 杜鹃红山茶各外植体木糖筛选浓度的优化
6.2.5 木糖筛选系统对杜鹃红山茶愈伤诱导及生长的作用
6.3 小结
第七章 结论与讨论
7.1 结论
7.2 讨论
7.3 展望
参考文献
在读期间的学术研究
致谢
中文详细摘要
【参考文献】：
期刊论文
[1]烟草半胱氨酸蛋白酶抑制剂（CPI）基因家族的克隆及组织表达谱分析[J]. 林世锋,元野,任学良,邹颉,黎瑞源,郭玉双,赵杰宏,王仁刚. 中国烟草学报. 2014(04)
[2]苹果MdGA20ox1基因的克隆、亚细胞定位及表达分析[J]. 姜志昂,孙建设,彭建营,邵建柱. 园艺学报. 2013(12)
[3]小黑杨PnsGA20ox1基因的克隆及功能分析[J]. 张力杰,张凯旋,魏志刚. 南京林业大学学报(自然科学版). 2013(06)
[4]山茶‘耐冬’愈伤组织诱导与植株再生[J]. 吴斌,李纪元,范正琪,商宏莉. 植物生理学报. 2013(04)
[5]过量表达OsAPX1基因增强水稻的抗热和抗氧化能力[J]. 安辽原,牛向丽,黄龙翔,刘永胜. 中国农业科技导报. 2012(05)
[6]矮壮素对毛竹的矮化效应研究[J]. 周建革,范明香,余水生,吴礼栋. 世界竹藤通讯. 2012(04)
[7]茶树品种及萎凋过程中叶片APX基因表达的qPCR分析[J]. 孙云,林玉玲,赖钟雄,江春柳. 福建农林大学学报(自然科学版). 2012(04)
[8]以木糖异构酶基因作为选择标记的花生遗传转化[J]. 丁霄,隋炯明,王晶珊,乔利仙. 核农学报. 2012(03)
[9]蝴蝶兰抗坏血酸过氧化物酶基因克隆及其表达研究[J]. 许传俊,孙叙卓,李玲,茹志伟,曾碧玉,刘育梅,黄珺梅. 园艺学报. 2012(04)
[10]杜梨CPI基因的克隆、序列分析及表达[J]. 李慧,丛郁,常有宏,蔺经,盛宝龙. 江苏农业学报. 2011(05)
博士论文
[1]荔波连蕊茶GA20-氧化酶和GA2-氧化酶基因调控株型的功能研究[D]. 肖政.中国林业科学研究院 2014
[2]山茶花MADS-box家族A类和C类基因克隆及功能分析[D]. 孙迎坤.中国林业科学研究院 2013
[3]红掌‘阿拉巴马’低温相关基因AOX、CAT和APX的表达分析、功能验证及遗传转化体系的构建[D]. 刘慧春.浙江大学 2012
[4]麻疯树pepc1基因的克隆及其调控烟草蛋白质和油脂合成的作用分析[D]. 范正琪.中国林业科学研究院 2010
[5]菊花花器官cDNA文库的构建及DgGA20ox基因克隆与表达分析[D]. 缪恒彬.南京农业大学 2009
[6]OsGA20ox2基因沉默降低水稻株高的研究[D]. 乔枫.南京农业大学 2007
[7]河北杨巯基蛋白酶抑制剂基因的分离和功能鉴定[D]. 刘会香.中国林业科学研究院 2006
[8]抗水稻白叶枯病细菌拮抗物质的研究[D]. 陈卫良.浙江大学 2001
硕士论文
[1]拟南芥赤霉素20-氧化酶3基因在ABA信号转导途径中的功能分析[D]. 申醒.吉林大学 2014
[2]棉花GhGME基因的克隆及其表达分析[D]. 王江英.甘肃农业大学 2012
[3]过量表达毛白杨APX基因增强植物对非生物胁迫的抗性[D]. 马箐.山东师范大学 2012
[4]木糖筛选系统在黄瓜转化中的应用[D]. 崔丽巍.东北师范大学 2010
[5]龙眼胚性培养物胞质型apx基因克隆及其表达研究[D]. 邵巍.福建农林大学 2008
[6]丹参APX和GPX基因克隆及其表达分析[D]. 韩立敏.陕西师范大学 2007
[7]毛白杨巯基蛋白酶抑制剂基因克隆研究[D]. 覃庆锋.北京林业大学 2005
本文编号：3334373
【文章来源】：中国林业科学研究院北京市
【文章页数】：173 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 引言
1.1.1 植物抗寒、耐热性研究
1.1.2 植物抗虫性研究
1.1.3 赤霉素与植物株高的研究
1.1.4 山茶属植物遗传转化过程中木糖筛选体系的研究
1.1.5 研究目的和意义
1.1.6 项目来源及经费支持
1.2 研究目标和主要研究内容
1.2.1 关键的科学问题与研究目标
1.2.2 主要研究内容
1.3 研究技术路线
第二章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因全长克隆与生物信息学分析
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 杜鹃红山茶CaAPX、CaCPI及‘恨天高’CrGA20ox1基因cDNA全长克隆
2.2.2 生物信息学分析
2.3 小结
第三章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因表达模式研究
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 CaAPX基因组织特异性及胁迫表达分析
3.2.2 CaCPI基因组织特异性表达分析
3.2.3 GA20ox1在不同株型山茶中的表达分析
3.3 小结
第四章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因植物表达载体构建及转化烟草
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与分析
4.2.1 目的基因植物表达载体的构建
4.2.2 转基因烟草的RT-PCR鉴定
4.2.3 转基因烟草的Southern杂交鉴定
4.2.4 转基因植株不同株系间目的基因表达分析
4.3 小结
第五章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因功能分析
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果与分析
5.2.1 正义CaAPX基因转化烟草抗寒、耐热性检测
5.2.2 正义CaCPI转化烟草抗虫检测
5.2.3 正、反义CrGA20ox1基因转化烟草株型及内源激素的检测
5.3 小结
第六章 木糖筛选系统对杜鹃红山茶愈伤组织诱导及生长的影响
6.1 材料与方法
6.1.1 材料
6.1.2 方法
6.2 结果与分析
6.2.1 xylA基因获得及其酶切验证
6.2.2 pCAMBIA1300-xylA重组载体的鉴定
6.2.3 xylA基因对模式植物遗传转化的影响
6.2.4 杜鹃红山茶各外植体木糖筛选浓度的优化
6.2.5 木糖筛选系统对杜鹃红山茶愈伤诱导及生长的作用
6.3 小结
第七章 结论与讨论
7.1 结论
7.2 讨论
7.3 展望
参考文献
在读期间的学术研究
致谢
中文详细摘要
【参考文献】：
期刊论文
[1]烟草半胱氨酸蛋白酶抑制剂（CPI）基因家族的克隆及组织表达谱分析[J]. 林世锋,元野,任学良,邹颉,黎瑞源,郭玉双,赵杰宏,王仁刚. 中国烟草学报. 2014(04)
[2]苹果MdGA20ox1基因的克隆、亚细胞定位及表达分析[J]. 姜志昂,孙建设,彭建营,邵建柱. 园艺学报. 2013(12)
[3]小黑杨PnsGA20ox1基因的克隆及功能分析[J]. 张力杰,张凯旋,魏志刚. 南京林业大学学报(自然科学版). 2013(06)
[4]山茶‘耐冬’愈伤组织诱导与植株再生[J]. 吴斌,李纪元,范正琪,商宏莉. 植物生理学报. 2013(04)
[5]过量表达OsAPX1基因增强水稻的抗热和抗氧化能力[J]. 安辽原,牛向丽,黄龙翔,刘永胜. 中国农业科技导报. 2012(05)
[6]矮壮素对毛竹的矮化效应研究[J]. 周建革,范明香,余水生,吴礼栋. 世界竹藤通讯. 2012(04)
[7]茶树品种及萎凋过程中叶片APX基因表达的qPCR分析[J]. 孙云,林玉玲,赖钟雄,江春柳. 福建农林大学学报(自然科学版). 2012(04)
[8]以木糖异构酶基因作为选择标记的花生遗传转化[J]. 丁霄,隋炯明,王晶珊,乔利仙. 核农学报. 2012(03)
[9]蝴蝶兰抗坏血酸过氧化物酶基因克隆及其表达研究[J]. 许传俊,孙叙卓,李玲,茹志伟,曾碧玉,刘育梅,黄珺梅. 园艺学报. 2012(04)
[10]杜梨CPI基因的克隆、序列分析及表达[J]. 李慧,丛郁,常有宏,蔺经,盛宝龙. 江苏农业学报. 2011(05)
博士论文
[1]荔波连蕊茶GA20-氧化酶和GA2-氧化酶基因调控株型的功能研究[D]. 肖政.中国林业科学研究院 2014
[2]山茶花MADS-box家族A类和C类基因克隆及功能分析[D]. 孙迎坤.中国林业科学研究院 2013
[3]红掌‘阿拉巴马’低温相关基因AOX、CAT和APX的表达分析、功能验证及遗传转化体系的构建[D]. 刘慧春.浙江大学 2012
[4]麻疯树pepc1基因的克隆及其调控烟草蛋白质和油脂合成的作用分析[D]. 范正琪.中国林业科学研究院 2010
[5]菊花花器官cDNA文库的构建及DgGA20ox基因克隆与表达分析[D]. 缪恒彬.南京农业大学 2009
[6]OsGA20ox2基因沉默降低水稻株高的研究[D]. 乔枫.南京农业大学 2007
[7]河北杨巯基蛋白酶抑制剂基因的分离和功能鉴定[D]. 刘会香.中国林业科学研究院 2006
[8]抗水稻白叶枯病细菌拮抗物质的研究[D]. 陈卫良.浙江大学 2001
硕士论文
[1]拟南芥赤霉素20-氧化酶3基因在ABA信号转导途径中的功能分析[D]. 申醒.吉林大学 2014
[2]棉花GhGME基因的克隆及其表达分析[D]. 王江英.甘肃农业大学 2012
[3]过量表达毛白杨APX基因增强植物对非生物胁迫的抗性[D]. 马箐.山东师范大学 2012
[4]木糖筛选系统在黄瓜转化中的应用[D]. 崔丽巍.东北师范大学 2010
[5]龙眼胚性培养物胞质型apx基因克隆及其表达研究[D]. 邵巍.福建农林大学 2008
[6]丹参APX和GPX基因克隆及其表达分析[D]. 韩立敏.陕西师范大学 2007
[7]毛白杨巯基蛋白酶抑制剂基因克隆研究[D]. 覃庆锋.北京林业大学 2005
本文编号：3334373
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