HP-PRRS重组NDV载体疫苗构建、免疫评价及其佐剂研究
发布时间：2021-08-14 10:25
高致病性猪繁殖与呼吸综合征（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome,HP-PRRS）,又称高致病性猪蓝耳病,被世界动物卫生组织（OIE）规定为必须报告的动物疫病,其致病因子为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV）。自2006年我国首次爆发HP-PRRS后,十多年来该病已经给我国养猪业造成了巨大的经济损失。HP-PRRS主要是以各阶段猪群的呼吸系统疾病以及妊娠母猪早产、流产、死胎等繁殖障碍为特征,并且造成较高的死亡率。近年来,随着HP-PRRS防控手段的多元化,疫病态势趋于良好,但仍存在散毒范围较广、毒株变异等问题,防控形势依然严峻。《国家高致病性猪蓝耳病防治指导意见（2017—2020年）》中指出,坚持以预防为主仍是当前的防控原则。进一步开发研制安全有效的HP-PRRS疫苗将有利于从源头控制疫病发生,有助于最终实现净化目标。病毒载体疫苗因兼备载体病毒...
【文章来源】：军事科学院北京市
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
重组病毒的构建策略Figure1.1Constructionstrategyofrecombinantviruses
军事科学院博士学位论文第26页提取HP-PRRSVGD株RNA，并反转录成cDNA。以其为模板，通过ORF3-F/ORF5-R引物进行PCR，成功扩增得到大小为1695bp的ORF3-ORF5片段（图1.2）。M1.DL5000M2.DL20001.目的片段ORF3-ORF52.阴性对照图1.2ORF3-ORF5目的片段的获取Figure1.2AmplificationresultsofORF3-ORF5fragments以pMD19-T为载体，通过TA连接酶成功构建质粒19T-ORF3-ORF5。将该质粒进行HindIII和BamHI双酶切，酶切产物经过1%琼脂糖凝胶电泳鉴定呈现出双条带（2692bp和1695bp），与预期的载体片段和目的片段大小相一致（图1.3）。将质粒送往吉林库美生物科技有限公司测序，测序结果与预期的目的片段相符。M1.DL2000M2.DL50001.原质粒2.双酶切产物图1.3质粒19T-ORF3-ORF5双酶切鉴定结果Figure1.3Identificationof19T-ORF3-ORF5bydoubleenzymesdigestion1.3.2同源重组目的片段的获取
军事科学院博士学位论文第26页提取HP-PRRSVGD株RNA，并反转录成cDNA。以其为模板，通过ORF3-F/ORF5-R引物进行PCR，成功扩增得到大小为1695bp的ORF3-ORF5片段（图1.2）。M1.DL5000M2.DL20001.目的片段ORF3-ORF52.阴性对照图1.2ORF3-ORF5目的片段的获取Figure1.2AmplificationresultsofORF3-ORF5fragments以pMD19-T为载体，通过TA连接酶成功构建质粒19T-ORF3-ORF5。将该质粒进行HindIII和BamHI双酶切，酶切产物经过1%琼脂糖凝胶电泳鉴定呈现出双条带（2692bp和1695bp），与预期的载体片段和目的片段大小相一致（图1.3）。将质粒送往吉林库美生物科技有限公司测序，测序结果与预期的目的片段相符。M1.DL2000M2.DL50001.原质粒2.双酶切产物图1.3质粒19T-ORF3-ORF5双酶切鉴定结果Figure1.3Identificationof19T-ORF3-ORF5bydoubleenzymesdigestion1.3.2同源重组目的片段的获取
【参考文献】：
期刊论文
[1]Identification of Nonstructural Protein 8 as the N-Terminus of the RNA-Dependent RNA Polymerase of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus[J]. Yuanyuan Liu,Yunhao Hu,Yue Chai,Liping Liu,Jiangwei Song,Shaochuan Zhou,Jia Su,Lei Zhou,Xinna Ge,Xin Guo,Jun Han,Hanchun Yang. Virologica Sinica. 2018(05)
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白的亚细胞定位与功能预测[J]. 赵孟孟,冯丽丽,张二芹,马红芳,冯松林,崔甜甜,杨春辉,王文佳,邢星,张雅,冯嘉萍,张桂红. 河南农业科学. 2016(12)
[3]高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗（JXA1-R株）对猪瘟疫苗免疫效果的影响[J]. 付显东,李召,朱凤霞,李华. 黑龙江畜牧兽医. 2016(22)
[4]黄芪多糖和氧化苦参碱协同增强鸡新城疫疫苗免疫效果研究[J]. 陈茜,邢玉娟,陈玉库,胡元亮,王德云,蔡丙严. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2015(06)
[5]中草药治疗高致病性猪蓝耳病探析[J]. 刘益光,蒋太运. 湖北畜牧兽医. 2014(04)
[6]高致病性猪蓝耳病灭活疫苗和弱毒疫苗的免疫效果试验[J]. 陈玉华. 浙江畜牧兽医. 2014(01)
[7]油乳佐剂及其安全性研究进展[J]. 陈世豪,郝同杨,施祖灏,高玉时,陆俊贤. 中国家禽. 2013(16)
[8]复方中药多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响[J]. 乔海博,谷新利,朱晓庆. 石河子大学学报(自然科学版). 2012(06)
[9]猪蓝耳病灭活苗应用对相关疫病免疫控制的影响[J]. 陈伟杰,张城,赵灵燕,周彩琴,倪柏锋,吴赟竑,周蕾,徐辉. 畜牧与兽医. 2011(05)
[10]中药作为疫苗佐剂的研究概况[J]. 罗燕,谷新利,李星艳. 中国兽医杂志. 2009(08)
博士论文
[1]新城疫病毒样颗粒的构建及免疫原性和免疫机制研究[D]. 钱晶.吉林大学 2017
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导Tregs细胞和中和抗体的功能蛋白及其关键氨基酸位点的解析[D]. 范宝超.南京农业大学 2015
[3]美洲型、欧洲型PRRSV及PCV2基因工程疫苗构建及实验免疫研究[D]. 任静强.吉林大学 2014
[4]甘肃省猪繁殖障碍性疾病病毒性病原的分子流行病学调查及HP-PRRSV DNA疫苗的研究[D]. 郝晓芳.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]表达高致病性猪蓝耳病GP3、GP5基因DNA疫苗构建及实验免疫研究[D]. 赵冠宇.吉林大学 2019
[2]欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗构建及实验免疫研究[D]. 曹亮.吉林农业大学 2016
本文编号：3342297
【文章来源】：军事科学院北京市
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
重组病毒的构建策略Figure1.1Constructionstrategyofrecombinantviruses
军事科学院博士学位论文第26页提取HP-PRRSVGD株RNA，并反转录成cDNA。以其为模板，通过ORF3-F/ORF5-R引物进行PCR，成功扩增得到大小为1695bp的ORF3-ORF5片段（图1.2）。M1.DL5000M2.DL20001.目的片段ORF3-ORF52.阴性对照图1.2ORF3-ORF5目的片段的获取Figure1.2AmplificationresultsofORF3-ORF5fragments以pMD19-T为载体，通过TA连接酶成功构建质粒19T-ORF3-ORF5。将该质粒进行HindIII和BamHI双酶切，酶切产物经过1%琼脂糖凝胶电泳鉴定呈现出双条带（2692bp和1695bp），与预期的载体片段和目的片段大小相一致（图1.3）。将质粒送往吉林库美生物科技有限公司测序，测序结果与预期的目的片段相符。M1.DL2000M2.DL50001.原质粒2.双酶切产物图1.3质粒19T-ORF3-ORF5双酶切鉴定结果Figure1.3Identificationof19T-ORF3-ORF5bydoubleenzymesdigestion1.3.2同源重组目的片段的获取
军事科学院博士学位论文第26页提取HP-PRRSVGD株RNA，并反转录成cDNA。以其为模板，通过ORF3-F/ORF5-R引物进行PCR，成功扩增得到大小为1695bp的ORF3-ORF5片段（图1.2）。M1.DL5000M2.DL20001.目的片段ORF3-ORF52.阴性对照图1.2ORF3-ORF5目的片段的获取Figure1.2AmplificationresultsofORF3-ORF5fragments以pMD19-T为载体，通过TA连接酶成功构建质粒19T-ORF3-ORF5。将该质粒进行HindIII和BamHI双酶切，酶切产物经过1%琼脂糖凝胶电泳鉴定呈现出双条带（2692bp和1695bp），与预期的载体片段和目的片段大小相一致（图1.3）。将质粒送往吉林库美生物科技有限公司测序，测序结果与预期的目的片段相符。M1.DL2000M2.DL50001.原质粒2.双酶切产物图1.3质粒19T-ORF3-ORF5双酶切鉴定结果Figure1.3Identificationof19T-ORF3-ORF5bydoubleenzymesdigestion1.3.2同源重组目的片段的获取
【参考文献】：
期刊论文
[1]Identification of Nonstructural Protein 8 as the N-Terminus of the RNA-Dependent RNA Polymerase of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus[J]. Yuanyuan Liu,Yunhao Hu,Yue Chai,Liping Liu,Jiangwei Song,Shaochuan Zhou,Jia Su,Lei Zhou,Xinna Ge,Xin Guo,Jun Han,Hanchun Yang. Virologica Sinica. 2018(05)
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白的亚细胞定位与功能预测[J]. 赵孟孟,冯丽丽,张二芹,马红芳,冯松林,崔甜甜,杨春辉,王文佳,邢星,张雅,冯嘉萍,张桂红. 河南农业科学. 2016(12)
[3]高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗（JXA1-R株）对猪瘟疫苗免疫效果的影响[J]. 付显东,李召,朱凤霞,李华. 黑龙江畜牧兽医. 2016(22)
[4]黄芪多糖和氧化苦参碱协同增强鸡新城疫疫苗免疫效果研究[J]. 陈茜,邢玉娟,陈玉库,胡元亮,王德云,蔡丙严. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2015(06)
[5]中草药治疗高致病性猪蓝耳病探析[J]. 刘益光,蒋太运. 湖北畜牧兽医. 2014(04)
[6]高致病性猪蓝耳病灭活疫苗和弱毒疫苗的免疫效果试验[J]. 陈玉华. 浙江畜牧兽医. 2014(01)
[7]油乳佐剂及其安全性研究进展[J]. 陈世豪,郝同杨,施祖灏,高玉时,陆俊贤. 中国家禽. 2013(16)
[8]复方中药多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响[J]. 乔海博,谷新利,朱晓庆. 石河子大学学报(自然科学版). 2012(06)
[9]猪蓝耳病灭活苗应用对相关疫病免疫控制的影响[J]. 陈伟杰,张城,赵灵燕,周彩琴,倪柏锋,吴赟竑,周蕾,徐辉. 畜牧与兽医. 2011(05)
[10]中药作为疫苗佐剂的研究概况[J]. 罗燕,谷新利,李星艳. 中国兽医杂志. 2009(08)
博士论文
[1]新城疫病毒样颗粒的构建及免疫原性和免疫机制研究[D]. 钱晶.吉林大学 2017
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导Tregs细胞和中和抗体的功能蛋白及其关键氨基酸位点的解析[D]. 范宝超.南京农业大学 2015
[3]美洲型、欧洲型PRRSV及PCV2基因工程疫苗构建及实验免疫研究[D]. 任静强.吉林大学 2014
[4]甘肃省猪繁殖障碍性疾病病毒性病原的分子流行病学调查及HP-PRRSV DNA疫苗的研究[D]. 郝晓芳.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]表达高致病性猪蓝耳病GP3、GP5基因DNA疫苗构建及实验免疫研究[D]. 赵冠宇.吉林大学 2019
[2]欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗构建及实验免疫研究[D]. 曹亮.吉林农业大学 2016
本文编号：3342297
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