STAT5对水牛乳腺上皮细胞增殖和乳蛋白基因表达的调控作用及乳腺组织的定量蛋白质组学研究
发布时间：2021-08-20 03:37
信号转导与激活因子5（Signal transducer and activator 5,STAT5）是一类胞内转录因子,由STAT5a和STAT5b基因编码,在体内受催乳素（Prolactin,PRL）诱导参与乳腺发育和泌乳过程。研究表明,STAT5a和STAT5b通过时空特异性表达,在细胞内募集特定因子参与基因的转录调控,进而影响乳腺细胞增殖和分化,但对其具体调控机制尚不清楚。目前有关STAT5基因功能的研究主要以人、小鼠等为材料,对其在水牛乳腺发育和泌乳过程中的作用尚未见报道。本研究首先分析水牛STAT5a和STAT5b基因表达模式,通过调控俩者基因表达,研究其对乳腺上皮细胞增殖及乳蛋白相关基因表达的影响;然后通过转录组学方法分析PRL作用下的乳腺上皮细胞差异表达基因,采用ChIP-PCR法分析STAT5a和STAT5b与靶基因相互作用;最后应用定量蛋白质组学技术研究不同发育时期水牛乳腺组织差异表达蛋白,并对重要差异表达蛋白进行验证,以便为进一步探索水牛乳腺发育及泌乳生理机制奠定理论基础。研究取得如下结果:1.水牛STA和SaTAT5b基因及其启动子的克隆和分析克隆并分析了水牛S...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：190 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１乳腺腺泡基本结构ｍ??Ｆｉｇ．１－１?Ｔｈｅ?ｂａｓｉｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｍａｍｍａｒｙ?ａｃｉｎａｒ??
图１－２乳腺不同发育时期的模式??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?ｍａｍｍａｒｙ?ｇｌａｎｄｓ??于雌性哺乳动物的乳腺器官而言，早在胚胎时期，在乳腺脂肪组织内就形管分支结构，但这时期的发育还是和胚胎发育同步，直到新生儿时期。胚组织主要由上皮细胞以及围绕周围的基质细胞构成，这一时期显著的特点的细胞分化状态，发生在胚胎发育的早期阶段，乳线从外胚层细胞分化形脊状结构，并且随着胚胎的不断生长，乳腺会逐渐延伸直到乳带区的最边不断生长，细胞分裂，形成球状的乳蕾。胚胎发育至乳蕾阶段，就标志了分化阶段，不同的物种呈现了不同的特征，如雌性和雄性乳蕾的差异，雌雄性则呈球形。这一阶段己经发现包括了?ＷｎｔｌＯｂ以及Ｗｎｔ信号通路在内，另外，：基因的转录，以及ＦＧＦ信号分子等也是乳腺早期胚胎发育子ｔ２１，２２：！。??
采用Ｔｒｉｚｏｌ法抽提水牛乳腺组织总ＲＮＡ，琼脂糖凝胶电泳检测结果可以看到，提取??的总ＲＮＡ具有完整的三条带，２８ｓ和１８ｓ条带清楚且亮度相比较在２倍左右，说明所提??取的ＲＮＡ质量良好（图２－１）。??Ｌ：?ｉ－??２８Ｓ—＿?ｆ：??１８Ｓ?—Ｖ??？ｓ??图２－１水牛乳腺组织总ＲＮＡ提取结果??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?ｂｕｆｆａｌｏ?ｍａｍｍａｒｙ?ｇｌａｎｄ?ｔｉｓｓｕｅ??２．２水牛？ＳＭｒＪａ和基因编码区克隆及分析??２．２．１水牛５７＾７＾和５７＾７＾基因ＣＤＳ扩增??设计基因特异性扩增引物，以水牛乳腺组织ｃＤＮＡ为模板，扩??増得到长度分别在２５００ｂｐ大小左右的特异性扩增条带（图２－２）。??３２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶山羊乳腺发育的超微结构研究[J]. 曲波,王学东,崔琳,李庆章. 中国乳品工业. 2008(11)
[2]奶牛乳腺上皮细胞系的建立及高温对细胞超微结构的影响[J]. 杜娟,狄和双,王根林. 生物工程学报. 2007(03)
博士论文
[1]转PRL基因小鼠模型的构建与Stat5a的乳腺发育调控机理研究[D]. 任艳萍.广西大学 2014
[2]水牛乳腺基因表达谱与生长激素转基因水牛的初步研究[D]. 王锦.广西大学 2013
硕士论文
[1]GABRP对水牛乳腺上皮细胞增殖以及泌乳相关基因表达的影响[D]. 郝文艳.广西大学 2016
[2]山羊STAT3和STAT5A基因SNPs、mRNA表达及甲基化对生产性能的影响[D]. 吴贤锋.西北农林科技大学 2015
[3]奶牛泌乳性状相关基因启动子甲基化分析[D]. 郑宜文.东北农业大学 2013
本文编号：3352732
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：190 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１乳腺腺泡基本结构ｍ??Ｆｉｇ．１－１?Ｔｈｅ?ｂａｓｉｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｍａｍｍａｒｙ?ａｃｉｎａｒ??
图１－２乳腺不同发育时期的模式??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?ｍａｍｍａｒｙ?ｇｌａｎｄｓ??于雌性哺乳动物的乳腺器官而言，早在胚胎时期，在乳腺脂肪组织内就形管分支结构，但这时期的发育还是和胚胎发育同步，直到新生儿时期。胚组织主要由上皮细胞以及围绕周围的基质细胞构成，这一时期显著的特点的细胞分化状态，发生在胚胎发育的早期阶段，乳线从外胚层细胞分化形脊状结构，并且随着胚胎的不断生长，乳腺会逐渐延伸直到乳带区的最边不断生长，细胞分裂，形成球状的乳蕾。胚胎发育至乳蕾阶段，就标志了分化阶段，不同的物种呈现了不同的特征，如雌性和雄性乳蕾的差异，雌雄性则呈球形。这一阶段己经发现包括了?ＷｎｔｌＯｂ以及Ｗｎｔ信号通路在内，另外，：基因的转录，以及ＦＧＦ信号分子等也是乳腺早期胚胎发育子ｔ２１，２２：！。??
采用Ｔｒｉｚｏｌ法抽提水牛乳腺组织总ＲＮＡ，琼脂糖凝胶电泳检测结果可以看到，提取??的总ＲＮＡ具有完整的三条带，２８ｓ和１８ｓ条带清楚且亮度相比较在２倍左右，说明所提??取的ＲＮＡ质量良好（图２－１）。??Ｌ：?ｉ－??２８Ｓ—＿?ｆ：??１８Ｓ?—Ｖ??？ｓ??图２－１水牛乳腺组织总ＲＮＡ提取结果??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?ｂｕｆｆａｌｏ?ｍａｍｍａｒｙ?ｇｌａｎｄ?ｔｉｓｓｕｅ??２．２水牛？ＳＭｒＪａ和基因编码区克隆及分析??２．２．１水牛５７＾７＾和５７＾７＾基因ＣＤＳ扩增??设计基因特异性扩增引物，以水牛乳腺组织ｃＤＮＡ为模板，扩??増得到长度分别在２５００ｂｐ大小左右的特异性扩增条带（图２－２）。??３２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶山羊乳腺发育的超微结构研究[J]. 曲波,王学东,崔琳,李庆章. 中国乳品工业. 2008(11)
[2]奶牛乳腺上皮细胞系的建立及高温对细胞超微结构的影响[J]. 杜娟,狄和双,王根林. 生物工程学报. 2007(03)
博士论文
[1]转PRL基因小鼠模型的构建与Stat5a的乳腺发育调控机理研究[D]. 任艳萍.广西大学 2014
[2]水牛乳腺基因表达谱与生长激素转基因水牛的初步研究[D]. 王锦.广西大学 2013
硕士论文
[1]GABRP对水牛乳腺上皮细胞增殖以及泌乳相关基因表达的影响[D]. 郝文艳.广西大学 2016
[2]山羊STAT3和STAT5A基因SNPs、mRNA表达及甲基化对生产性能的影响[D]. 吴贤锋.西北农林科技大学 2015
[3]奶牛泌乳性状相关基因启动子甲基化分析[D]. 郑宜文.东北农业大学 2013
本文编号：3352732
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