cAMP/PKA信号通路在树突状细胞影响调节性T细胞稳态方面的作用

发布时间：2021-09-05 16:34

　　树突状细胞（Dendritic cell, DC）是宿主机体先天免疫系统中的一员,它是一种高效的抗原提呈细胞,可感知和捕获外界刺激,决定宿主是否启动免疫防御以及启动何种免疫防御,DC对机体免疫反应的调节可通过一定的信号通路。调节性T细胞（Regulatory T cell, Treg ）是一种免疫抑制细胞,在平衡免疫反应和免疫耐受中发挥关键作用,其稳态可以受到DC的调节。但具体通过怎样的分子途径仍然未知。本研究利用PKA调节亚单位R1αf/f小鼠模型和Cbl-b-/-C-cblf/f小鼠模型,构建了R1α和Cbl-b/C-cbl在DC细胞中条件性敲除小鼠,结果证实,DC中cAMP/PKA信号通路和Cbl信号通路均在其调节Treg稳态中发挥作用,并在此基础上深入研究cAMP/PKA信号通路在DC中的作用,及其调节Treg稳态的机制。1 cAMP/PKA和Cb1信号通路均参与树突状细胞对调节性T细胞稳态的影响为研究DC影响Treg稳态可以通过哪条信号通路,我们利用实验室现有R1αf1f小鼠模型和Cbl-b-/C-cblf/f小鼠模型,构建了他们在DC细胞中的敲除小鼠。DC敲除R1α,PKA... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：135 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1 细菌毒力与宿主防御之间的关系
        1.1 影响细菌毒力的机制
        1.2 细菌与宿主间的互作
        1.3 猪链球菌与宿主间的互作
    2 G蛋白耦联受体信号通路在病原菌引起的宿主免疫中的作用
        2.1 G蛋白耦联受体信号通路
        2.2 第二信使cAMP/PKA系统在G蛋白传递信号中的作用
        2.3 G蛋白耦联受体信号通路在病原菌感染宿主中的作用
    3 树突状细胞的G蛋白耦联受体信号通路在宿主免疫中的作用
        3.1 树突状细胞在宿主免疫中的作用
        3.2 G蛋白耦联受体信号通路在树突状细胞中的作用
    参考文献
第二章 cAMP/PKA和Cb1信号通路均参与树突状细胞对调节性T细胞稳态的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验动物
        2.2 抗体及试剂
        2.3 淋巴细胞的提取
        2.4 细胞表面染色
        2.5 细胞胞内染色
        2.6 统计分析
    3 结果
        3.1 cbl-b~(-/-)C-cbl~(DCKO)和R1α~(DCKO)小鼠构建示意图
        3.2 DC中敲除基因C-cbl和R1α对淋巴器官形态学方面的影响
        3.3 DC中敲除基因C-cbl和R1α对其自身细胞数量和分布的影响
        3.4 DC中敲除基因C-cbl和R1α对Treg稳态的影响
    4 讨论
    参考文献
第三章 cAMP/PKA信号通路在树突状细胞中激活对其自身发育和功能的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验动物
        2.2 抗体与试剂
        2.3 骨髓细胞的分离
        2.4 骨髓移植
        2.5 BMDC FLT-3L体外培养
        2.6 体外培养DC体内适应性转移
        2.7 ER Cre R1α~(KO)小鼠骨髓移植及诱导
        2.8 皮肤细胞的分离
    3 结果
        3.1 R1α~(DCKO)小鼠表型是由细胞内在变异引起
        3.2 R1α~(DCKO)小鼠表型是由cAMP/PKA信号通路激活引起
        3.3 R1α~(DCKO)小鼠骨髓中preDC发育正常
        3.4 R1α~(DCKO)小鼠体外培养BMDC发育正常
        3.5 R1α~(DCKO)小鼠体内环境对外源DC表达MHCⅡ的影响
        3.6 R1α~(DCKO)小鼠皮肤DC减少
        3.7 R1α~(DCKO)小鼠脾脏DC增殖
        3.8 R1α~(DCKO)小鼠DC中趋化因子受体CCR7表达量升高
    4 讨论
    参考文献
第四章 R1α基因敲除小鼠的树突状细胞可通过cAMP/PKA信号通路影响调节性T细胞的稳态
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验动物
        2.2 抗体与试剂
        2.3 qPCR测定IL-2 mRNA水平表达量
        2.4 IL-2体外刺激及胞内染色
        2.5 体外DC抗原提呈能力实验
        2.6 ELISA测定OTIICD4~+T细胞上清IL-2的分泌
        2.7 CD4~+T细胞体内适应性转移及体内IL-2封闭
    3 结果
        3.1 R1α~(DCKO)小鼠对体内适应性转移Treg的影响
        3.2 R1α~(DCKO)小鼠脾脏增殖Treg的类型
        3.3 R1α~(DCKO)小鼠淋巴器官IL-2的表达
        3.4 R1α~(DCKO)小鼠脾脏增殖Treg与IL-2的关系
        3.5 R1α~(DCKO)小鼠体内IL-2的主要分泌源的鉴定
        3.6 R1α~(DCKO)小鼠脾脏DC与IL-2分泌的关系
        3.7 R1α~(DCKO)小鼠S2DC的MHCⅡ在刺激IL-2分泌中的作用
    4 讨论
    参考文献
第五章 生理状态下的树突状细胞可通过cAMP/PKA信号通路影响调节性T细胞的稳态
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验动物
        2.2 抗体及试剂
        2.3 紫外线照射
        2.4 皮肤表皮FITC涂抹及腹部皮肤细胞分离
        2.5 体内pGE2封闭实验
    3 结果
        3.1 静息状态下淋巴结S2DC的形成
        3.2 紫外线照射对皮肤DC迁移的影响
        3.3 紫外线照射对皮肤引流淋巴结Treg稳态的影响
        3.4 紫外线照射对体内适应性转移Treg稳态的影响
        3.5 紫外线照射引起的Treg增殖与cAMP/PKA信通路的关系
    4 讨论
    参考文献
第六章 (国内研究部分)猪链球菌2型转录调控因子Tran功能的研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 菌株及培养方法
        2.2 猪链球菌2型ZY05719菌株tran基因敲除株以及互补株的构建
        2.3 细菌生长特性研究
        2.4 基因芯片的构建和分析
        2.5 RNA的提取和荧光定量PCR的验证
        2.6 细菌在葡萄糖缺陷培养基中的生长特性
        2.7 测定菌株对外界环境不同PH值和氧化的耐受
        2.8 HEp-2细胞粘附特性比较
        2.9 斑马鱼模型的毒力实验
        2.10 统计分析
    3 结果
        3.1 猪链球菌2型ZY05719敲除株△tran和互补株C△tran的建立
        3.2 敲除株△tran生物学特性分析
        3.3 基因芯片分析受Tran调控的基因
        3.4 qPCR验证基因芯片结果
        3.5 不同菌体对于葡萄糖缺陷和外界环境应激耐受能力的差异
        3.6 Tran敲除导致细菌毒力下降
    4 讨论
    参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录


【参考文献】：
期刊论文
[1]Ultraviolet-induced alloantigen-specific immunosuppression in transplant immunity[J]. Tomohide Hori,Kagemasa Kuribayashi,Kanako Saito,Linan Wang,Mie Torii,Shinji Uemoto,Taku Iida,Shintaro Yagi,Takuma Kato.  World Journal of Transplantation. 2015(01)



本文编号：3385700