热休克蛋白在防治蛋白稳态失衡性疾病和损伤中的作用
发布时间：2021-09-07 10:38
细胞蛋白稳态失衡会导致各种疾病和损伤,例如人类的亨廷顿综合征（Huntington’s Disease,HD）和动物的热应激损伤。亨廷顿综合征是人类医学中典型的由于蛋白稳态失衡性导致的神经退行性疾病。该病的发生是由于患者体亨廷顿基因（Huntingtingene）发生突变,过长的CAG重复序列编码出过长的多聚谷氨酰胺链,使得变异的亨廷顿蛋白（mutant Huntingtin,mHtt）发生异常聚集引起的。随着mHtt在细胞内的积累,最终可形成直径达2 μm的内涵体（Inclusion）,神经细胞失去功能,甚至死亡。热应激损伤是畜牧生产过程中较为常见的蛋白稳态失衡性损伤,特别是热应激对禽类的损伤。暴露于高热环境会导致禽鸟体内多个器官衰竭,尤其是心脏的损伤,极易导致动物猝死,给畜牧业生产带来经济损失。在人类对抗HD的过程中发现了一些因子可以通过修复蛋白稳态来抑制mHtt蛋白聚合。我们试图将人类医学中的关于蛋白稳态失衡性疾病的理论和成果应用到动物医学中。利用热休克蛋白具有纠正细胞内蛋白稳态失衡的作用,通过诱导鸡心肌细胞中热休克蛋白的表达实现降低热应激对心肌细胞的损伤。1、Foxo1防止mH...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１?Ｆｏｘｏｌ特异性降低ｍＨｔｔ的表达并抑制ｍＨｔｔ发生聚合??ａ）Ｆｏｘｏｌ降低了可溶性（２％ＳＤＳ）?ＨＡＱ４３的表达；ｂ）Ｆｏｘｏｌ降低了?ＨＡＱ４３的聚合；ｃ，ｄ）定量分??析细胞中可溶性ＨＡＱ４３和ＨＡＱ４３聚合物的含量；ｅ，ｆ）尽管Ｆｏｘｏｌ对ｍＨｔｔ的表达和聚合具有抑??制作用，但却没有影响ＧＦＰ的表达
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【参考文献】：
期刊论文
[1]急性热应激对肉仔鸡生长性能及脂肪代谢的影响[J]. 刘梅. 动物营养学报. 2011(05)
[2]热应激对荷斯坦奶牛生产性能和乳脂脂肪酸组成的影响[J]. 李征,梅成,郭智成. 中国乳品工业. 2009(09)
[3]氧化应激对大鼠心肌梗死后心室重构的影响[J]. 周淑娴,周艳,雷娟,张玉玲. 南方医科大学学报. 2008(11)
[4]热应激对肉鸡生长、肉品质及脂肪沉积的影响[J]. 卢庆萍,张宏福. 中国家禽. 2008(12)
[5]雏鸡心肌细胞分离及原代培养[J]. 魏宗波,苗向阳,杨鸣琦,王富宁,罗绪刚. 中国家禽. 2008(12)
[6]奶牛热应激研究进展[J]. 郭辉,杨膺白,李丽莉. 乳业科学与技术. 2007(02)
[7]热应激对肉仔鸡增重和饲料蛋白质利用率的影响[J]. 吴长德,崔亚利,常现雨,方永辉,韩伟. 中国畜牧兽医. 2005(04)
[8]肉鸡热应激病理损伤与应激蛋白(HSP70)相关性研究[J]. 鲍恩东,龚远英,J.Hartung,付旭彬,王小军,张海涛,王志亮. 中国农业科学. 2004(02)
[9]鸡心肌细胞培养及免疫组化鉴定[J]. 董世山,乔健,赵立红,杨玉成,孙茂红,张建军. 中国兽医杂志. 2003(03)
[10]热应激对雏鸡自然杀伤（NK）细胞活性和T淋巴细胞转化率的影响[J]. 张洪英,鲍恩东. 南京农业大学学报. 2000(04)
博士论文
[1]不同锰源对体外原代培养肉仔鸡心肌细胞MnSOD基因表达的调节及其机制研究[D]. 高天权.四川农业大学 2011
硕士论文
[1]肉仔鸡热应激机理的研究[D]. 宁章勇.山东农业大学 2002
[2]肉鸡急性热应激损伤及其机理的研究[D]. 付旭彬.南京农业大学 2002
本文编号：3389397
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１?Ｆｏｘｏｌ特异性降低ｍＨｔｔ的表达并抑制ｍＨｔｔ发生聚合??ａ）Ｆｏｘｏｌ降低了可溶性（２％ＳＤＳ）?ＨＡＱ４３的表达；ｂ）Ｆｏｘｏｌ降低了?ＨＡＱ４３的聚合；ｃ，ｄ）定量分??析细胞中可溶性ＨＡＱ４３和ＨＡＱ４３聚合物的含量；ｅ，ｆ）尽管Ｆｏｘｏｌ对ｍＨｔｔ的表达和聚合具有抑??制作用，但却没有影响ＧＦＰ的表达
Ｓ?ａｎｄ?Ｈｓｐｂ６?ａｒｅ?ｂｅｙｏｎｄ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｂｙ??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｉｎｇ．??２．３?Ｆｏｘｏｌ没有通过任何已知的通路加速ｍＨｔｔ的降解??细胞内错配蛋白可以通过多种途径进行降解，有研究报道指出，Ｆｏｘｏｌ可以诱导??自噬的发生［２８．２９］。为了验证Ｆｏｘｏｌ抑制ｍＨｔｔ聚集的作用是否与任何已知或者未知的??蛋白降解途径有关，我们用３５Ｓ标记了?ＧＦＰＱ４３并追踪了?ＧＦＰＱ４３的降解速率。??试验结果显示，Ｆｏｘｏｌ并没有改变细胞总蛋白的降解速率（图２－５，?ｃ，ｄ），说明??Ｆｏｘｏｌ的抗蛋白聚集作用是特异性的。试验结果也同时显示，ＧＦＰＱ４３的降解速率并??没有因为Ｆｏｘｏｌ的介入而加快。由此可见，Ｆｏｘｏｌ抑制ｍＨｔｔ聚合的作用是不依赖于??任何蛋白降解途径的。??３）?ｂ）?Ｃ〇ｆｉｔｒ〇ｌ－Ｋ３ＦＰＱ４３?Ｃ〇ｆｉＴｒ〇ｉ＊ＧＦＰ０４３??Ｃｏｎｔｆ〇ＫＧＦＰＱ４３?（ｈ＞?３．５－；?２?４?ａ?２１?Ｔｉｍｅ?（ｈｉ?ＣＳ?＊?２?二?ｅ?２１??Ｔ．ｒｗ｛ｔｉ）?０．５?１?２?４?８?２１?ＢＳＳＢ?Ｈ?ｒ?＞??ＧＦＰＮＨ＊?ｍＡ?ａ－ｔｕｂｕｌ：ｎ?＾?ａ－ｔｕｂｕｌｒ?一?一一—Ｈ??ｃ）?ｄ）??Ｒｅｌａｔｗｅ?ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ?ｏ？?ＧＦＰＣ（４?３?Ｒｅ?ｄｅｇｒａｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＷＣＥ??－？－Ｃｏｎｔｒｏｌ?‘?Ｃｏｎｔｒｏｌ??了?一■－?Ｆｏｏｌ??０?５－??０．０?Ｉ?１?ｋ?１?１?ｉ?０?０＂?１?１?｜?１?１??０?５?１０?１５?２０?２５?〇?５?１０
??第三章ＨｓｐＢ７防止ｍＨｔｔ聚集的机理???Ｎ－ｔｅｒｍｉｎｕｓ?Ａｌｐｈａ?ｃｒｙｓｔａＨｉｎ?Ｃ－ｔｅｒｍｉｎｕ？??１?Ｓｗｉｎｅｓｔｒｅｔｃｈ?ｎ?ｗ?ｔ７〇??Ｈｓｐ６７Ａ１６??Ｈｓｐ６７Ａ３１??Ｈｓｐ６７Ａ７３??ＨｓｐＢ７ＡＳ１７－２９?｜??图３－１?Ｎ端缺失的ＨＳＰＢ７分子示意图??基于野生型ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＩ７ＴＯ－ｖ５－ＨｓｐＢ７，逐段敲除ＨｓｐＢ７的Ｎ端氨基酸序列的结构示意图。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｎ－ｔｅｒｍｉｎｕｓ?ｄｅｐｌｅｔｅｄ?ＨｓｐＢ７??Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?Ｎ－ｔｅｒｍｉｎｕｓ?ｄｅｐｌｅｔｅｄ?ＨｓｐＢ７?ｍｕｔａｎｔｓ?ｗｅｒｅ?ｇｅｎｅｒａｔｅｄ?ｂｙ?ｓｉｔｅ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ?ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ?ｆｒｏｍ??ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ－ｖ５－ＨｓｐＢ７．??ＨｓｐＢ７Ｎ?端［１－７３］与?ｐｏｌｙＱ４３、ｐｏｌｙＱ７４、ＨｓｐＢｌ?和?ＨｓｐＢ５?的融合蛋白结构如图?３－２??和３－３所示。简而言之，通过常规ＰＣＲ从ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ－ｖ５－ＨｓｐＢｌＷＴ和??ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ－ｖ５－ＨｓｐＢ５ＷＴ扩增出不含Ｎ端的野生型ＨｓｐＢｌ和ＨｓｐＢ５，同时向目??的片段其Ｎ端和Ｃ端分别插入Ｎｈｅｌ和Ｎｏｔｌ酶切位点。用同样的方法获取??Ｂａｍｆｆｌ－ＨｓｐＢ７［ｌ－７３］－ＮｈｅＩ片段，即ＨｓｐＢ７Ｎ端，并保留其Ｎ端的ｖ５ｔａｇ。分别用限制??性核酸内切酶（＃Ｒ３１３６，?＃Ｒ３１３１，＃Ｒ３１８９，?ＮＥＢ，英国）从ＢａｍＨＩ和Ｎｏｔｌ处切开骨??架分子?ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／Ｔ０，ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ－Ｑ４３－ｅｇｆｐ，或
【参考文献】：
期刊论文
[1]急性热应激对肉仔鸡生长性能及脂肪代谢的影响[J]. 刘梅. 动物营养学报. 2011(05)
[2]热应激对荷斯坦奶牛生产性能和乳脂脂肪酸组成的影响[J]. 李征,梅成,郭智成. 中国乳品工业. 2009(09)
[3]氧化应激对大鼠心肌梗死后心室重构的影响[J]. 周淑娴,周艳,雷娟,张玉玲. 南方医科大学学报. 2008(11)
[4]热应激对肉鸡生长、肉品质及脂肪沉积的影响[J]. 卢庆萍,张宏福. 中国家禽. 2008(12)
[5]雏鸡心肌细胞分离及原代培养[J]. 魏宗波,苗向阳,杨鸣琦,王富宁,罗绪刚. 中国家禽. 2008(12)
[6]奶牛热应激研究进展[J]. 郭辉,杨膺白,李丽莉. 乳业科学与技术. 2007(02)
[7]热应激对肉仔鸡增重和饲料蛋白质利用率的影响[J]. 吴长德,崔亚利,常现雨,方永辉,韩伟. 中国畜牧兽医. 2005(04)
[8]肉鸡热应激病理损伤与应激蛋白(HSP70)相关性研究[J]. 鲍恩东,龚远英,J.Hartung,付旭彬,王小军,张海涛,王志亮. 中国农业科学. 2004(02)
[9]鸡心肌细胞培养及免疫组化鉴定[J]. 董世山,乔健,赵立红,杨玉成,孙茂红,张建军. 中国兽医杂志. 2003(03)
[10]热应激对雏鸡自然杀伤（NK）细胞活性和T淋巴细胞转化率的影响[J]. 张洪英,鲍恩东. 南京农业大学学报. 2000(04)
博士论文
[1]不同锰源对体外原代培养肉仔鸡心肌细胞MnSOD基因表达的调节及其机制研究[D]. 高天权.四川农业大学 2011
硕士论文
[1]肉仔鸡热应激机理的研究[D]. 宁章勇.山东农业大学 2002
[2]肉鸡急性热应激损伤及其机理的研究[D]. 付旭彬.南京农业大学 2002
本文编号：3389397
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