重组杨树菇凝集素（rAAL）的佐剂效应及机理研究
发布时间：2021-09-23 05:39
杨树菇凝集素（Agrocybe aegerita lectin,AAL）是从杨树菇中提取的一种活性成分,前期研究证明其具有抗病毒、刺激小鼠脾脏淋巴细胞增殖的作用,作为灭活病毒疫苗佐剂,可以提高小鼠抗病毒的抗体水平。禽流感病毒在全世界范围内流行,不仅会感染禽,给养禽业造成巨大损失,引发公共卫生问题,还会感染哺乳动物和人。疫苗免疫被证实是防治禽流感流行的有效方法。前期研究表明原核表达重组的AAL（rAAL）也具有增强免疫反应的作用,为了研究rAAL的佐剂效果,探讨佐剂的作用机理,开展以下试验:一、rAAL对灭活禽流感病毒H9N2的佐剂作用选择20±2g健康雄性Babl/c小鼠50只,随机分成5组,每组10只,分别为空白对照组、佐剂阴性对照组、佐剂阳性对照组（铝盐组）、0.5mg rAAL组、2.5mg rAAL组。空白对照组每只小鼠仅注射0.2ml PBS,其余各组每只小鼠注射0.1ml H9N2灭活病毒（灭活前病毒血凝效价27、70℃加热15min灭活）;佐剂阴性对照组再混合注射0.1ml PBS、佐剂阳性对照组（铝盐组）混合注射0.1ml铝盐,其余两组分别混合注射0.1ml rAAL（...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：173 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
转录组原理（岳桂东等2012）
N2抗体水平。结果如图2-1所示，PBS组（佐剂阴性对照组）、铝盐组（佐剂阳性对照组）、0.5mg rAAL组、2.5mg rAAL组血清中H9N2抗体滴度分别为5.43±1.94、9.64±1.00、7.28±0.82、7.79±0.77；与PBS组对比，铝盐组血清抗体水平显著升高（P＜0.05），2.5mg rAAL组血清抗体水平显著提高（P＜0.05），0.5mg rAAL组没有显著改变血清中H9N2抗体水平。图 2-1 免疫小鼠血清 H9N2抗体水平。**P＜0.01、*P＜0.05。Fig. 2-1 H9N2-specific IgG levels of immunized mice. **P＜0.01 , *P＜0.05.2.2 免疫小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖能力分离得到了rAAL、铝盐、PBS与灭活禽流感病毒H9N2共同免疫小鼠的脾脏淋巴细胞，进行体外培养，并用灭活H9N2病毒对脾脏淋巴细胞进行体外刺激，通过CCK-8
华中农业大学 2018 届博士研究生学位（毕业）论文30试剂盒检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞的增殖能力，结果如图2-2所示。A图为用PBS组小鼠脾脏淋巴细胞绘制的CCK-8标准曲线，经过比较加入CCK-8试剂后2、3、4h的OD值，绘制的标准曲线的相关性，发现加入CCK-8 3h的OD值标准曲线的相关系数最高为0.995。因此，分离各组小鼠脾脏淋巴细胞，体外培养，灭活H9N2病毒刺激后24h，加入CCK-8试剂后3h测定各处理组的OD值，计算细胞增殖能力，如图2-2B所示，佐剂阴性对照组、佐剂阳性对照组、0.5mg rAAL组、2.5mg rAAL组小鼠脾脏淋巴细胞的刺激指数分别为3.49±2.01、3.91±1.95、5.53±2.57、2.47±1.78。与空白组（0.99±0.46）相比，佐剂阴性对照组、佐剂阳性对照组和0.5mg rAAL组小鼠脾脏淋巴细胞的增殖能力极显著性增强（P＜0.01）
【参考文献】：
期刊论文
[1]ISCOM型白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞作用的研究[J]. 吴隼,黄琰,杨满,字友梅,马栋,贺立山. 重庆医学. 2016(04)
[2]不同佐剂对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌多价毒力因子疫苗免疫效果的影响[J]. 杨岚,郝永清,潘海婷,何焱,黄海碧. 中国兽医学报. 2015(11)
[3]RNA-Seq技术在瘤胃微生物研究中的应用进展[J]. 廖奇,刘旭川,李清,樊月圆,张春勇,杨舒黎,毛华明,冷静. 动物营养学报. 2015(04)
[4]免疫佐剂研发和临床转化的现状与发展趋势[J]. 刘洋,曹雪涛. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2014(02)
[5]转录组测序（RNA-seq）策略及其数据在分子标记开发上的应用[J]. 李小白,向林,罗洁,胡标林,田胜平,谢鸣,孙崇波. 中国细胞生物学学报. 2013(05)
[6]H5N1亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒双表达系统的构建及其在小鼠的免疫原性分析[J]. 樊惠英,林文耀,佟铁铸,张杰,叶昱,靳立明,张春雷,廖明. 畜牧兽医学报. 2013(03)
[7]IL-2对免疫激活和免疫耐受的双向调节作用[J]. 翟志敏. 中国药理学通报. 2013(03)
[8]吲哚2,3-双加氧酶作为信号分子参与免疫耐受的调节[J]. 杨阳,于益芝. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2012(03)
[9]高通量测序技术在动植物研究领域中的应用[J]. 岳桂东,高强,罗龙海,王军一,许姣卉,尹烨. 中国科学:生命科学. 2012(02)
[10]miR-124基因家族的分子进化与靶基因预测[J]. 彭娟,李思光,罗丹丹,罗玉萍. 生物技术通报. 2011(10)
博士论文
[1]NF-κB p65 siRNA转染体外抑制VSMC增殖和防治移植静脉内膜增生的实验研究[D]. 孟祥斌.山东大学 2015
[2]花生晚斑病抗性遗传特性研究[D]. 夏友霖.四川农业大学 2014
[3]HIV-1 DNA疫苗佐剂及两种病毒载体基因表达谱研究[D]. 侯爵.中国疾病预防控制中心 2013
[4]黄芪多糖脂质体免疫增强剂的研究与应用[D]. 袁海星.南京农业大学 2013
[5]H9N2亚型禽流感病毒与鸭坦布苏病毒的生物学特性研究及疫苗的初步研制[D]. 徐大伟.内蒙古农业大学 2012
[6]哮喘小鼠CD4+T细胞中miRNA的异常表达及其对Th2分化的靶向调控[D]. 酆孟洁.暨南大学 2012
[7]黄芪多糖纳米乳的制备及其免疫佐剂效应研究[D]. 李树鹏.西北农林科技大学 2012
[8]中药黄酮复方免疫增强剂EPI及其作用机理研究[D]. 范云鹏.南京农业大学 2012
[9]ITGB4BP调控TGF-β1表达的实验研究[D]. 彭旭.第三军医大学 2011
硕士论文
[1]miR-3473b在局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用及其机制研究[D]. 王小玉.苏州大学 2016
[2]烟曲霉感染小鼠肺组织相关microRNA的筛选与鉴定[D]. 陈菲.南方医科大学 2014
[3]药用真菌杨树菇中免疫佐剂效应组分的鉴定[D]. 杨青.华中农业大学 2010
[4]一种新的Th2高表达蛋白—嗜中性颗粒蛋白（NGP）的表达、纯化及其性质与功能初探[D]. 谢德鄂.华东师范大学 2006
本文编号：3405147
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：173 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
转录组原理（岳桂东等2012）
N2抗体水平。结果如图2-1所示，PBS组（佐剂阴性对照组）、铝盐组（佐剂阳性对照组）、0.5mg rAAL组、2.5mg rAAL组血清中H9N2抗体滴度分别为5.43±1.94、9.64±1.00、7.28±0.82、7.79±0.77；与PBS组对比，铝盐组血清抗体水平显著升高（P＜0.05），2.5mg rAAL组血清抗体水平显著提高（P＜0.05），0.5mg rAAL组没有显著改变血清中H9N2抗体水平。图 2-1 免疫小鼠血清 H9N2抗体水平。**P＜0.01、*P＜0.05。Fig. 2-1 H9N2-specific IgG levels of immunized mice. **P＜0.01 , *P＜0.05.2.2 免疫小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖能力分离得到了rAAL、铝盐、PBS与灭活禽流感病毒H9N2共同免疫小鼠的脾脏淋巴细胞，进行体外培养，并用灭活H9N2病毒对脾脏淋巴细胞进行体外刺激，通过CCK-8
华中农业大学 2018 届博士研究生学位（毕业）论文30试剂盒检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞的增殖能力，结果如图2-2所示。A图为用PBS组小鼠脾脏淋巴细胞绘制的CCK-8标准曲线，经过比较加入CCK-8试剂后2、3、4h的OD值，绘制的标准曲线的相关性，发现加入CCK-8 3h的OD值标准曲线的相关系数最高为0.995。因此，分离各组小鼠脾脏淋巴细胞，体外培养，灭活H9N2病毒刺激后24h，加入CCK-8试剂后3h测定各处理组的OD值，计算细胞增殖能力，如图2-2B所示，佐剂阴性对照组、佐剂阳性对照组、0.5mg rAAL组、2.5mg rAAL组小鼠脾脏淋巴细胞的刺激指数分别为3.49±2.01、3.91±1.95、5.53±2.57、2.47±1.78。与空白组（0.99±0.46）相比，佐剂阴性对照组、佐剂阳性对照组和0.5mg rAAL组小鼠脾脏淋巴细胞的增殖能力极显著性增强（P＜0.01）
【参考文献】：
期刊论文
[1]ISCOM型白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞作用的研究[J]. 吴隼,黄琰,杨满,字友梅,马栋,贺立山. 重庆医学. 2016(04)
[2]不同佐剂对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌多价毒力因子疫苗免疫效果的影响[J]. 杨岚,郝永清,潘海婷,何焱,黄海碧. 中国兽医学报. 2015(11)
[3]RNA-Seq技术在瘤胃微生物研究中的应用进展[J]. 廖奇,刘旭川,李清,樊月圆,张春勇,杨舒黎,毛华明,冷静. 动物营养学报. 2015(04)
[4]免疫佐剂研发和临床转化的现状与发展趋势[J]. 刘洋,曹雪涛. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2014(02)
[5]转录组测序（RNA-seq）策略及其数据在分子标记开发上的应用[J]. 李小白,向林,罗洁,胡标林,田胜平,谢鸣,孙崇波. 中国细胞生物学学报. 2013(05)
[6]H5N1亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒双表达系统的构建及其在小鼠的免疫原性分析[J]. 樊惠英,林文耀,佟铁铸,张杰,叶昱,靳立明,张春雷,廖明. 畜牧兽医学报. 2013(03)
[7]IL-2对免疫激活和免疫耐受的双向调节作用[J]. 翟志敏. 中国药理学通报. 2013(03)
[8]吲哚2,3-双加氧酶作为信号分子参与免疫耐受的调节[J]. 杨阳,于益芝. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2012(03)
[9]高通量测序技术在动植物研究领域中的应用[J]. 岳桂东,高强,罗龙海,王军一,许姣卉,尹烨. 中国科学:生命科学. 2012(02)
[10]miR-124基因家族的分子进化与靶基因预测[J]. 彭娟,李思光,罗丹丹,罗玉萍. 生物技术通报. 2011(10)
博士论文
[1]NF-κB p65 siRNA转染体外抑制VSMC增殖和防治移植静脉内膜增生的实验研究[D]. 孟祥斌.山东大学 2015
[2]花生晚斑病抗性遗传特性研究[D]. 夏友霖.四川农业大学 2014
[3]HIV-1 DNA疫苗佐剂及两种病毒载体基因表达谱研究[D]. 侯爵.中国疾病预防控制中心 2013
[4]黄芪多糖脂质体免疫增强剂的研究与应用[D]. 袁海星.南京农业大学 2013
[5]H9N2亚型禽流感病毒与鸭坦布苏病毒的生物学特性研究及疫苗的初步研制[D]. 徐大伟.内蒙古农业大学 2012
[6]哮喘小鼠CD4+T细胞中miRNA的异常表达及其对Th2分化的靶向调控[D]. 酆孟洁.暨南大学 2012
[7]黄芪多糖纳米乳的制备及其免疫佐剂效应研究[D]. 李树鹏.西北农林科技大学 2012
[8]中药黄酮复方免疫增强剂EPI及其作用机理研究[D]. 范云鹏.南京农业大学 2012
[9]ITGB4BP调控TGF-β1表达的实验研究[D]. 彭旭.第三军医大学 2011
硕士论文
[1]miR-3473b在局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用及其机制研究[D]. 王小玉.苏州大学 2016
[2]烟曲霉感染小鼠肺组织相关microRNA的筛选与鉴定[D]. 陈菲.南方医科大学 2014
[3]药用真菌杨树菇中免疫佐剂效应组分的鉴定[D]. 杨青.华中农业大学 2010
[4]一种新的Th2高表达蛋白—嗜中性颗粒蛋白（NGP）的表达、纯化及其性质与功能初探[D]. 谢德鄂.华东师范大学 2006
本文编号：3405147
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