猪流行性腹泻病毒血清学与抑制病毒入侵细胞的研究
发布时间：2021-11-11 12:47
猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是急性、高度传染性猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）的致病原,可感染所有日龄的猪,并在哺乳仔猪中引起较高的死亡率。本研究主要对PEDV编码的结构或非结构蛋白进行表达纯化,并以此为检测抗原建立敏感有效的血清学检测方法,对感染或免疫PEDV后不同日龄猪体内的抗体消长规律进行监测;同时以制备的抗PEDV的单抗为基础,对PEDV入侵机制进行初步研究。根据PEDV G2毒株（GenBank accession no.KU558701）基因序列设计特异性引物,以其cDNA为模板分别扩增PEDVS1、E、ORF3C、非结构蛋白nsp1、nsp2 以及nsp3 中 Ac（Acidic domain）、ADRP（ADP-ribose-1-monophosphatase domain）功能域,克隆到真核或原核表达载体中,构建重组表达质粒,利用真核或原核表达系统表达相应蛋白,并进行层析纯化,经SDS-PAGE检测、Westernblot鉴定正确后,作为免疫原,免疫新西兰大白兔,...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：129 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－３ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测ＯＲＦ３Ｃ重组蛋白（Ａ）和Ｅ重组蛋白（Ｂ）的表迗??
Ｍ．?Ｍａｒｋｅｒ；?１．未诱导菌；２．诱导菌Ｉ；?３．未诱导菌ＩＩ；?４．诱导菌ＩＩ；??５．菌ＩＩ裂解上清；６．菌ＩＩ裂解沉淀??图１－６ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测ＡＤＲＰ重组蛋白的表达??Ｆｉｇ．?１?－６?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｔｈ
Ｍ．?Ｍａｒｋｅｒ；?１．流穿液；２．含２０?ｍＭ咪哩的洗涤液；３．含４０?ｍＭ咪哩的洗涤液；??４、５均是含８０?ｍＭ咪唑的洗涤液；６、７、８均是含５００ｍＭ咮唑的洗脱液??图１－７重组蛋白ＡＤＲＰ的纯化??Ｆｉｇ．?１－７?Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪Delta冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 韦学雷,梁青青,曹贝贝,张君涛,韩丽,兰培英,胡慧. 中国兽医学报. 2018(01)
[2]我国部分省份猪流行性腹泻的流行病学监测[J]. 张志,董雅琴,刘爽,吴发兴,邵卫星,李晓成. 中国动物检疫. 2014(10)
[3]广西猪流行性腹泻流行病学调查[J]. 杜坚,蒋玉雯,白安斌,梁家幸,梁保忠,黄安国,姚瑞英,陈西宁. 动物科学与动物医学. 2004(06)
本文编号：3488884
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：129 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－３ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测ＯＲＦ３Ｃ重组蛋白（Ａ）和Ｅ重组蛋白（Ｂ）的表迗??
Ｍ．?Ｍａｒｋｅｒ；?１．未诱导菌；２．诱导菌Ｉ；?３．未诱导菌ＩＩ；?４．诱导菌ＩＩ；??５．菌ＩＩ裂解上清；６．菌ＩＩ裂解沉淀??图１－６ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测ＡＤＲＰ重组蛋白的表达??Ｆｉｇ．?１?－６?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｔｈ
Ｍ．?Ｍａｒｋｅｒ；?１．流穿液；２．含２０?ｍＭ咪哩的洗涤液；３．含４０?ｍＭ咪哩的洗涤液；??４、５均是含８０?ｍＭ咪唑的洗涤液；６、７、８均是含５００ｍＭ咮唑的洗脱液??图１－７重组蛋白ＡＤＲＰ的纯化??Ｆｉｇ．?１－７?Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪Delta冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 韦学雷,梁青青,曹贝贝,张君涛,韩丽,兰培英,胡慧. 中国兽医学报. 2018(01)
[2]我国部分省份猪流行性腹泻的流行病学监测[J]. 张志,董雅琴,刘爽,吴发兴,邵卫星,李晓成. 中国动物检疫. 2014(10)
[3]广西猪流行性腹泻流行病学调查[J]. 杜坚,蒋玉雯,白安斌,梁家幸,梁保忠,黄安国,姚瑞英,陈西宁. 动物科学与动物医学. 2004(06)
本文编号：3488884
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