α-烯醇化酶对籽鹅卵泡颗粒细胞功能的影响及相关机制研究

发布时间：2017-05-08 11:02

  本文关键词：α-烯醇化酶对籽鹅卵泡颗粒细胞功能的影响及相关机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：籽鹅是世界上产蛋性能较高的鹅品种之一，研究籽鹅卵泡发育的调控机制具有重要的理论与实际意义。颗粒细胞是卵泡中十分重要的细胞，，其在数量、分泌功能、激素受体表达量等方面的变化对卵泡发育具有重要的影响。在前期试验中，我们发现产蛋期籽鹅卵巢中α-烯醇化酶（α-enolase，ENO1）相对表达量显著高于产蛋前籽鹅卵巢，推测ENO1可能对卵泡发育具有重要调控作用。ENO1是一种糖酵解酶，主要催化2-磷酸甘油酸（2-glyceric acid phosphate，PGA）脱水，生成含高能磷酸键的磷酸烯醇式丙酮酸（Phosphoenolpyruvic acid，PEP）。 本试验依据禽类卵泡发育特点，研究ENO1在产蛋期籽鹅卵巢各级卵泡的组织学定位及表达规律，同时构建ENO1基因过表达和干扰表达重组质粒，转染原代培养的籽鹅F1级卵泡颗粒细胞，通过流式细胞术、实时荧光定量PCR、Westernblot等方法研究ENO1对籽鹅卵泡颗粒细胞糖酵解、激素分泌功能、生殖相关激素受体表达及增殖、凋亡的影响，为明确ENO1在禽类生殖生理中的作用提供实验和理论依据。 （1）采用H-E染色、免疫组化、Western blot等方法研究籽鹅不同等级卵泡颗粒细胞组织学结构及ENO1的表达规律，同时获得了不同等级卵泡ENO1mRNA、生殖相关激素受体促卵泡激素受体（Follicle stimulating hormone receptor,FSHR）、促黄体生成素受体（Luteinizing hormone receptor, LHR)、雌激素受体α（Estrogen receptor alpha, ERα)、雌激素受体β（Estrogen receptor beta, ERβ)、生长激素受体（Growth hormone receptor, GHR）、胰岛素样生长因子结合蛋白-1（Insulin-like growth factor binding protein-1, IGFBP-1）mRNA及凋亡相关基因Bcl-2和Caspase-3mRNA表达量的基础数据，为研究禽类产蛋机制奠定基础。 （2）成功构建了ENO1基因过表达和干扰表达重组质粒，获得了感染滴度能够达到1.1×1011pfu/mL的过表达重组腺病毒；实现了在原代培养籽鹅F1级卵泡颗粒细胞中的过表达和干扰表达，说明所构建ENO1基因重组质粒可用于下一步试验。 （3）ENO1基因干扰表达结果如下：①使籽鹅卵泡颗粒细胞摄取葡萄糖能力下降，细胞上清液丙酮酸、乳酸浓度下降；细胞三磷酸腺苷（Adenosinetriphosphate, ATP）含量和丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）mRNA表达量下降，提示ENO1基因干扰表达可减缓糖酵解进程；②促进卵泡颗粒细胞雌激素、孕酮和睾酮的分泌，降低抑制素分泌，同时下调生殖相关激素受体ERα、ERβ、GHR和IGFBP-1mRNA的表达量，说明ENO1基因干扰表达可通过调控颗粒细胞激素分泌功能和生殖相关激素受体基因的表达影响卵泡的生长发育；③使卵泡颗粒细胞增殖变慢，凋亡增加，G2/M期颗粒细胞比例增高，提示ENO1基因干扰表达可使原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞发生G2/M期阻滞，诱导细胞发生凋亡，抑制细胞增殖。 （4）ENO1基因过表达结果如下：①使籽鹅卵泡颗粒细胞上清液葡萄糖浓度下降，丙酮酸、乳酸浓度升高，细胞ATP含量和PK mRNA表达量升高，提示ENO1基因过表达可加速糖酵解进程，使颗粒细胞糖酵解供能所占比例增加；②促进颗粒细胞活化素、抑制素的分泌，抑制睾酮的分泌，同时促进ERα、ERβ、GHR和IGFBP-1mRNA的表达，提示ENO1基因过表达可通过下调颗粒细胞睾酮分泌、上调抑制素和活化素分泌及多种生殖激素受体基因表达进而调节颗粒细胞的功能和卵泡的发育；③促进颗粒细胞增殖、减少细胞凋亡并使G0/G1期颗粒细胞比例下降，S期和G2/M期颗粒细胞比例增高，提示ENO1基因过表达可诱导颗粒细胞DNA合成增加，使处于增殖期的颗粒细胞数量增加，促进细胞增殖，抑制细胞凋亡。 上述结果说明，ENO1可通过调控卵泡颗粒细胞的糖酵解、分泌功能、生殖激素受体表达、凋亡和细胞周期的时相性影响籽鹅卵泡的生长发育和排卵。
【关键词】：α-烯醇化酶 颗粒细胞 籽鹅 分泌 增殖 凋亡 激素受体
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S835
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文缩写词表12-14
• 前言14-18
• 第一篇 文献综述18-40
• 第1章 α-烯醇化酶研究进展18-30
• 1.1 ENO1的基本特征18-20
• 1.2 ENO1相关功能20-29
• 1.3 结语29-30
• 第2章 颗粒细胞的内分泌、生殖激素受体表达和增殖凋亡30-40
• 2.1 雌禽生殖生理基本特征30-31
• 2.2 颗粒细胞的内分泌功能31-35
• 2.3 促性腺激素及颗粒细胞生殖相关激素受体表达35-38
• 2.4 颗粒细胞的增殖和凋亡38-39
• 2.5 结语39-40
• 第二篇 研究内容40-116
• 第1章 不同等级卵泡ENO1的表达规律及生殖相关激素受体、凋亡相关基因表达量的检测40-62
• 1.1 材料与方法40-46
• 1.2 结果46-57
• 1.3 讨论57-61
• 1.4 小结61-62
• 第2章 ENO1基因过表达和干扰表达重组质粒的构建及在籽鹅卵泡颗粒细胞中的表达62-78
• 2.1 材料与方法62-69
• 2.2 结果69-75
• 2.3 讨论75-77
• 2.4 小结77-78
• 第3章 ENO1基因干扰表达对籽鹅卵泡颗粒细胞糖酵解、内分泌、生殖相关激素受体表达、增殖和凋亡的影响78-100
• 3.1 材料与方法78-81
• 3.2 结果81-91
• 3.3 讨论91-97
• 3.4 小结97-100
• 第4章 ENO1基因过表达对籽鹅卵泡颗粒细胞糖酵解、内分泌、生殖相关激素受体、增殖和凋亡的影响100-116
• 4.1 材料与方法100-101
• 4.2 结果101-110
• 4.3 讨论110-114
• 4.4 小结114-116
• 结论116-118
• 参考文献118-140
• 导师简介140-142
• 作者简介142-144
• 在学期间所取得的科研成果144-146
• 致谢146-147

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄炎坤,王彩玲,赵金艳;激素对家禽卵泡发育的调节[J];动物医学进展;2002年05期

2 田锦;李志敏;傅衍;王振玲;周珍辉;齐军U

本文编号：350987