水泡性口炎病毒M蛋白抑制宿主抗病毒反应机制的研究

发布时间：2022-01-04 19:17

　　水泡性口炎（Vesicular stomatitis）是一种由水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV）感染引起的牛、马、猪等多种动物和人以口炎为主要特征的人兽共患性传染病。临床特征表现为唇、舌、牙龈、乳头、蹄匣等部位出现水泡或溃疡。由于VSV在许多国家的流行蔓延造成世界肉类市场的混乱,同时使感染动物（如猪和牛）的生产能力下降而造成严重的经济损失。因此,该病对养殖业的潜在危害不容忽视,被世界动物卫生组织（OIE）列为必须通报的动物疫病。病毒感染是对人类威胁最大的病原微生物感染性疾病之一,天然免疫系统作为防御病原微生物感染的第一道防线,在抵御病毒感染的过程中发挥着极为重要的作用。而许多病毒在进化过程中产生抑制或逃逸宿主抗病毒反应的能力,大量的研究证实,水泡性口炎病毒基质（M）蛋白可以通过抑制宿主细胞转录、细胞mRNA由胞核向胞浆的转运、宿主蛋白的翻译等方式抑制宿主抗病毒蛋白的表达,从而阻断宿主的抗病毒反应以利于自身复制。其中有关M蛋白抑制细胞mRNA由胞核向胞浆的转运以及宿主细胞蛋白翻译的机制已有大量的研究报道,而M蛋白抑制宿主细胞转录的机制鲜有研究。... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

PCR扩增Flag-M、T7-IRES以及T7-IRES-Flag-M序列电泳图

第二篇 研究内容 第一章 VSV 及 M 蛋白对 BSR-T7/5 细胞转录抑制的研究白真核表达载体的构建及优化由于可以抑制宿主基因和自身的表达，因此常用的真核表达表达出 M 蛋白。为了克服上述问题，我们选用 T7 表达系统来将 T7 表达系统不同元件组合，构建出 pT-M1、pT-M2、pT-体，通过将这三个真核表达载体转染 BSR-T7/5 细胞后通过 M 蛋白的表达情况，如图 1.2 所示，pT-M1 未能够成功的表2 虽有少量的表达但不能满足后续试验的要求。将 pT-M2 进T-M3，该优化步骤显著的提升了 M 蛋白的表达量。因此该质并进一步命名为 pT-M（图 1.2）。

Real-time PCR 检测 VSV 对宿主细胞的转录抑验独立重复 3 次，n=3, *** p<0.01，n.s.:差异re 1.3 Detection the inhibitory effect on transc VSV using Real-time PCR. The data were averaent experiments. （n=3, *** p<0.01，n.s., no si制 BSR-T7/5 细胞的转录确定 VSV-M 蛋白是否也可以抑制 BSR-T7/5 ciferase 和 pT-M 质粒共同转染细胞，于转染后总 RNA,反转录后以 GAPDH 为内参，通过 qP用 spss 软件中的独立样本 T 检验分析数据，结 4h 显著的抑制了 luciferase 基因的转录。

【参考文献】：
期刊论文
[1]The nucleocapsid of vesicular stomatitis virus[J]. LUO Ming Department of Microbiology, the University of Alabama at Birmingham, Birmingham 35294, USA.  Science China（Life Sciences）. 2012(04)



本文编号：3568917