奶牛妊娠外泌体miRNA表达谱分析及其对早期子宫免疫微环境的调控机制研究
发布时间：2022-01-04 17:57
繁殖障碍性疾病对奶牛生产造成巨大损失,尽早诊断妊娠状况能够有效避免奶牛生产过程中的无效饲养、繁殖周期延长等问题。因此,探索奶牛正常妊娠相关的分子标记物对进一步理解母胎免疫耐受机制,指导奶牛实际生产具有非常重要的意义。由于绝大多数细胞均能够分泌外泌体,并且其分泌量和内容物（核酸、蛋白质和脂质等）在正常及病理状态下会存在显著差异,因此外泌体备受科研工作者关注。基于外泌体的分子诊断技术被认为是一项非常有前景的新型疾病诊疗手段。哺乳动物（包括人）妊娠期间大量胎盘源外泌体差异性携带miRNA进入母体血液循环,构成母体血液循环中外泌体主要成分,研究这些差异分拣的miRNA或可反映妊娠进展和胎儿的生长发育情况。此外,外泌体miRNA也可能参与调节哺乳动物妊娠期间胎儿免疫耐受的机制,但是其在奶牛妊娠过程中的功能研究鲜有报道。本文以不同妊娠时期荷斯坦奶牛为研究对象,运用高通量测序技术比较未孕（gestational day,GD 0）以及正常妊娠早期（GD 60）、中期（GD150）和晚期（GD 240）奶牛外周血浆...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
外泌体的鉴定
华中农业大学2020届博士研究生学位（毕业）论文52图5-2妊娠早期（G_D60），中期（G_D150）和晚期（G_D240）奶牛妊娠外泌体miRNAs差异分析。a.miRNA热图分析，红色和绿色分别表示上调和下调表达；b.组间miRNA维恩图。Fig.5-2DifferentialabundanceofmiRNAsinexosomesisolatedfromdairycowsduringearly(G_D60),mid(G_D150)andlatepregnancy(G_D240).a.HeatmapofthedifferentialabundanceofmiRNAs,Redandgreencolorsindicateup-anddownregulatedtranscripts,respectively;b.VenndiagramofthenumberofmiRNAsbetweengroups.表5-1妊娠各个时期显著富集的外泌体miRNAsTable5-1ThespecificexosomalmiRNAsduringeachpregnantstageb
华中农业大学2020届博士研究生学位（毕业）论文84表明，bta-miR-499可能是妊娠早期外泌体中调节子宫局部免疫微环境的关键因子。图5-3奶牛早期妊娠外泌体对TNF-α和IL-6表达的影响。a.外泌体摄取实验。PKH-67标记外泌体后与BEND细胞孵育，激光共聚焦显微镜观察；绿色荧光：PKH-67标记的外泌体，蓝色：BEND细胞核；b.qPCR检测外泌体孵育后BEND细胞TNF-α和IL-6表达，GAPDH为内参；c.qPCR检测奶牛未孕和妊娠早期血浆外泌体中bta-miR-499富集水平，U6为内参。结果以均数±标准差表示，和对照组相比，#P<0.05，##P<0.01；和LPS组相比，*P<0.05，**P<0.01。Fig.5-3Theeffectofp-EXOorn-EXOontheexpressionofTNF-αandIL-6.a.p-EXOwaslabeledbyPKH67(green),incubatedwithBENDcells,andthenobservedbyconfocalmicroscopy,cellnuclei(blue),exosomes(green);b.Theeffectofp-EXOorn-EXOonthemRNAlevelsoftheproinflammatorycytokinesTNF-αandIL-6;GAPDHwasusedastheinternalcontrol;c.Exosomalbta-miR-499levelswereanalyzedbyqPCR;U6wasusedastheinternalcontrol.G_D0andG_D60representedunpregnantandearlypregnantdairycows,respectively.Thevalueswerepresentedasmean±S.E.M.,#P<0.05,##P<0.01vs.Control;*P<0.05,**P<0.01vs.LPS.
本文编号：3568804
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
外泌体的鉴定
华中农业大学2020届博士研究生学位（毕业）论文52图5-2妊娠早期（G_D60），中期（G_D150）和晚期（G_D240）奶牛妊娠外泌体miRNAs差异分析。a.miRNA热图分析，红色和绿色分别表示上调和下调表达；b.组间miRNA维恩图。Fig.5-2DifferentialabundanceofmiRNAsinexosomesisolatedfromdairycowsduringearly(G_D60),mid(G_D150)andlatepregnancy(G_D240).a.HeatmapofthedifferentialabundanceofmiRNAs,Redandgreencolorsindicateup-anddownregulatedtranscripts,respectively;b.VenndiagramofthenumberofmiRNAsbetweengroups.表5-1妊娠各个时期显著富集的外泌体miRNAsTable5-1ThespecificexosomalmiRNAsduringeachpregnantstageb
华中农业大学2020届博士研究生学位（毕业）论文84表明，bta-miR-499可能是妊娠早期外泌体中调节子宫局部免疫微环境的关键因子。图5-3奶牛早期妊娠外泌体对TNF-α和IL-6表达的影响。a.外泌体摄取实验。PKH-67标记外泌体后与BEND细胞孵育，激光共聚焦显微镜观察；绿色荧光：PKH-67标记的外泌体，蓝色：BEND细胞核；b.qPCR检测外泌体孵育后BEND细胞TNF-α和IL-6表达，GAPDH为内参；c.qPCR检测奶牛未孕和妊娠早期血浆外泌体中bta-miR-499富集水平，U6为内参。结果以均数±标准差表示，和对照组相比，#P<0.05，##P<0.01；和LPS组相比，*P<0.05，**P<0.01。Fig.5-3Theeffectofp-EXOorn-EXOontheexpressionofTNF-αandIL-6.a.p-EXOwaslabeledbyPKH67(green),incubatedwithBENDcells,andthenobservedbyconfocalmicroscopy,cellnuclei(blue),exosomes(green);b.Theeffectofp-EXOorn-EXOonthemRNAlevelsoftheproinflammatorycytokinesTNF-αandIL-6;GAPDHwasusedastheinternalcontrol;c.Exosomalbta-miR-499levelswereanalyzedbyqPCR;U6wasusedastheinternalcontrol.G_D0andG_D60representedunpregnantandearlypregnantdairycows,respectively.Thevalueswerepresentedasmean±S.E.M.,#P<0.05,##P<0.01vs.Control;*P<0.05,**P<0.01vs.LPS.
本文编号：3568804
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