文昌鱼补体因子C1q和C3a基因的鉴定、表达和功能研究

发布时间：2022-11-05 05:06

　　文昌鱼是研究脊椎动物起源与进化的重要模式动物,研究文昌鱼补体系统有助于追溯脊椎动物补体系统的起源。补体系统是先天性免疫的重要组成部分,它能够帮助抗体和吞噬细胞清除病原微生物,从而起到连接先天性免疫和获得性免疫的重要作用,其激活途径一般认为有经典途径、替代途径和凝集素途径3条途径。我们从文昌鱼体内克隆得到补体类Clq基因和C3a基因,并进行了表达和功能研究。具体结果如下。在对文昌鱼基因组中C1q-like基因分析之后,我们从中选择并克隆了一个与脊椎动物C1q序列相似度高、含有与IgG、C1r-C1s吉合关键位点的基因。进化分析显示该基因与脊椎动物C1q直系同源,因此我们将之命名为BjC1q。Real-timePCR分析表明BjC1q基因在文昌鱼肝盲囊、后肠和脊索大量表达,并且其表达量在文昌鱼受到免疫刺激（细菌、脂磷壁酸或脂多糖）之后显著上升,这表明BjC1q参与免疫相关功能。接着,我们重组表达并纯化了BjC1q蛋白以及它的胶原结构域和gC1q结构域,并利用ELISA、 Western blot、溶血活性测定、亲和层析等技术,重点研究了BjC1q是否具有参与经典激活途径的能力。我们发现重组... 

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
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第一章 文献综述
    1 文昌鱼—发育与进化生物学的模式动物
        1.1 文昌鱼的发现和研究史
        1.2 文昌鱼的基本特征
    2 文昌鱼免疫系统研究进展
        2.1 文昌鱼免疫器官和免疫细胞
        2.2 文昌鱼获得性免疫的证据
        2.3 文昌鱼先天免疫
        2.4 文昌鱼补体系统研究进展
    3 C1q研究进展
        3.1 C1q蛋白的结构和功能
        3.2 含C1q球状结构域蛋白家族
    4 C3a研究进展
        4.1 C3a蛋白的结构和功能
        4.2 C3a的抗菌机理
    5 实验目的和研究路线
第二章 文昌鱼C1q-like基因的克隆、表达及功能分析
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 文昌鱼BjC1q基因全长的克隆
        2.2 BjC1q基因序列分析
        2.3 BjC1q基因RNA水平组织分布研究
        2.4 文昌鱼经细菌刺激后体内BjC1q基因RNA水平的变化研究
        2.5 BjC1q全长蛋白以及各结构域的重组表达
        2.6 BjC1q蛋白与脂多糖、脂磷壁酸的结合实验
        2.7 BjC1q蛋白与人IgG的结合实验
        2.8 文昌鱼体内与BjC1q互作蛋白的研究
        2.9 BjC1q蛋白的凝集实验
        2.10 BjC1q蛋白参与的溶血实验
        2.11 以ELISA为基础的经典途径检测
        2.12 BjC1q与C1r/C1s/MASP的结合实验
        2.13 文昌鱼体液中BjC1q的功能研究
    3 实验结果
        3.1 文昌鱼BjC1q基因全长的克隆
        3.2 BjC1q基因序列分析
        3.3 BjC1q基因组织特异性表达
        3.4 文昌鱼经细菌刺激后体内BjC1q基因RNA水平的变化
        3.5 BjC1q全长蛋白及gC1q结构域和胶原域的重组表达
        3.6 BjC1q蛋白与脂多糖、脂磷壁酸的结合实验结果
        3.7 BjC1q蛋白与人IgG的结合实验结果
        3.8 文昌鱼体内与BjC1q互作蛋白的研究结果
        3.9 BjC1q蛋白无凝集活性
        3.10 BjC1q蛋白参与的溶血实验结果
        3.11 以ELISA为基础的经典途径检测结果
        3.12 BjC1q与C1r/C1s/MASP的结合实验结果
        3.13 文昌鱼体液中BjC1q的功能
    4 讨论
第三章 文昌鱼C3a的克隆、表达及功能分析
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 文昌鱼体液补体活性实验
        2.2 文昌鱼C3a片段的基因克隆
        2.3 序列分析与同源建模
        2.4 BjC3a的重组表达与纯化
        2.5 BjC3a蛋白的抑菌实验
        2.6 BjC3a蛋白的趋化实验
        2.7 BjC3a蛋白对巨噬细胞吞噬作用的影响
        2.8 BjC3a蛋白对巨噬细胞呼吸爆发的影响
        2.9 BjC3a热稳定性检测
    3 实验结果
        3.1 文昌鱼体液补体活性
        3.2 文昌鱼C3a片段的基因克隆
        3.3 序列分析与同源建模
        3.4 BjC3a的重组表达与纯化
        3.5 BjC3a蛋白的抑菌实验结果
        3.6 BjC3a蛋白的趋化实验结果
        3.7 BjC3a蛋白对巨噬细胞吞噬作用的影响
        3.8 BjC3a蛋白对巨噬细胞呼吸爆发的影响
        3.9 BjC3a热稳定性检测结果
    4 讨论
总结与展望
参考文献
致谢
个人简历
发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Protochordate amphioxus is an emerging model organism for comparative immunology[J]. Shicui Zhang a, Yujun Liang a, Guangdong Ji a, Zhimeng Zhuang b a Department of Marine Biology, Ocean University of China, Qingdao 266003, China b Yellow Sea Fishery Research Institute, Chinese Academy of Fishery Science, Qingdao 266071, China.  Progress in Natural Science. 2009(08)



本文编号：3701970