PB2蛋白影响H10N8亚型AIV对小鼠和鸡适应性的关键位点研究
发布时间：2023-05-28 07:39
2013年12月,江西省报道了世界首例人感染H10N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的事件。H10N8亚型禽流感病毒在引起的3人感染中已造成2人死亡。而近年在北欧爆发的禽源H10N7流感病毒在海豹之间的感染说明H10亚型流感病毒可以跨越种间屏障感染哺乳动物和人。由于H10N8、H7N9的内部六个片段来源于H9N2,因此我们将这三种亚型的流感病毒称作H9N2源流感病毒。研究发现,H9N2源流感病毒PB2上的一些位点在近几年发生了有规律的变化,主要集中在292(I→V)、389(R→K)、598(T→M)、648(L→V)及676(T→M)。通过系统分析发现,H9N2源流感病毒的PB2片段292、389、588、598、648和676位点在2012年前后出现了明显的进化拐点。我们的研究已表明,除了627K和588V位点外,位点292V、648V和676M与禽源H10N8 AIV对哺乳动物的适应性有关。而我们所发现的与H9N2源AIV在哺乳动物适应性增强相关的位点292V、389K、588V、648V以及676M,近年来在H9N2源AIV中的比例也大大提...
【文章页数】：107 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
常用缩写词
第一章 前言
1.1 研究背景
1.1.1 流感概述
1.1.2 禽流感及禽流感的危害
1.1.3 H10亚型流感概述
1.1.4 流感病毒及流感病毒的理化特性
1.1.5 流感病毒的基因组结构及功能
1.1.6 vRNP的结构及功能
1.1.7 流感病毒的复制周期
1.1.8 流感病毒的进化与变异
1.1.9 禽流感病毒PB2蛋白的突变特点
1.2 研究的目的和意义
第二章 H10N8亚型禽流感病毒的遗传演化分析和PB2蛋白三维同源建模
2.1 引言
2.2 材料方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 设备软件
2.3 H10N8亚型禽流感病毒的遗传演化分析
2.3.1 H10N8亚型流感病毒HA基因的遗传演化分析
2.3.2 H10N8亚型禽流感病毒NA基因的遗传演化分析
2.3.3 H10N8亚型禽流感病毒M基因的遗传演化分析
2.3.4 H10N8亚型禽流感病毒NS基因的遗传演化分析
2.3.5 H10N8亚型禽流感病毒NP基因的遗传演化分析
2.3.6 H10N8亚型禽流感病毒PA基因的遗传演化分析
2.3.7 H10N8亚型禽流感病毒PB1基因的遗传演化分析
2.3.8 H10N8亚型禽流感病毒PB2基因的遗传演化分析
2.3.9 H9N2亚型禽流感病毒PB2基因的遗传演化分析
2.3.10 H9N2源流感病毒PB2蛋白中关键位点的分析
2.4 H10N8亚型禽流感病毒PB2蛋白三维同源建模
2.5 本章小结
第三章 H10N8亚型禽流感病毒复制能力的分析
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 菌株和病毒
3.2.2 质粒、细胞和鸡胚
3.2.3 酶和主要试剂
3.2.4 主要设备
3.3 实验方法
3.3.1 各突变病毒的拯救
3.3.2 各毒株在哺乳动物和禽源细胞上的聚合酶活性的测定
3.3.3 各毒株在哺乳动物细胞及禽源细胞上增殖能力的比较
3.4 实验结果与分析
3.4.1 各毒株在哺乳动物和禽源细胞上的聚合酶活性的测定结果
3.4.2 各毒株在哺乳动物细胞及禽源细胞上增殖能力的比较结果
3.5 本章小结
第四章 H10N8亚型禽流感病毒致病性研究
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 主要试剂
4.2.2 实验动物
4.2.3 主要设备
4.3 实验方法
4.3.1 各突变毒株EID50的测定
4.3.2 各突变毒株对BALB/c小鼠的致病性实验
4.3.3 双位点突变毒株的小鼠实验
4.3.4 小鼠肺脏病毒的检测
4.3.5 小鼠脑和鼻甲骨病毒滴度的检测
4.3.6 小鼠肺脏和脑病理切片的观察
4.3.7 四株突变病毒对SPF鸡的致病性实验
4.3.8 气管及各脏器病毒滴度的检测
4.3.9 咽拭子及泄殖腔拭子病毒滴度的检测
4.3.10 鸡肺脏病理切片的观察
4.3.11 血清抗体转阳检测
4.4 实验结果
4.4.1 各毒株EID50的结果
4.4.2 小鼠体重变化及存活情况检测结果
4.4.3 小鼠肺脏病毒的检测结果
4.4.4 A549细胞病毒检测结果
4.4.5 小鼠肺脏和脑病理切片的观察
4.4.6 SPF鸡气管病毒滴度的检测结果
4.4.7 SPF鸡咽拭子病毒滴度的检测结果
4.4.8 SPF鸡泄殖腔拭子病毒的检测结果
4.4.9 除气管外的其他脏器的病毒滴度的检测结果
4.4.10 鸡肺脏病理切片的观察结果
4.4.11 鸡血清抗体转阳检测结果
4.5 本章小结
第五章 全文讨论
致谢
参考文献
附录：科研成果
本文编号：3824226
【文章页数】：107 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
常用缩写词
第一章 前言
1.1 研究背景
1.1.1 流感概述
1.1.2 禽流感及禽流感的危害
1.1.3 H10亚型流感概述
1.1.4 流感病毒及流感病毒的理化特性
1.1.5 流感病毒的基因组结构及功能
1.1.6 vRNP的结构及功能
1.1.7 流感病毒的复制周期
1.1.8 流感病毒的进化与变异
1.1.9 禽流感病毒PB2蛋白的突变特点
1.2 研究的目的和意义
第二章 H10N8亚型禽流感病毒的遗传演化分析和PB2蛋白三维同源建模
2.1 引言
2.2 材料方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 设备软件
2.3 H10N8亚型禽流感病毒的遗传演化分析
2.3.1 H10N8亚型流感病毒HA基因的遗传演化分析
2.3.2 H10N8亚型禽流感病毒NA基因的遗传演化分析
2.3.3 H10N8亚型禽流感病毒M基因的遗传演化分析
2.3.4 H10N8亚型禽流感病毒NS基因的遗传演化分析
2.3.5 H10N8亚型禽流感病毒NP基因的遗传演化分析
2.3.6 H10N8亚型禽流感病毒PA基因的遗传演化分析
2.3.7 H10N8亚型禽流感病毒PB1基因的遗传演化分析
2.3.8 H10N8亚型禽流感病毒PB2基因的遗传演化分析
2.3.9 H9N2亚型禽流感病毒PB2基因的遗传演化分析
2.3.10 H9N2源流感病毒PB2蛋白中关键位点的分析
2.4 H10N8亚型禽流感病毒PB2蛋白三维同源建模
2.5 本章小结
第三章 H10N8亚型禽流感病毒复制能力的分析
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 菌株和病毒
3.2.2 质粒、细胞和鸡胚
3.2.3 酶和主要试剂
3.2.4 主要设备
3.3 实验方法
3.3.1 各突变病毒的拯救
3.3.2 各毒株在哺乳动物和禽源细胞上的聚合酶活性的测定
3.3.3 各毒株在哺乳动物细胞及禽源细胞上增殖能力的比较
3.4 实验结果与分析
3.4.1 各毒株在哺乳动物和禽源细胞上的聚合酶活性的测定结果
3.4.2 各毒株在哺乳动物细胞及禽源细胞上增殖能力的比较结果
3.5 本章小结
第四章 H10N8亚型禽流感病毒致病性研究
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 主要试剂
4.2.2 实验动物
4.2.3 主要设备
4.3 实验方法
4.3.1 各突变毒株EID50的测定
4.3.2 各突变毒株对BALB/c小鼠的致病性实验
4.3.3 双位点突变毒株的小鼠实验
4.3.4 小鼠肺脏病毒的检测
4.3.5 小鼠脑和鼻甲骨病毒滴度的检测
4.3.6 小鼠肺脏和脑病理切片的观察
4.3.7 四株突变病毒对SPF鸡的致病性实验
4.3.8 气管及各脏器病毒滴度的检测
4.3.9 咽拭子及泄殖腔拭子病毒滴度的检测
4.3.10 鸡肺脏病理切片的观察
4.3.11 血清抗体转阳检测
4.4 实验结果
4.4.1 各毒株EID50的结果
4.4.2 小鼠体重变化及存活情况检测结果
4.4.3 小鼠肺脏病毒的检测结果
4.4.4 A549细胞病毒检测结果
4.4.5 小鼠肺脏和脑病理切片的观察
4.4.6 SPF鸡气管病毒滴度的检测结果
4.4.7 SPF鸡咽拭子病毒滴度的检测结果
4.4.8 SPF鸡泄殖腔拭子病毒的检测结果
4.4.9 除气管外的其他脏器的病毒滴度的检测结果
4.4.10 鸡肺脏病理切片的观察结果
4.4.11 鸡血清抗体转阳检测结果
4.5 本章小结
第五章 全文讨论
致谢
参考文献
附录：科研成果
本文编号：3824226
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