灵芝多糖脂质体和脂质立方液晶纳米粒免疫增强作用的研究
发布时间：2023-10-21 09:35
灵芝是担子菌纲多孔科灵芝属真菌,是我国传统的补益药。现代药理学研究表明,灵芝多糖作为灵芝中主要的活性成分之一,具有调节免疫、抗衰老、抗肿瘤、保肝护肝、抗氧化和强心等作用。但灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP)属于大分子多糖,在应用时存在体内代谢较快,作用时间短、靶向性弱、易聚集等不足。因此,为了提高灵芝多糖靶向性或延长其作用时间,对其新剂型的开发显得尤为重要。脂质体是一种微小囊泡,它具有类似生物膜结构的磷脂双分子层。脂质体不仅能够有效递送药物,而且能作为疫苗递送系统。脂质立方液晶纳米粒具有两亲性脂质分散在水溶液中自组装成含双连续水区和脂质区的闭合脂质双层“蜂窝状”结构,能够包封各种不同极性和剂量的药物,具有多样化的药物包裹性,具有很多应用功能,如保护药物活性、控制药物释放、靶向给药以及阻止药物分子间发生聚集等。脂质立方液晶纳米粒因其独特的内部结构能够有效地运载药物或抗原。将灵芝多糖包封于脂质体和脂质立方液晶纳米粒中,不仅可以利用脂质体和脂质立方液晶纳米粒的良好药物载体优势帮助灵芝多糖有效递送,还可以利用二者优点,弥补二者不足,从而更有效地...
【文章页数】：151 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号及缩略语
第一章 文献综述
1 疫苗佐剂
1.1 佐剂在疫苗中的作用
1.2 疫苗的免疫应答
1.3 佐剂的免疫应答
2 纳米粒作为疫苗或药物递送系统的研究
2.1 脂质体
2.2 脂质立方液晶纳米粒
2.3 聚乳酸-羟基乙酸共聚物
2.4 聚谷氨酸
3 中药多糖的免疫调节作用
3.1 中药多糖对免疫器官的影响
3.2 中药多糖对免疫细胞的影响
3.3 中药多糖对细胞因子的影响
4 本研究的目的和意义
参考文献
第二章 灵芝多糖脂质体的制备及制备条件的优化
1 材料与仪器
1.1 试验药物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
2 方法
2.1 灵芝多糖脂质体的制备
2.2 灵芝多糖脂质体包封率的测定
2.3 灵芝多糖脂质体制备工艺的优化
2.4 灵芝多糖脂质体粒径的测定和形态观察
3 结果
3.1 单因素试验结果
3.2 BBD试验设计及分析
3.3 响应面结果分析
3.4 GLPL粒径以及电镜下的形态
4 讨论
参考文献
第三章 灵芝多糖脂质体对小鼠脾脏淋巴细胞增殖和分化的影响
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 试验药物
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 小鼠脾脏淋巴细胞增殖的测定
2.2 脾脏淋巴细胞分化的检测
2.3 数据分析
3 结果
3.1 药物单独刺激脾脏淋巴细胞增殖的变化
3.2 药物协同LPS刺激脾B淋巴细胞增殖的变化
3.3 药物协同PHA刺激脾T淋巴细胞增殖的变化
3.4 对小鼠脾脏淋巴细胞分化的作用
4 讨论
参考文献
第四章 灵芝多糖脂质体对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 试验药物
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的诱导、分离与培养
2.2 腹腔巨噬细胞活性检测
2.3 腹腔巨噬细胞吞噬能力测定
2.4 腹腔巨噬细胞表面分子MHCⅡ表达的测定
2.5 NO含量以及iNOS活性的测定
2.6 细胞因子含量测定
2.7 数据处理
3 结果
3.1 灵芝多糖脂质体对腹腔巨噬细胞活性的影响
3.2 灵芝多糖脂质体对腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响
3.3 GLPL对巨噬细胞表面表达分子MHCⅡ表达的影响
3.4 GLPL对细胞因子水平的影响
3.5 GLPL对巨噬细胞NO产量的影响
3.6 GLPL对巨噬细胞iNOS活性的影响
4 讨论
参考文献
第五章 灵芝多糖脂质体对OVA免疫小鼠的免疫增强作用
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 试验药物
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 粒径稳定性的测定
2.2 抗原包封率稳定性检测
2.3 动物分组及免疫程序
2.4 淋巴结中树突状细胞(DCs)表面分子的测定
2.5 淋巴细胞增殖的测定
2.6 小鼠脾脏T淋巴细胞分化的测定
2.7 血清中OVA特异性抗体及抗体亚型的测定
2.8 细胞因子的测定
2.9 数据分析
3 结果
3.1 OVA包封率的变化
3.2 粒径及PDI的变化
3.3 淋巴结中DCs的成熟
3.4 脾脏淋巴细胞增殖的变化
3.5 小鼠脾脏淋巴细胞的分化
3.6 OVA特异性IgG及其亚型的变化
3.7 细胞因子水平的变化
4 讨论
参考文献
第六章 灵芝多糖脂质体对PCV-2苗免疫小鼠的免疫增强作用
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 试验药物
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 疫苗配制
2.2 动物分组及处理
2.3 ELISA法测定PCV-2特异性IgG的浓度
2.4 ELISA法测定IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3的浓度
2.5 血清细胞因子含量测定
2.6 脾脏组织学分析
2.7 数据处理
3 结果
3.1 GLPL对血清中PCV-2特异性IgG及抗体亚型含量的影响
3.2 GLPL对血清中IL-4、IFN-γ、IL-17、IL-12p70和TNF-α含量的影响
3.3 脾脏组织学变化
4 讨论
参考文献
第七章 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒的制备方法优选及质量评价
1 材料与仪器
1.1 试验药物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
2 方法
2.1 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒的制备
2.2 乙醇分散法中分散介质的优化
2.3 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒包封率的测定
2.4 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒粒径和Zeta电位的测定
2.5 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒的形态观察
2.6 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒小角X散射测定
3 结果
3.1 两种制备方法对GLPC包封率的影响
3.2 乙醇分散法中不同分散介质对GLPC包封率和稳定性的影响
3.3 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒粒径及Zeta电势
3.4 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒表面形态
3.5 GLPC小角X散射分析
4 讨论
参考文献
第八章 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒对PCV-2苗免疫小鼠的免疫增强作用
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 试验药物
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 疫苗制备
2.2 动物分组及处理
2.3 血清中PCV-2特异性IgG含量的测定
2.4 血清中IgGl、IgG2a、IgG2b和IgG3浓度的测定
2.5 血清中细胞因子的测定
2.6 淋巴结中记忆T细胞反应的检测
2.7 检测淋巴结中抗原含量的检测
2.8 淋巴结中树突状细胞（DCs)表面分子的测定
2.9 数据处理
3 结果
3.1 血清中PCV-2特异性抗体和抗体亚型的变化
3.2 GLPC对血清中IL-4、IFN-γ、IL-17、IL-12p70和TNF-α含量的影响
3.3 淋巴结中抗原量变化
3.4 淋巴结中DCs的成熟
3.5 淋巴结中记忆T细胞的变化
4 讨论
参考文献
第九章 修饰后灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒对OVA免疫小鼠的免疫增强作用
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
2 方法
2.1 两种阳离子修饰灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒的制备及质量评价
2.2 两种修饰脂质立方液晶纳米粒对小鼠免疫OVA的免疫增强作用
2.3 脾脏组织转录组测序分析
2.4 数据分析
3 结果
3.1 不同修饰脂质立方液晶纳米粒的粒径、电势、OVA吸附率及SAXS分析
3.2 两种修饰脂质立方液晶纳米粒对小鼠免疫应答的影响
3.3 小鼠脾脏基因表达情况
4 讨论
参考文献
全文结论
论文创新点
攻读博士学位期间发表和完成的论文
致谢
本文编号：3855587
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【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号及缩略语
第一章 文献综述
1 疫苗佐剂
1.1 佐剂在疫苗中的作用
1.2 疫苗的免疫应答
1.3 佐剂的免疫应答
2 纳米粒作为疫苗或药物递送系统的研究
2.1 脂质体
2.2 脂质立方液晶纳米粒
2.3 聚乳酸-羟基乙酸共聚物
2.4 聚谷氨酸
3 中药多糖的免疫调节作用
3.1 中药多糖对免疫器官的影响
3.2 中药多糖对免疫细胞的影响
3.3 中药多糖对细胞因子的影响
4 本研究的目的和意义
参考文献
第二章 灵芝多糖脂质体的制备及制备条件的优化
1 材料与仪器
1.1 试验药物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
2 方法
2.1 灵芝多糖脂质体的制备
2.2 灵芝多糖脂质体包封率的测定
2.3 灵芝多糖脂质体制备工艺的优化
2.4 灵芝多糖脂质体粒径的测定和形态观察
3 结果
3.1 单因素试验结果
3.2 BBD试验设计及分析
3.3 响应面结果分析
3.4 GLPL粒径以及电镜下的形态
4 讨论
参考文献
第三章 灵芝多糖脂质体对小鼠脾脏淋巴细胞增殖和分化的影响
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 试验药物
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 小鼠脾脏淋巴细胞增殖的测定
2.2 脾脏淋巴细胞分化的检测
2.3 数据分析
3 结果
3.1 药物单独刺激脾脏淋巴细胞增殖的变化
3.2 药物协同LPS刺激脾B淋巴细胞增殖的变化
3.3 药物协同PHA刺激脾T淋巴细胞增殖的变化
3.4 对小鼠脾脏淋巴细胞分化的作用
4 讨论
参考文献
第四章 灵芝多糖脂质体对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 试验药物
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的诱导、分离与培养
2.2 腹腔巨噬细胞活性检测
2.3 腹腔巨噬细胞吞噬能力测定
2.4 腹腔巨噬细胞表面分子MHCⅡ表达的测定
2.5 NO含量以及iNOS活性的测定
2.6 细胞因子含量测定
2.7 数据处理
3 结果
3.1 灵芝多糖脂质体对腹腔巨噬细胞活性的影响
3.2 灵芝多糖脂质体对腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响
3.3 GLPL对巨噬细胞表面表达分子MHCⅡ表达的影响
3.4 GLPL对细胞因子水平的影响
3.5 GLPL对巨噬细胞NO产量的影响
3.6 GLPL对巨噬细胞iNOS活性的影响
4 讨论
参考文献
第五章 灵芝多糖脂质体对OVA免疫小鼠的免疫增强作用
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 试验药物
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 粒径稳定性的测定
2.2 抗原包封率稳定性检测
2.3 动物分组及免疫程序
2.4 淋巴结中树突状细胞(DCs)表面分子的测定
2.5 淋巴细胞增殖的测定
2.6 小鼠脾脏T淋巴细胞分化的测定
2.7 血清中OVA特异性抗体及抗体亚型的测定
2.8 细胞因子的测定
2.9 数据分析
3 结果
3.1 OVA包封率的变化
3.2 粒径及PDI的变化
3.3 淋巴结中DCs的成熟
3.4 脾脏淋巴细胞增殖的变化
3.5 小鼠脾脏淋巴细胞的分化
3.6 OVA特异性IgG及其亚型的变化
3.7 细胞因子水平的变化
4 讨论
参考文献
第六章 灵芝多糖脂质体对PCV-2苗免疫小鼠的免疫增强作用
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 试验药物
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 疫苗配制
2.2 动物分组及处理
2.3 ELISA法测定PCV-2特异性IgG的浓度
2.4 ELISA法测定IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3的浓度
2.5 血清细胞因子含量测定
2.6 脾脏组织学分析
2.7 数据处理
3 结果
3.1 GLPL对血清中PCV-2特异性IgG及抗体亚型含量的影响
3.2 GLPL对血清中IL-4、IFN-γ、IL-17、IL-12p70和TNF-α含量的影响
3.3 脾脏组织学变化
4 讨论
参考文献
第七章 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒的制备方法优选及质量评价
1 材料与仪器
1.1 试验药物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
2 方法
2.1 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒的制备
2.2 乙醇分散法中分散介质的优化
2.3 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒包封率的测定
2.4 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒粒径和Zeta电位的测定
2.5 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒的形态观察
2.6 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒小角X散射测定
3 结果
3.1 两种制备方法对GLPC包封率的影响
3.2 乙醇分散法中不同分散介质对GLPC包封率和稳定性的影响
3.3 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒粒径及Zeta电势
3.4 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒表面形态
3.5 GLPC小角X散射分析
4 讨论
参考文献
第八章 灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒对PCV-2苗免疫小鼠的免疫增强作用
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 试验药物
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
2 方法
2.1 疫苗制备
2.2 动物分组及处理
2.3 血清中PCV-2特异性IgG含量的测定
2.4 血清中IgGl、IgG2a、IgG2b和IgG3浓度的测定
2.5 血清中细胞因子的测定
2.6 淋巴结中记忆T细胞反应的检测
2.7 检测淋巴结中抗原含量的检测
2.8 淋巴结中树突状细胞（DCs)表面分子的测定
2.9 数据处理
3 结果
3.1 血清中PCV-2特异性抗体和抗体亚型的变化
3.2 GLPC对血清中IL-4、IFN-γ、IL-17、IL-12p70和TNF-α含量的影响
3.3 淋巴结中抗原量变化
3.4 淋巴结中DCs的成熟
3.5 淋巴结中记忆T细胞的变化
4 讨论
参考文献
第九章 修饰后灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒对OVA免疫小鼠的免疫增强作用
1 材料与仪器
1.1 试验动物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
2 方法
2.1 两种阳离子修饰灵芝多糖脂质立方液晶纳米粒的制备及质量评价
2.2 两种修饰脂质立方液晶纳米粒对小鼠免疫OVA的免疫增强作用
2.3 脾脏组织转录组测序分析
2.4 数据分析
3 结果
3.1 不同修饰脂质立方液晶纳米粒的粒径、电势、OVA吸附率及SAXS分析
3.2 两种修饰脂质立方液晶纳米粒对小鼠免疫应答的影响
3.3 小鼠脾脏基因表达情况
4 讨论
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全文结论
论文创新点
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