神经梅毒患者外周血液淋巴细胞亚群及脑脊液指标研究

【摘要】 梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum, Tp)引起的严重危害人类健康的性传播性疾病。Tp可以在疾病的任何阶段入侵中枢神经系统,引起神经梅毒。由于神经梅毒临床症状复杂,误诊与漏诊率极高,早期诊断非常重要。目前,神经梅毒的诊断主要是依靠患者的病史、临床症状与体征、血液和脑脊液(CSF)的相关实验室检查。本课题分析了52例HIV阴性的神经梅毒患者外周血淋巴细胞亚群及CSF常规、生化、免疫实验室指标的变化,通过兔感染模型,分析经Tp感染后,新西兰兔CSF RPR、TPPA、常规及生化指标随感染时间不同的变化情况。探讨神经梅毒患者细胞免疫和体液免疫相关实验室指标对临床的应用价值。实验结果表明CD3+T淋巴细胞与CD3+CD4+T淋巴细胞在炎症反应最剧烈的早期神经梅毒患者体内含量最低,与无症状和晚期神经梅毒患者相比,早期神经梅毒患者的CD3+CD4+/CD3+CD8+比值差异最大,反映了早期神经梅毒患者体内存在明显的细胞免疫失衡。与正常对照组相比,神经梅毒患者的CD3+CD8+T淋巴细胞数量升高,NK细胞数量下降。CD3+CD8+T淋巴细胞和NK细胞在不同临床阶段神经梅毒患者及健康体检者间的含量变化均具有统计学差异。CSF白细胞(WBC)、CSF蛋白、CSF自蛋白、白蛋白商、CSFIgG、CSF IgA、IgG指数和IgA指数的升高,CSF乳酸脱氢酶(LDH)的降低都与神经梅毒的进展密切相关。与Nichols标准株相比,临床分离的野生株感染新西兰兔引起的免疫反应较弱。临床不同来源的Tp野生株感染新西兰兔,导致新西兰兔的CSF WBC、CSF蛋白、CSF白蛋白以及CSF LDH随病程的进展,含量升高到一定水平又逐渐下降,这与不同临床阶段神经梅毒患者CSF相应指标表现类似。血液和脑脊液的相关实验室检测对于神经梅毒的诊断和病情监测具有重要的作用。
 
【关键词】 神经梅毒； 细胞免疫； 脑脊液；

第一章绪论

1.神经梅毒的临床与诊断
近10年来，中国的梅毒发病率逐年上升m。中国疾病预防控制中心的官方数据显示2013年我国梅毒的发病数为437686例，比2012年同期增长6.73%。报告发病数仅次于病毒性肝炎和肺结核居第三位，居于性传播疾病首位（中国疾病预防控制中心梅毒疫情已成为我国乃至全球高度关注的公共卫生问题【2-4】。2010年，卫生部制定《中国预防与控制梅毒规划(2010-2020年)》以遏制梅毒的蔓延。由于侵入神经系统可表现出各种神经系统疾病相似的临床症状，以至被称为“伟大的模仿者”或“伟大的魔术师”，因此临床上对神经梅毒的鉴别诊断较困难。比如临床中常见的神经梅毒所导致的麻搏性痴呆，其临床表现类似于精神病患者的精神分裂症，常规抗精神失常类药物无法控制这类患者的病情，类似的误诊导致延误患者的最佳治疗时机。早期神经梅毒可以产生神经功能障碍，晚期则产生不可逆的器质性损害和严重的功能障碍，甚至危及生命。

2.神经梅毒与免疫
人类对无先天或自然免疫，感染后，机体逐渐产生免疫力，包括体液免疫与细胞免疫。因此，梅毒的免疫是感染性免疫，即仅当机体有感染时，才有免疫力。硬下疳发生后1-3周，机体开始产生免疫反应，到二期梅毒时，机体免疫力达到高峰，以后逐渐消退。的免疫仅仅是不完全免疫，大多数患者不能完全清除部分能够逃避免疫系统的识别，侵入神经系统导致神经梅毒。
NK细胞是一类不需要特异性抗体参与或无需靶细胞上的MHC I类或MHC II类分子表达即可直接杀伤靶细胞的细胞。T细胞启动之前就与NK细胞一起构成细胞免疫系统的第一道防线，起着免疫监视的作用。NK细胞除本身可直接杀伤病原微生物外，尚可通过分泌IFN-y刺激巨噬细胞的吞噬作用，并进而刺激巨噬细胞分泌IL-12增加。IL-12是刺激CD4+T细胞向Thl方向转化的重要细胞因子，NK细胞通过分泌IFN-Y维持Thl的优势状态。NK细胞的存在决定着杀伤性T细胞（Cytotoxic!" lymphocyte，CTL)前体细胞向成熟CTL的分化并且控制着记忆细胞的形成。多位学者认为，NK细胞在清除7>方面起着重要作用，NK细胞的下降下调了机体对7>的细胞免疫能力，也从另一个方面解释了未治疗梅毒患者体内的Tp为何可以逃避免疫系统监视。
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第二章研究对象、材料和方法

1.研究对象
研究对象来自于2012年3月至2014年3月期间某附属中山医院神经内科住院患者，并且满足以下条件：(1)神经梅毒组：a.患者临床表现和实验室检査被诊断为神经梅毒；b. HIV抗体试验呈阴性；c.无其它己知的引起神经系统症状和体征的原因；d.无自身免疫性疾病，肿瘤以及无其它疾病引起的炎症反应。患者被划分为三组：无症状神经梅毒组（17例），早期神经梅毒组（包括脑膜神经梅毒和脑膜脑血管神经梅毒，共23例），晚期神经梅毒组（包括麻痹性痴呆和脊髓痨，共12例）（共52例，男/女=37/15，平均年龄51.6岁）。(2)健康对照组：同一时期医院的健康体检者（50例，男/女=36/14，平均年龄54.2岁）。(3)疾病对照组：非神经梅毒的梅毒患者（50例，男/女=35/15,平均年龄53.1岁）。

2.实验材料
全自动血液分析仪XE5000 日本Sysmex公司
全自动Roche-Hitachi Modular P800生化分析仪瑞士 Roche公司
流式细胞仪FACS Canto II 美国Becton Dickinson公司
特定蛋白分析仪 美国西门子公司

第三章神经梅毒患者的外周血淋巴细胞亚群分析.......... 18
1. 前言 ........18
2.研究对象 .......18
3.实验结果 .........19
第四章神经梅毒患者及兔感染模型的脑脊液指标分析 .........24
1.前言......... 24
2.研究对象 .........24
2.1患者 ..........24 
3.实验结果........ 25
3.1神经梅毒患者的脑脊液常规和生化指标分析.......... 25
3.2神经梅毒患者的血清及脑脊液免疫球蛋白分析...... 26

第四章神经梅毒患者及兔感染模型的脑脊液指标分析

1.前言
我们收集了 2012年3月至2014年3月在厦门大学附属中山医院神经内科就诊的患者52例，对其脑脊液常规、生化及免疫指标进行相关研宄。此外，我们选取实验组与对照组各12只雄性新西兰兔，成功建立兔感染模型，并将其随机分为4组，每组3只，在不同的时间段（7天，17天，25天，39天）抽取脑脊液进行相关的常规和生化指标分析。探讨神经梅毒患者的脑脊液指标在神经梅毒的诊断价值及脑脊液指标异常变化与病程的关系。

2.研究对象
收集2012年3月到20〗4年3月期间在厦门大学附属中山医院神经内科初次就诊的神经梅毒患者，满足条件的52例HIV阴性的神经梅毒患者纳入本次研宄，同一时期的神经内科住院进行脑脊液检查的患者（50例）作为对照组（见表5)。实验组与对照组各选用12只7抗原血清学检测阴性的雄性新西兰兔作为研宄对象。将新西兰兔饲养于室温（15°C-18°C)的环境中，用不含抗生素的饲料与水喂养新西兰兔。将实验组与对照组的新西兰兔各随机分为四组，每组3只。感染不同的7后在相应的时间段（7天，17天，25天，39天）麻醉新西兰兔，抽取脑脊液进行相关的常规和生化指标分析。这项研宄协议遵循1975年的《赫尔辛基宣言》的伦理指南，同时获得厦门大学医学院伦理委员会的批准。
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结论

1.与其它组相比，CD3+与CD3+CD4+T淋巴细胞在早期神经梅毒患者体内含量最低，与无症状和晚期神经梅毒患者相比，CD3+CD4+/CD3+CD8+比值在早期神经梅毒患者的差异最大，反映了早期神经梅毒患者体内存在明显的细胞免疫失衡。2.与正常对照组相比，神经梅毒患者的CD3+CD8+T淋巴细胞数量升高，NK细胞数量下降。CD3+CD8+T淋巴细胞和NK细胞在不同临床阶段神经梅毒患者及健康体检者间的含量变化均具有统计学差异。3.CSF白细胞、CSF蛋白、CSF白蛋白、白蛋白商、CSF IgG、CSF IgA、IgG指数和IgA指数的升高，CSF乳酸脱氢酶（LDH)的降低都与神经梅毒的进展密切相关。4.与Nicho丨s标准株相比，临床分离的野生株感染新西兰兔引起的免疫反应较弱。5.临床不同来源的7>野生株感染新西兰兔，导致新西兰兔的CSF WBC、CSF蛋白、CSF白蛋白及CSFLDH随病程的进展，含量升高到一定水平又逐渐下降，这与不同临床阶段神经梅毒患者CSF相应指标表现类似。

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