未成年兔腰椎结核模型的建立及外科干预的实验研究
【摘要】 目的：通过建立未成年兔脊柱结核模型，观察未成年兔后路脊柱内固定治疗脊柱结核对生长发育的影响情况，探讨小儿脊柱结核早期外科干预的效果。方法：将未成年兔腰4椎体钻孔植入结核标准菌株H37Rv，建立兔脊柱结核模型。将25只未成年兔随机分成5组，每组5只。A组，空白对照组，B组只行腰椎结核造模，不予以任何干预治疗；C组，抗痨组，行腰椎结核造模后，予以抗痨治疗；D组，抗痨+病灶清除组，行前路病灶清除后予以抗痨治疗；E组，抗痨+病灶清除+内固定组，行前路病灶清除联合后路内固定后，予以抗痨治疗。5组干预前均行腰椎CT，以测量L3-L5的椎管面积、椎管横径、椎管矢径、椎体横径、椎体矢径、椎体高度及L1-L7脊柱长度。对D、E组进行外科干预治疗，4w、8w、12w对5组均进行腰椎X线及CT，了解骨质融合及脊柱发育的情况，判断脊柱的稳定性及脊柱结核的治疗效果。结果：4w各组椎管面积、椎管横径、椎管矢状径、椎体横径、L3、L4、L5椎体高度、L1-L7脊柱长度，统计学分析各组之间无显著差异（P>0.O5）。8w、12w X线及CT测量，椎管面积、椎管横径、椎管矢状径、椎体横径、椎体矢状径：B、C、D、E组较A组有显著统计学差异（P<0.05）,A组优于B、C、D、E组；C、D、E组较B组有显著统计学差异（P<0.05），E组优于B、C、D组。各组L1-L7脊柱长度比较无统计学差异（P>0.05）。B、C、D、E组L3、L4、L5椎体高度无显著差异（P>0.05）。E组L4椎体高度小于L3、L5。结论：1.通过椎体钻孔植入结核菌的方法可以建立未成年兔脊柱结核模型。2.未成年兔腰椎结核在规律抗结核治疗的基础上，早期外科干预治疗的疗效要优于保守治疗，但内固定对脊柱发育有一定影响，主要是造成椎体高度降低，对椎管发育影响不大，其对脊柱整体发育的影响是有限的。
前言
近年来，肺结核在我国仍在流行，肺外结核一半累及脊柱，且有发病呈低龄化趋势。目前认为脊柱结核治疗的原则: 早期诊断, 早期治疗，稳定脊柱，恢复功能。
儿童正处于生长发育期, 其脊柱的解剖特点与成人不同, 因此小儿脊柱结核的临床特点与成人存在差异。儿童脊柱结核的发病和预后不同于成人。脊柱结核的发病率在生长发育期的儿童始终较高,其带来的远期并发症远比成人严重。不但在结核病变活动期可导致小儿畸形,而且在病变静止期由于儿童生长发育的需要，加之受累椎体的上下骨骺受到不同程度的破坏，使得椎体的前方、后方、侧方出现生长不平衡，同时影响椎体与椎弓之间的发育,最终导致已存在的后凸畸形进一步加重或伴有侧凸畸形。严重的脊柱畸形给患儿造成多方面的负面影响:①由于外观的异常导致出现多种心理问题包括自卑、孤僻、过分敏感等; ②心肺发育不全所致的功能障碍; ③由于脊髓持续受压，将导致迟发性瘫痪; ④严重影响身高与体态，⑤极易失去劳动力。
小儿脊柱结核的治疗目前没有统一的标准，处于探索阶段。由于儿童椎体软骨较多, 脊柱亦较软, 椎体处于生长发育阶段，椎体钉不易击入，常需先钻孔。目前手术治疗的方法常有 4 种：①前路病灶清除+植骨融合术;②单纯后路植骨融合术; ③前路病灶清除+植骨融合+后路植骨融合术;④单纯前路病灶清除术。为了保证椎体前后均衡生长只有施行前路病灶清除+植骨融合+后路植骨融合术和单纯前路病灶清除术。前路减压椎体间融合+后路固定术，这一术式可以有效的阻止神经功能进一步受损，预防迟发性瘫痪的发生。认为小儿脊柱结核的治疗中,如何有效化疗，并在此基础上, 如何选择脊柱结核的手术时机，如何彻底切除病灶、能否置入内固定，如何一期稳定脊柱等，都值得深入探讨。
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实验一 未成年兔腰椎结核模型建立
1.实验材料
1.1 主要试剂
人型结核分支杆菌标准菌株（H37Rv）菌株：湖南省结核病防治所
抗酸染色试剂盒：安徽省巢湖市弘慈医疗器械有限公司生产
HE 染色试剂盒：上海圻明生物科技有限公司生产
乌拉坦：规格 500g/瓶，湖南师范大学医学院生理学实验室提供
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2 实验方法
2.1 动物实验
30 只未成年兔随机取 25 只，25 只未成年兔先随机分成 5 组，每组 5 只，剩余 5 只作预留动物用。A 组，空白对照组；B 组只行腰椎结核造模，不予以任何干预治疗；C 组，抗痨组，行腰椎结核造模后，予以抗痨治疗；D 组，抗痨+病灶清除组，行前路病灶清除后予以抗痨治疗；E 组，抗痨+病灶清除+内固定组，行前路病灶清除联合后路内固定后，予以抗痨治疗。将标准菌株 H37Rv 菌株在湖南省结核病防治所检验科用罗氏培养基进行扩增 2 周和取生长良好的菌落，配成1mg/ml 的均匀菌悬液。将实验动物左侧腹部脱毛备皮，右侧卧固定在手术板上。用 25%乌拉坦，1g/kg 麻醉。常规消毒铺巾(图 2-1 至图 2-2)，取左侧腹膜外入路显露腰 3、4、5 椎体。从左前方向右后方在腰 4 椎体上部近椎间盘处钻0.3x0.8cm 的骨孔，骨孔内填入浸有结核菌悬液 1.0ml 的明胶海绵(图 2-3 至图2-4)。1-0 丝线间断关闭切口(图 2-5)。术后动物隔离分笼饲养。于 12w 动物处死后密封送医院焚烧处理，动物房紫外光照射消毒。
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实验二 未成年兔腰椎结核外科干预的实验研究............. 26-41
1.实验材料 ...............26-27
2.实验方法 ..................27-32
3.统计学方法 .................32
4.结果 ................32-39
讨论
脊柱是骨骼系统结核最常见的受累部位[7]，近年来脊柱结核发病率在发达国家及发展中国家均有升高的趋势。发展中国家较严重[8]，在我国有低龄化发展趋势。而对于处在生长发育阶段的儿童来说，治疗不当较易导致严重的后凸畸形。儿童腰椎脊柱结核治疗，特别是手术指征、手术方式固定节段等问题均存在争议。
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总 结
1.在未成年兔腰椎上钻孔植入浸有H37Rv标准菌株悬液的明胶海绵，可以建立了大体外观、影像学表现及组织病理与小儿脊柱结核相似的动物模型。
2. 未成年兔腰椎结核在规律抗结核治疗的基础上，早期外科干预治疗的疗效要优于保守治疗，但内固定对脊柱发育有一定影响，主要是造成椎体高度降低，其对脊柱整体发育的影响是有限的。对临床处理小儿脊柱结核有一定的指导意义。
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参考文献:
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- [4] 王汉林,李亚洲,王志强. 不同月龄幼兔脊柱后路固定对其生长发育的影响[J]. 中国矫形外科杂志. 2006(21)
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- [6] 李定越,卢润生,蒋绍双,郑德福. 结核病实验动物模型[J]. 四川医学. 2003(07)
- [7] 王惠琴. 椎旁弧形切口治疗胸椎结核(附89例疗效分析)[J]. 河北医药. 1982(03)
本文编号：9073
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