基于生物传感器的microRNA检测及其在法医学体液鉴定中的应用
发布时间：2021-04-02 01:36
研究背景在法医学现场勘查中,对不同体液的正确收集和识别往往能暴露案件的性质,并有利于案件现场重建。目前已有的体液来源鉴定方法有:化学试验、免疫学试验,蛋白质催化活性试验,光谱学方法和显微观察。这些常规体液鉴定方法大多只能初筛而不能认定,存在低敏感度、特异性及易受腐败等因素影响的缺陷。近年来,基于分子遗传学的核酸分析方法,如体液特异性信使RNA（messenger RNA,mRNAs）、组织特异性差异性甲基化区域（tissue-specific differentially methylated regions,tDMRs）、microRNAs（miRNAs）的检测逐渐发展,取代传统的体液识别方法。其中,miRNA作为一类短（18-25nt）、内源性非编码的RNA小分子,已被证实在不同体液中的表达存在差异。因其序列短小,能耐受腐败降解影响,已有研究证实mi RNA能在唾液和血液斑迹中稳定存在,实验室条件下保存1年仍可稳定检出。MiRNA的这些特点使其可以作为法医学体液来源鉴定新的分子工具,其表达谱逐渐成为体液识别（如尿液、静脉血、月经血、羊水、精液、阴道分泌物等）的潜在实用平台。但是,m...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
（A）当靶物质存在时，与3-WJ探针形成3-WJ结构；（B）无靶物质存在时，不能形成3-WJ结构
图 1.2 基于聚合剪切酶介导的等温指数扩增反应检测 miRNA 的电化学传感器原理图Figure 1.2 Exponential amplification reaction for miRNA electrochemical detection based ontarget-triggered three-way junction (3-WJ), with a “positive feedback” region in 3-WJtemplate.3.2 所设计的电化学传感器的可行性验证为了验证上述传感器用于miRNA定量检测及模板链中“正反馈”区域实现双重放大的可行性，采用琼脂糖凝胶电泳对反应产物进行分析（如图 1.3A）。与相同浓度但单独存在的靶 miRNA、3-WJ 探针泳道相比，当模板链、引物链及 miRNA 共同存在时，产生了一条弱迁移率的明亮条带，证明靶 miRNA 触发了 3-WJ 结构的形成[63]。3-WJ 结构形成后，在 KF 聚合酶、Nb.BbvCI 限制性内切酶及 dNTPs 的作用下，37℃孵育 60 min 后，产生了一条 ＜ 20 bp 的新条带，这条新条带便是聚合剪切反应产生的信号链。此外，模板链中含“正反馈”区域 3-WJ 结构的与模板链
ation obtained from three independent experiments.KF 聚合酶及 Nb.BbvCI 限制性内切酶的浓度对聚合剪切放大反应的影响如图1.5 A,B 所示，DPV 响应信号值随着 KF 酶浓度的增大呈上升趋势，当 KF 聚合酶浓度超过 0.18 U μL-1时，DPV 响应信号值趋于平台；同样，随着 Nb.BbvCI 限制性内切酶浓度的增大，DPV 响应信号值也呈上升趋势，当 Nb.BbvCI 限制性内切酶浓度增至 0.4 U μL-1时，DPV 信号值达到最大。因此
【参考文献】：
期刊论文
[1]RNA在法医学领域中的应用及研究进展[J]. 高林林,李佑英,严江伟,刘雅诚. 法医学杂志. 2011(06)
本文编号：3114344
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
（A）当靶物质存在时，与3-WJ探针形成3-WJ结构；（B）无靶物质存在时，不能形成3-WJ结构
图 1.2 基于聚合剪切酶介导的等温指数扩增反应检测 miRNA 的电化学传感器原理图Figure 1.2 Exponential amplification reaction for miRNA electrochemical detection based ontarget-triggered three-way junction (3-WJ), with a “positive feedback” region in 3-WJtemplate.3.2 所设计的电化学传感器的可行性验证为了验证上述传感器用于miRNA定量检测及模板链中“正反馈”区域实现双重放大的可行性，采用琼脂糖凝胶电泳对反应产物进行分析（如图 1.3A）。与相同浓度但单独存在的靶 miRNA、3-WJ 探针泳道相比，当模板链、引物链及 miRNA 共同存在时，产生了一条弱迁移率的明亮条带，证明靶 miRNA 触发了 3-WJ 结构的形成[63]。3-WJ 结构形成后，在 KF 聚合酶、Nb.BbvCI 限制性内切酶及 dNTPs 的作用下，37℃孵育 60 min 后，产生了一条 ＜ 20 bp 的新条带，这条新条带便是聚合剪切反应产生的信号链。此外，模板链中含“正反馈”区域 3-WJ 结构的与模板链
ation obtained from three independent experiments.KF 聚合酶及 Nb.BbvCI 限制性内切酶的浓度对聚合剪切放大反应的影响如图1.5 A,B 所示，DPV 响应信号值随着 KF 酶浓度的增大呈上升趋势，当 KF 聚合酶浓度超过 0.18 U μL-1时，DPV 响应信号值趋于平台；同样，随着 Nb.BbvCI 限制性内切酶浓度的增大，DPV 响应信号值也呈上升趋势，当 Nb.BbvCI 限制性内切酶浓度增至 0.4 U μL-1时，DPV 信号值达到最大。因此
【参考文献】：
期刊论文
[1]RNA在法医学领域中的应用及研究进展[J]. 高林林,李佑英,严江伟,刘雅诚. 法医学杂志. 2011(06)
本文编号：3114344
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