跑台运动对APP/PS1小鼠海马小胶质细胞清除Aβ功能的影响

发布时间：2023-11-11 13:04

　　目的小胶质细胞是中枢神经系统免疫细胞,其功能障碍与AD的发病密切相关。本研究以雄性APPswe/PS1dE9(APP/PS1)小鼠为实验对象,探讨3个月的跑台运动干预对该模型小鼠空间学习记忆能力和海马Aβ累积的影响。本研究从小胶质细胞清除、吞噬和降解功能分析运动减少海马Aβ累积的细胞学机制。方法将48只3月龄雄性APP/PS1小鼠随机分为APP/PS1安静组(APP/PS1-SED,n=24)和APP/PS1运动组(APP/PS1-EX,n=24),将42只3月龄雄性C57BL/6野生小鼠随机分为野生安静组(WT-SED,n=21)和野生运动组(WT-EX,n=21)。APP/PS1-EX组小鼠和WT-EX组小鼠进行3个月的有氧跑台运动,每天45min,每周5天。运动干预结束后,采用Morris水迷宫实验检测各组小鼠的空间学习和记忆能力。行为学实验结束24小时后,每组取6只小鼠深度麻醉后经心灌注预冷的PBS冲出血液,随后取右半脑置于4%多聚甲醛中固定制成石蜡切片,左侧海马组织用于Elisa实验;每组另取6只小鼠深度麻醉后取左右海马组织,流式分选小胶质细胞后,用于Elisa和Wester...

【文章页数】：140 页

【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
2 文献综述
    2.1 小胶质细胞概述
        2.1.1 小胶质细胞的来源
        2.1.2 小胶质细胞的免疫学标记
        2.1.3 小胶质细胞的分型
    2.2 小胶质细胞清除Aβ
    2.3 小胶质细胞吞噬清除Aβ的机制
        2.3.1 小胶质细胞表面受体介导Aβ的吞噬
        2.3.2 小胶质细胞溶酶体对Aβ的降解
    2.4 AD脑内小胶质细胞的活动异常
        2.4.1 小胶质细胞增生和活化增多
        2.4.2 小胶质细胞形态改变
        2.4.3 小胶质细胞功能障碍
    2.5 运动与AD
        2.5.1 运动改善AD认知功能
        2.5.2 运动减轻Aβ累积
        2.5.3 运动改善AD脑内小胶质细胞的活动异常
    2.6 小结
3 实验一 跑台运动对APP/PS1 小鼠空间学习记忆能力和Aβ累积的影响
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验动物及分组
        3.2.2 运动方案
        3.2.3 Morris水迷宫实验
        3.2.4 取材
        3.2.5 Elisa检测小鼠海马Aβ40和Aβ42 水平
        3.2.6 Methoxy-X04 染色测定纤维样Aβ沉积
        3.2.7 数据统计分析
    3.3 研究结果
        3.3.1 Morris水迷宫实验结果
        3.3.2 小鼠海马可溶性Aβ40、Aβ42 水平
        3.3.4 小鼠海马纤维样Aβ沉积水平
    3.4 分析讨论
        3.4.1 跑台运动对APP/PS1 小鼠空间学习和记忆能力的影响
        3.4.2 跑台运动对APP/PS1 小鼠海马Aβ累积的影响
    3.5 结论
4 实验二 跑台运动对APP/PS1 小鼠小胶质细胞清除Aβ能力的影响
    4.1 前言
    4.2 实验材料与方法
        4.2.1 实验动物、分组、运动方案和取材
        4.2.2 原代小胶质细胞分离培养及鉴定
        4.2.3 纤维样Aβ的制备
        4.2.4 体外Aβ清除实验
        4.2.5 在体Aβ吞噬实验
        4.2.6 体外Aβ吞噬实验
        4.2.7 体外Aβ降解实验
        4.2.8 小胶质细胞分选
        4.2.9 Elisa检测小胶质细胞内Aβ水平
        4.2.10 数据统计分析
    4.3 研究结果
        4.3.1 体外Aβ清除实验结果
        4.3.2 在体Aβ吞噬实验结果
        4.3.3 体外Aβ吞噬实验结果
        4.3.4 体外Aβ降解实验结果
        4.3.5 小胶质细胞内可溶性Aβ水平
    4.4 分析讨论
        4.4.1 跑台运动对小鼠小胶质细胞清除纤维样Aβ能力的影响
        4.4.2 跑台运动对小鼠小胶质细胞吞噬和降解纤维样Aβ能力的影响
        4.4.3 跑台运动对小鼠小胶质细胞内Aβ水平的影响
    4.5 结论
5 实验三 跑台运动对APP/PS1 小鼠小胶质细胞溶酶体功能的影响
    5.1 前言
    5.2 实验材料与方法
        5.2.1 实验动物、分组和运动方案
        5.2.2 原代小胶质细胞分离和小胶质细胞分选
        5.2.3 TFEB免疫荧光
        5.2.4 Western blot
        5.2.5 小胶质细胞溶酶体pH的测定
        5.2.6 小胶质细胞溶酶体酶活性检测
        5.2.7 数据统计分析
    5.3 研究结果
        5.3.1 小胶质细胞溶酶体TFEB的表达和核转位
        5.3.2 小胶质细胞溶酶体膜蛋白LAMP1和LAMP2 的水平
        5.3.3 小胶质细胞溶酶体pH
        5.3.4 小胶质细胞溶酶体酶CTSB和 CTSD的表达和活性
    5.4 分析讨论
        5.4.1 跑台运动对小鼠小胶质细胞TFEB表达和核转位的影响
        5.4.2 跑台运动对小鼠小胶质细胞溶酶体功能的影响
    5.5 结论
6 研究总结
    6.1 总体分析
    6.2 研究总体结论
    6.3 研究的创新与不足
        6.3.1 创新
        6.3.2 不足
参考文献
附录
动物实验伦理审查表
致谢
作者简历及在学期间的学术成果



本文编号：3862598