血管内皮生长因子及其基因多态性与异位妊娠的关联性研究

发布时间：2017-10-17 15:42

  本文关键词：血管内皮生长因子及其基因多态性与异位妊娠的关联性研究

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【摘要】：研究背景异位妊娠(ectopic pregnancy, EP)是指受精卵在子宫体腔以外着床的妊娠,属于妇产科常见的急腹症。根据着床部位不同,可分为输卵管妊娠、卵巢妊娠、腹腔妊娠、宫颈妊娠及子宫残角妊娠等,其中输卵管妊娠最多见,占90%以上。输卵管炎症、输卯管手术史、宫内节育器、辅助生殖技术均可诱发异位妊娠,近年来发病率日益上升,目前发生率约占妊娠总数的2%。一旦异位妊娠破裂,可导致腹腔内大出血,直接威胁患者的健康和生命,是孕产妇发病率和死亡率的一个重要原因,约占早孕死亡率的9-13%。异位妊娠直接影响患者预后,首次异位妊娠后可导致1/3患者不孕,另外1/3可再度诱发异位妊娠,因此早期诊断异位妊娠尤为重要。目前,异位妊娠的诊断方法主要为患者的临床表现、实验室检查和辅助检查。具体的诊断方法如下：超声检查后给予患者血清人绒毛膜促性腺激素(P-human chorionic gonadotropin,β-HCG)检测、血清β-HCG检测后给予患者超声检查、血孕酮(progesterone, P)检测后给予患者超声检查和血清β-HCG检测、血孕酮检测后给予患者血清β-HCG检测、超声检查后给予患者血清β-HCG和血孕酮检测、重复超声检查、临床检查等。有研究表明,超声检查后给予患者血清β-HCG和血孕酮检测是最为有效的,具有较高的诊断准确率.极少可能造成漏诊和误诊,对患者造成宫内妊娠误刮的可能性非常低,同时检查时间很短,可为患者后续治疗节省很多时间,有助于改善患者的预后。李翠梅等研究表明,血清β-HCG检测、血孕酮检测、超声检查子宫内膜厚度的异位妊娠的诊断准确率分别为48.28%、72.41%、81.03%,而血清β-HCG检测、血孕酮检测、超声检查子宫内膜厚度的联合诊断准确率为98.28%。阮宝华等研究表明,血清β-HCG检测、血孕酮检测、阴道超声检查包块类型,是判定异位妊娠保守治疗是否成功的综合指标,具有较高的临床价值。由于血清β-HCG检测的时间较长,对于出现急剧腹痛与阴道出血病症的患者来讲,非首选的诊断方法,可先用超声检查作为疾病诊断的首选方案,目的是保证患者的生命安全,其具有更高的临床意义。传统的诊断方法中,腹腔镜检查与清官术后病理组织学检查是异位妊娠诊断的金标准,在腹腔镜下行诊断性刮宫,取病理组织,是确诊异位妊娠的有效方法之一,但会对患者造成明显的创伤。目前只有在自发性流产与异位妊娠的诊断中才会用到,诊断性刮宫是确诊疾病的最有效方法,可弥补血清学检查的不足之处。腹部CT与MRI检查虽然也可以用于异位妊娠的诊断,但费用较贵,不易为患者接受,因而不将其作为异位妊娠的首选诊断方法。因此,临床上常用的检查手段为妇科B超和血清β-HCG检测来辅助诊断异位妊娠,但这两种检查均有一定的局限性,如尿人绒毛膜促性腺激素(HCG)或血清人绒毛膜促性腺激素p亚单位(β-HCG)只能确定已妊娠,而不能确定妊娠部位。另外由于个体差异,从末次月经到有解剖学标记反映在声像图上会有一段时间间隔,尚未形成超声可见妊娠囊,容易出现妊娠盲区,既不能肯定是宫内妊娠,也不能排除异位妊娠。特别是对于未出现停经、腹痛、阴道出血和休克等常见临床表现的不典型异位妊娠,更难鉴别。所以大多数致命性的异位妊娠是由于延误诊断和不当检查引起的。尽管有高分辨率的阴道超声和高灵敏度的血β-HCG定量分析,该病的确诊率逐渐增加,但仍有部分患者因症状不典型而被漏诊,早期仍有40%-50%的异位妊娠可能被误诊,严重者可导致患者休克甚至死亡。正因如此,早期诊断异位妊娠显得尤为重要。因此,早期寻找简便、稳定、可靠性高的辅助性诊断指标成为当前的研究必然。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF),也称血管渗透因子(vascular permeability factor, VPF),是在1989年由Ferrara等在牛垂体滤泡星状细胞培养液中利用硫酸铵析出、肝素琼脂糖亲和层析法及两次反相高压液相色谱纯化得到的一种糖蛋白。VEGF最先从肿瘤细胞分离出来,分子量为35-45KD,是一种结合肝素的二聚体糖蛋白,其糖蛋白单体以二硫键结合成二聚体才有活性,是通过酪氨酸激酶传导通路发挥作用的。它是内皮细胞的特异性丝裂原,也是一种有效的血管形成和血管通透性诱导因子。人的VEGF基因位于染色体的6p21.3,编码VEGF的基因长14kb,由8个外显子和7个内含子交替组成。VEGF基因经过转录水平的剪切,可以产生5种不同的转录子,即5种异构体(VEGF206、VEGF18、VEGF165、VEGF123、VEGF121)。在诸多异构体中,VEGF 121、VEGF 145和VEGF 165均能诱导血管内皮细胞增殖和新生血管形成,但以VEGF 165的活性最高。VEGF通过与其受体结合发挥生物学效应。目前已在血管内皮细胞膜上检出两种具有与VEGF高度特异结合的受体：fltl(fins-like lyrosine kinase)和flkl (fetal liver kinase,亦称KDR),属于Ⅲ型酪氨酸受体,另外flt4也被确认为是VEGF受体,其跨膜蛋白胞外区有7个类似免疫球蛋白功能区,但VEGF对flt4特异性不高。VEGF的生物学作用：一、细胞质的钙聚集作用,VEGF选择性地、直接作用于fltl和flkl两种受体上后,最先看到的生物学效应是细胞质的钙离子增加,几秒钟之内可使钙离子浓度升高4倍以上。二、促进内皮细胞增殖,VEGF是一种内皮细胞特异性有丝分裂原,选择性地、直接作用于fltl和flkl两种受体,能诱导单核细胞生长。这主要是VEGF对血管内皮的生长刺激和趋化作用所致。三、诱导血管生成,血管生成是原始血管丛或已存在的血管经芽生或其他方式形成新管的过程。VEGF是特异性促进血管内皮细胞有丝分裂、调节血管生成的因子并可独自诱导新生血管形成。四、增加血管通透性,VEGF具有很强的增加血管通透性的作用,主要增加毛细血管后静脉和小静脉的通透性,是目前发现的最强烈增加血管通透性的物质之一。研究表明,其增加血管通透性是通过增加内皮细胞的间隙实现的。五、血管保护作用(1)抗血栓形成作用：VEGF能保持内皮细胞的完整性,维持内皮细胞的正常生理功能,从而避免触发内源性或外源性凝血途径；抑制血小板凝集、黏附,从而发挥抗血栓形成的作用。(2)抑制血管平滑肌细胞的过度生长保护内皮细胞。(3)抗内皮细胞损伤和凋亡。(4)抗炎：炎症是以循环血白细胞和血浆蛋白渗出到组织损伤部位为特征的防御反应,而白细胞黏附于血管内皮表面是其趋化游走、穿过血管壁而进入炎症灶的始动环节。VEGF可使白细胞和内皮之间的作用减弱,具有抗炎症的效应。(5)改变细胞外基质：VEGF可诱导内皮细胞表达纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制剂-1,还可以诱导组织因子、基质胶原酶等在内皮细胞的表达,激发Ⅷ因子从内皮细胞释放。这些作用可以改变细胞外基质,有利于血管以出芽方式向周围生长。众所周知,血管内皮生长因子(VEGF)与血管生成相关,是一种重要的血管生成因子,主要由血管内皮细胞生成。它是特异的作用于血管内皮细胞的高效促有丝分裂因子,主要调节血管生长,增加子宫内膜、蜕膜以及滋养细胞的通透性,并促使胚胎发育的血管形成,在胎盘形成和植入过程中发挥关键作用,从受精、胚胎形成、着床、胎盘形成以至胎儿生长发育,其作用贯穿其中。早期妊娠伴随着胚胎的着床与植人、胚胎与子宫内膜之间血管的建立,血管内皮生长因子大量产生。血管内皮生长因子的分泌和表达不仅由生长因子和细胞因子所诱导,还要根据当时的条件,如缺氧,已有研究表明在缺氧条件下可增加细胞血管内皮生长因子产生。输卵管是异位妊娠最常见的发生部位,由于宫腔的结构不同于子宫内膜,不能形成完整的蜕膜,胚胎着床时,与母血不能充分沟通,胚胎发育处于缺氧状态,所以异位妊娠会增加血管内皮生长因子的产生和分泌。而滋养细胞组织植入到输卵管壁可能损害输卵管的功能,或通过改变纤毛上皮细胞,或通过炎症性反应引起的壁层肌肉组织结构紊乱,增加异位妊娠的发病风险。据认为输卵管功能的损害取决于滋养层细胞侵入输卵管壁的程度。而血管内皮生长因子浓度越高,可能更利于滋养细胞组织侵润输卵管壁的深度。Leung DW等前瞻性研究表明,血清VEGF以200ng/L作为截断点,区分正常宫内妊娠与异位妊娠的敏感度达88.10%,特异度100.00%,阳性预测值100.00%；在区别异位妊娠与异常宫内妊娠时,敏感度为87.15%,特异度为75.10%,阳性预测值为77.18%。VEGF联合妊娠相关血清蛋白A和P的三联分析能清晰地区分正常妊娠与异位妊娠。Torry DS等发现,在卵母细胞至胚泡期细胞中均检测到VEGF的表达,且在胚泡植入前期细胞中都有表达,提示可能与发育有关。在早孕期VEGF及其受体主要表达于合体滋养叶细胞及细胞滋养叶细胞,说明VEGF在滋养叶细胞浸润、分化中起着重要作用。胚胎在其植入部位通过促进VEGF的产生促使母胚间的血管形成。Shifren JL等用VEGF刺激培养的绒毛外滋养细胞,发现绒毛外滋养细胞增殖力明显加强,通过被VEGF刺激的细胞对微孔滤膜的穿透力来研究其侵蚀力,发现绒毛外滋养细胞的侵蚀力也明显加强。异位妊娠是妇产科常见的急腹症,其治疗包括期待治疗、药物治疗和手术治疗。早期诊断为保守治疗创造了条件,目前的处理多趋向于保守治疗。有学者认为在不久的将来,保守治疗将成为异位妊娠的首选治疗方法,手术治疗将仅作为保守治疗失败时的一种补救措施。这样就提出一个问题：在异位妊娠早期诊断的前提下,采取何种治疗方式更为有效,客观有效的评价指标是什么?是首选药物保守治疗,还是腹腔镜保守性手术治疗呢?目前选择治疗方式的主要依据是绒毛膜促性腺激素及B超所示异位妊娠包块大小。Natale等认为滋养细胞的活性越高,越易于穿透管壁至肌层,出现输卵管破裂机会增多。正常妊娠从着床到胎盘形成都与血管的新生有关。VEGF作为一种强的血管生长因子,可由血管内皮细胞、滋养细胞和炎性巨噬细胞分泌,可能参与正常妊娠胎盘的形成及滋养叶细胞的侵入,在早孕期VEGF及其受体主要表达于合体滋养叶细胞及细胞滋养叶细胞,说明VEGF在滋养叶细胞浸润、分化中起着重要作用。胚胎在其植入部位通过促进VEGF的产生促使母胚间的血管形成。Athanassiades等用VEGF刺激培养的绒毛外滋养细胞,发现绒毛外滋养细胞增殖力明显加强,通过被VEGF刺激的细胞对微孔滤膜的穿透力来研究其侵蚀力,发现绒毛外滋养细胞的侵蚀力也明显加强。VEGF165和VEGF121的作用是相同的,这种作用被抗VEGF抗体阻断,说明VEGF有促进绒毛外滋养细胞侵蚀与增殖的双重作用。随着分子生物学和遗传学的不断发展,人们逐渐认识到基因多态性在各种疾病发生中的作用。基因多态性是指一个群体中存在两种以上等位基因,其中最低的基因频率也比突变所能维持的高(即频率大于1%)。其本质是各种原因引起染色体DNA中核苷酸排序变化,这一变化对蛋白质的表达可能存在上调或下调作用,对本基因控制的细胞因子的产生具有增强或减弱的作用,其在阐明人体对疾病发病风险等方面起着重要的作用。研究发现在VEGF基因上存在一些多态性位点,其可通过改变VEGF的转录水平及蛋白表达而影响个体间对疾病遗传易感性的差异。VEGF基因位于染色体的6p21.3,长14kb,由8个外显子和7个内含子交替组成,至少存在30个单核苷酸多态性位点。很多VEGF启动子和5’和3’-非翻译区(非编码区)的基因多态性已报告,研究表明血管内皮生长因子多态性与各种疾病有关,包括复发性流产,先兆子痫,和早产等。血管内皮生长因子参与异位妊娠形成发展,而这些异位妊娠患者并没有任何危险因素。我们推测血管内皮生长因子基因多态性可能与异位妊娠发病风险有关。异位妊娠患者的血清VEGF水平高于正常妊娠者,但异位妊娠患者血清VEGF水平的高低是否有助于鉴别异位妊娠流产或停育,是否能预测异位妊娠破裂的发生,对流产型的异位妊娠能否在血绒毛膜促性腺激素及VEGF的监测条件下采用期待或保守治疗,目前未有相关报道。根据合适的临床指标,诊断、治疗、预防异位妊娠已成为今后生殖健康的发展方向之一,也是妇产科医师所面临的亟待解决的重要问题。本研究目的是探讨血管内皮生长因子及其基因多态性与异位妊娠的关联性,为异位妊娠诊断、治疗、预防等存在的问题提供依据和指导。本次研究分成诊断、治疗、预防等三章内容：血管内皮生长因子诊断异位妊娠的临床价值(第一章)；血管内皮生长因子和p-人绒毛膜促性腺激素与输卵管妊娠滋养细胞侵入管壁深度的关联性研究(第二章)；血管内皮生长因子基因多态性与异位妊娠发病风险的关联性研究(第三章)。第一章血管内皮生长因子诊断异位妊娠的临床价值目的临床上,常规采用血清β-HCG、孕酮和B超检查来诊断异位妊娠。但这两种检查均有一定的局限性。早期仍有40%-50%的异位妊娠可能被误诊。VEGF在受精、着床、胎盘血管形成及胎儿生长发育中起重要作用。异位妊娠患者血VEGF浓度高于正常宫内妊娠者。本研究通过比较异位妊娠及正常宫内妊娠妇女血清中VEGF、β-HCG和孕酮水平的差异,探讨其在异位妊娠早期诊断中的临床价值。方法正常早孕组186例、异位妊娠组192例,血清β-HCG和P采用双抗体夹心光化学测定法,血清VEGF含量的测定采用ELISA法。采用SPSS 13.0软件包分析和制作ROC曲线。结果1、正常早孕组血清β-HCG、P浓度要显著高于异位妊娠组,有统计学差异(P0.01)；异位妊娠组血清VEGF浓度远远高于正常早孕组,有统计学差异(P0.01)。2、血清VEGF浓度与[-HCG和P浓度呈负相关,相关系数分别为-0.556和-0.532(P0.01)；血清P-HCG浓度与P浓度存在正相关,相关系数为0.735(P0.01)。3、在鉴别诊断异位妊娠与正常宫内妊娠的ROC曲线中,曲线下面积在VEGF、β-HCG、P分别为0.955、0.866、.835, VEGF的曲线下面积大于β-HCG、P,说明血清VEGF在鉴别诊断异位妊娠与正常宫内妊娠时可能优于HCG, P。4、当血清VEGF浓度选择160pg/ml时,此时约登指数最大为0.79,其敏感度为84.90%,特异度为94.09%,其阳性似然比和阴性似然比分别为14.37和0.16。故血清VEGF浓度鉴别诊断异位妊娠的最佳临界值为160Pg/ml。结论异位妊娠患者血清β-HCG和孕酮浓度低于正常宫内妊娠,血清VEGF浓度高于正常宫内妊娠；血清VEGF在鉴别诊断异位妊娠与正常宫内妊娠时可能优于β-HCG、孕酮,最佳临界值为160Pg/ml,有望成为一项新的异位妊娠检测的辅助指标；β-HCG、VEGF和孕酮联合检测的敏感度、特异度和准确度明显升高,效果优于单个指标检测。第二章血管内皮生长因子和p-人绒毛膜促性腺激素与输卵管妊娠滋养细胞侵入管壁深度的关联性研究目的异位妊娠是妇产科常见的急腹症,其治疗包括期待治疗、药物治疗和手术治疗。早期诊断为保守治疗创造了条件,目前的处理多趋向于保守治疗。有学者认为在不久的将来,保守治疗将成为异位妊娠的首选治疗方法,手术治疗将仅作为保守治疗失败时的一种补救措施。这样就提出一个问题：在异位妊娠早期诊断的前提下,采取何种治疗方式更为有效,客观有效的评价指标是什么?是首选药物保守治疗,还是腹腔镜保守性手术治疗呢?Natale等认为滋养细胞的活性越高,越易于穿透管壁至肌层,出现输卵管破裂机会增多。据认为输卵管破裂取决于滋养层细胞侵入输卵管壁的程度。目前还没有足够的证据来预测滋养细胞组织浸润输卵管壁的深度。我们推测输卵管妊娠患者血清中β-HCG与VEGF浓度似乎与滋养细胞侵润输卵管壁的深度有关。本研究的目的是评估输卵管壶腹部妊娠患者滋养细胞侵润输卵管壁深度与VEGF及β-HCG血清浓度之间的关联性。方法 采用前瞻性研究。选择输卵管壶腹部妊娠患者行根治性手术治疗(患侧输卵管切除术)80例,术前输卵管妊娠部位与术后描述和组织学检查不符的被排除在外。手术当天检测VEGF和β-HCG血清浓度。留取空腹静脉血5m1,离心后取上清液,取1ml采用双抗体夹心光化学测定法检测β-HCG,剩余部分冷藏于-86℃冰箱保存备查VEGF,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清VEGF水平。留取切除的患侧输卵管及妊娠组织,用10%福尔马林固定输卵管,用苏木精-伊红染色,并连续切片,平均每10个切片在光学显微镜下分析。为了便于明确滋养细胞组织侵入输卵管肌层的深度,用Masson染色以鉴别输卵管肌纤维,用人胎盘催乳素(HPL)免疫组织化学染色以鉴别滋养细胞,来确定滋养细胞侵入输卵管壁肌层的深度。根据滋养细胞浸入输卵管壁的深度,输卵管壶腹部妊娠组织学分期：Ⅰ期：滋养细胞浸润仅限于黏膜；Ⅱ期：滋养细胞浸润到输卵管肌层；Ⅲ期：完全浸透输卵管壁全层或在浆膜层破裂之外。采用SPSS 13.0软件包分析和制作ROC曲线,结果用均数±标准差(X±S)进行描述,进行单因素方差分析,P0.05被认为差异有统计学意义。结果1、患者年龄19-41岁,平均年龄29.1±5.8岁,孕龄41-55天,平均48.0±3.9天,组织学检查表明,输卵管壶腹部妊娠Ⅰ期27例(33.7%),Ⅱ期24例(30.0%),Ⅲ期29例(36.3%)。各期别间平均年龄没有显着差异(Ⅰ期29.2±5.9岁；Ⅱ期29.7±5.6岁；Ⅲ期28.5±6.0岁,P=0.774)。各期平均孕龄之间没有显着差异(Ⅰ期48.3±4.3天；Ⅱ期47.9±3.6天；Ⅲ期47.7±4.0天,P=0.848)。2、血清VEGF浓度的平均值：Ⅰ期218.77±67.37pg/mL;Ⅱ期392.50±43.62pg/mL;Ⅲ期452.50±56.67pg/mL。单因素方差分析发现各期别组间VEGF的平均浓度有显著差异(P0.001)。Ⅰ期血清VEGF浓度的平均值明显低于在Ⅱ期(P0.001),而Ⅱ期明显低于Ⅲ期(P0.001)。3、血清β-HCG浓度的平均值：Ⅰ期2139.9±1058.8mIU/mL;Ⅱ期9103.1±4126.3mIU/mL;Ⅲ期14336.4±4116.6mIU/mL。单因素方差分析发现各期别组间β-HCG的平均浓度有显著差异(P0.001)。Ⅰ期血清β-HCG浓度的平均值明显低于在Ⅱ期(P0.001),而Ⅱ期明显低Ⅲ期(P0.001)。4、采用ROC曲线计算,确定Ⅰ期和Ⅱ期血清VEGF临界值为308.6pg/mL,阳性似然比13.5,准确度96.1%,敏感度100.0%,特异度92.6%,阳性预测值(PPV)92.3%和阴性预测值(NPV)100.0%；Ⅱ期和Ⅲ期血清VEGF的临界值为431.9pg/mL,阳性似然比3.8,准确度79.3%,敏感度79.3%,特异度79.2%,阳性预测值(PPV)82.2%和阴性预测值(NPV)76.0%。5、采用ROC曲线计算,确定Ⅰ期和Ⅱ期血清β-HCG临界值为2509.6mIU/mL,阳性似然比5.0,准确度86.3%,敏感度91.7%,特异度81.5%,阳性预测值(PPV)81.5%和阴性预测值(NPV)91.7%；Ⅱ期和Ⅲ期血清β-HCG临界值为13142.6mIU/mL,阳性似然比17.2,准确度83.00%,敏感度72.4%,特异度95.8%,阳性预测值(PPV)95.4%和阴性预测值(NPV)74.2%。结论输卵管妊娠患者血清中的VEGF和β-HCG浓度与滋养细胞侵润输卵管壁深度相关；VEGF和β-HCG浓度越高,妊娠滋养细胞组织浸润输卵管壁越深,发生输卵管破裂的风险越大,可作为妊娠滋养细胞侵润输卵管管壁深度组织学分期的评估指标；输卵管妊娠保守治疗与手术治疗的血清VEGF|临界值为308.6pg/mL,血清P-HCG |临界值为2509.6mIU/mL。第三章血管内皮生长因子基因多态性与异位妊娠发病风险的关联性研究目的 血管内皮生长因子参与异位妊娠形成发展,而这些异位妊娠患者并没有任何危险因素。我们推测血管内皮生长因子基因多态性可能与异位妊娠发病风险有关。目前国内很少有这方面的研究报道,因此,我们研究目的是探讨血管内皮生长因子(-460C/T,-1154G/A,-2578C/A,+936C/T)基因多态性与异位妊娠的发病风险的关系,从分子水平为异位妊娠的预防和诊治提供实验依据。方法采用基于医院的病例-对照研究方法,以192例异位妊娠患者和210例健康绝经后女性(至少2次分娩史的健康女性,均无异位妊娠流产或早产,先兆子痫等病史)为研究对象,采集所有研究对象的外周静脉血5 ml,以枸橼酸钠抗凝,采用蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法提取白细胞DNA。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)方法对血管内皮生长因子-460C/T,-1154G/A,-2578C/A,+936C/T这4个SNPs位点进行基因分型。数据分析采用SPSS 13.0统计软件进行处理。对照组基因型频率分布行χ2检验做Hardy-Weinberg平衡分析,病例组年龄和停经周数用均数及标准差。VEGF -460C/T,-1154G/A,-2578C/A和+936C/T基因型和等位基因频率分布比较采用χ2检验。采用EH软件分析VEGF -460C/T,-1154G/A,-2578C/A和+936C/T基因单体型频率,21d软件分析连锁不平衡状态。非条件logistic回归方法计算相对风险度的比值比(odds ratio,OR)及其95%可信区间(confidence interval, CI)。以P0.05为差异有统计学意义。结果1、对照组VEGF -460C/T,-1154G/A,-2578C/A和+936C/T多态性的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(所有P值0.05)。2, VEGF -460 C/T多态C、T等位基因频率在病例和对照组分别为21.6%、21.2%和78.4%、78.8%,两组相比无显著差异(P0.05); C/C、C/T、T/T基因型频率分布在病例组(3.6%,35.9%和60.4%)和对照组(5.2%,31.9%和62.9%)间也无差异(P0.05)；与T/T基因型相比,C/C+C/T基因型不增加异位妊娠的发病风险(OR=1.11,95%CI=0.74-1.66)。3、VEGF +936C/T多态C、T等位基因频率在病例和对照组分别为81.0%、83.8%和19.0%、16.2%,两组相比无显著差异(P0.05); C/C、C/T、T/T基因型频率分布在病例组(65.1%,31.8%和3.1%)和对照组(69.5%,28.6%和1.9%)间也无差异(P0.05)；与C/C基因型相比,T/T+C/T基因型不增加异位妊娠的发病风险(OR=1.22,95%CI=0.81-1.86)。4、VEGF-1154G/A的3种基因型频率(A/A、G/A、G/G)在病例组和对照组中分别是2.1%/6.2%、26.6%/33.8%和71.4%/60.0%,两组比较差异有统计学意义(P=0.021)。病例组中的VEGF-1154G/A的A等位基因频率(15.4%)明显低于对照组(23.1%),G等位基因频率(84.6%)明显高于对照组(76.9%),两组比较差异有统计学意义(P=0.006)。与G/G基因型相比,携带A等位基因型(G/A+A/A基因型)可显著降低异位妊娠的发病风险(OR=0.61,95%CI=0.42-0.87)。5、VEGF -2578C/A的3种基因型频率(A/A、C/A、C/C)在病例组和对照组中分别是3.6%/9.1%、31.3%/35.7%和65.1%/55.2%,两组比较差异有统计学意义(P=0.034)。病例组中的VEGF -2578C/A的A等位基因频率(19.4%)明显低于对照组(26.9%),C等位基因频率(80.6%)明显高于对照组(73.1%),两组比较差异有统计学意义(P=0.010)。与C/C基因型相比,携带A等位基因型(A/A+C/A基因型)可显著降低异位妊娠的发病风险(OR=0.66,95%CI=0.44-0.99)。6、VEGF +936C/T多态位点位于3’-非翻译区采,与另外三个多态位点无连锁不平衡现象。用21d软件对VEGF -460C/T和-1154G/A,-1154G/A和-2578C/A,-2578C/A和-460C/T分别进行联合分析,结果显示均存在部分连锁不平衡现象(D'=0.80,0.47,0.37; r2=0.47,0.19,0.13)。而采用EH软件对VEGF -460C/T,-1154G/A和-2578C/A进行单体型分析显示,病例组中单体型频率分别为TGC(-460/-1154/-2578)(35.7%), CGC (17.6%), TGA (14.6%), TAC (9.6%), CGA(6.9%), CAC (6.4%), TAA (5.4%)和CAA(3.8%)。与TGC单体型相比,TAA和CAA单体型均可明显降低异位妊娠的发病风险(P=0.020, OR=0.41,95%CI=0.19-0.89; P=0.014, OR=0.29,95%CI=0.11-0.82)。CGC, TAC, CAC, TAA和CAA均与异位妊娠的发病风险无关。结论1、VEGF -460C/T和+936C/T基因多态性可能与异位妊娠遗传易感性无关。2、携带VEGF -1154G/A多态的A等位基因型可能显著降低异位妊娠的发病风险,该等位基因可能是异位妊娠发病的一个潜在的保护因素。3、携带VEGF -2578C/A多态的A等位基因型可能显著降低异位妊娠的发病风险,该等位基因可能是异位妊娠发病的一个潜在的保护因素。4、VEGF -460C/T、-1154G/A和-2578C/A三个多态位点间存在部分连锁不平衡现象。5、TAA和CAA单体型均可明显降低异位妊娠的发病风险。
【关键词】：血管内皮生长因子 基因多态性 异位妊娠 β-人绒毛膜促性腺激素 滋养细胞
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.22
【目录】：

• 摘要3-15
• ABSTRACT15-36
• 研究背景36-43
• 第一章 血管内皮生长因子诊断异位妊娠的临床价值43-63
• 前言43-44
• 1.1 研究对象44-45
• 1.2 研究方法45-46
• 1.2.1 样本采集45
• 1.2.2 主要仪器设备45
• 1.2.3 β-HCG、P测定45
• 1.2.4 血清VEGF测定45-46
• 1.2.5 质量控制46
• 1.2.6 统计学处理46
• 1.3 结果46-52
• 1.3.1 各组血β-HCG、P、血清VEGF水平的比较46
• 1.3.2 血清VEGF与β-HCG、P的相关性46-48
• 1.3.3 血清VEGF、β-HCG、P诊断异位妊娠的价值的比较48-50
• 1.3.4 不同VEGF浓度时鉴别诊断异位妊娠意义50-52
• 1.4 讨论52-59
• 1.4.1 VEGF的分子生物学52-53
• 1.4.2 VEGF分泌的调节53-54
• 1.4.3 VEGF在早期妊娠中的作用54
• 1.4.4 VEGF与胚胎着床54-55
• 1.4.5 VEGF与妊娠子宫内膜的改变55
• 1.4.6 VEGF与自然流产55-56
• 1.4.7 VEGF与异位妊娠56-59
• 参考文献59-63
• 第二章 血管内皮生长因子和β-人绒毛膜促性腺激素与输卵管妊娠滋养细胞侵入管壁深度的关联性研究63-83
• 前言63-64
• 2.1 研究对象64
• 2.2 研究方法64-67
• 2.2.1 样本采集64
• 2.2.2 主要仪器设备64-65
• 2.2.3 β-HCG测定65
• 2.2.4 血清VEGF测定65
• 2.2.5 质量控制65
• 2.2.6 标本制备65-67
• 2.2.7 统计学处理67
• 2.3 结果67-74
• 2.3.1 输卵管壶腹部妊娠组织学分期67
• 2.3.2 血清VEGF浓度67
• 2.3.3 血清β-HCG浓度67-68
• 2.3.4 血清VEGF的ROC曲线68-70
• 2.3.5 血清β-HCG的ROC曲线70-71
• 2.3.6 血清VEGF联合β-HCG的ROC曲线71-74
• 2.4 讨论74-79
• 参考文献79-83
• 第三章 血管内皮生长因子基因多态性与异位妊娠发病风险的关联性研究83-117
• 前言83-86
• 3.1 研究对象86-87
• 3.2 研究方法87-94
• 3.2.1 主要实验设备与仪器87
• 3.2.2 主要实验试剂87-88
• 3.2.3 外周血白细胞DNA的提取88-90
• 3.2.4 基因多态性检测90-93
• 3.2.5 统计学方法93-94
• 3.3 结果94-100
• 3.3.1 研究对象的一般特征94
• 3.3.2 VEGF -460 C/T单核苷酸多态性与异位妊娠的关系94
• 3.3.3 VEGF +936C/T单核苷酸多态性与异位妊娠的关系94-95
• 3.3.4 VEGF -1154G/A单核苷酸多态性与异位妊娠的关系95
• 3.3.5 VEGF -2578C/A单核苷酸多态性与异位妊娠的关系95
• 3.3.6 VEGF -460C/T,-1154G/A,-2578C/A和+936C/T基因多态位点的交互作用与异位妊娠发病风险的关联95-100
• 3.4 讨论100-110
• 参考文献110-117
• 小结117-118
• 缩略词118-119
• 攻读学位期间成果119-120
• 致谢120-122
• 统计学审稿证明122

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本文编号：1049673