超声介导胰酶抑制剂温敏凝胶局部给药治疗胰腺损伤的研究

发布时间：2017-11-04 14:07

  本文关键词：超声介导胰酶抑制剂温敏凝胶局部给药治疗胰腺损伤的研究

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【摘要】：目的 探讨超声造影引导胰酶抑制剂甲磺酸加贝酯温敏凝胶(GMTI)局部注射治疗胰腺损伤的可行性及有效性。材料与方法(1)将泊洛沙姆407、甲磺酸加贝酯(GM,包括1 mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、 20mg/ml组)及甲磺酸加贝酯温敏凝胶(GMTI,包括1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、 20mg/ml组)分为9组,分别吸取各组样品25μl与等体积胰蛋白酶溶液(1.0mg/ml)混匀用作待测溶液,根据大鼠胰蛋白酶ELISA检测试剂盒所述步骤检测并评估GMTI体外抑制胰蛋白酶活性的有效浓度。(2)42只大鼠随机分为对照组、模型组、GM组、GMTI组(包括1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml组),每组6只。除对照组外,余大鼠麻醉后开腹统一制作Ⅱ级胰腺损伤模型。GMTI组于病灶处直接注射对应浓度的药物(03ml/100g), GM组经大鼠尾静脉注射GM (0.3ml/100g),模型组于病灶处注射等量0.9%生理盐水。术后24h处死大鼠并收集血液及胰腺组织,分离血清后按照大鼠血清淀粉酶(AMS)、C反应蛋白(CRP)、胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA检测试剂盒所述步骤检测各指标水平,胰腺组织固定后行病理学检测。(3)42只大鼠随机分为对照组、模型组(包括1h、6h、24h组)、GMTI组(包括1h、6h、24h组),每组6只。除对照组外,麻醉后开腹统一制作Ⅲ级胰腺损伤模型。GMTI组于病灶处直接注射药物(10mg/ml,0.3ml/100g),模型组于病灶处直接注射等量0.9%生理盐水。术后分别于1h、6h、24h处死大鼠并收集血液及胰腺组织,记录腹腔积液量,使用大鼠ELISA检测试剂盒测定血清AMS、CRP、脂肪酶(LPS)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,胰腺组织固定后行病理学检测。(4)5只比格犬,全麻后开腹统一制作Ⅲ级胰腺损伤模型,将十二指肠降段间断固定于右侧腹壁。分别于术后即刻、1d、2d、3d行超声造影检查。记录腹腔积液量。于术前、术后1d、2d、3d测定血清AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α、血WBC及尿TAP。术后3d取材行胰腺组织病理学检查。(5)15只比格犬全麻后开腹统一制作Ⅲ级胰腺损伤模型,超声造影引导下胰周留置引流管。随机分为模型组、GMTI组、GM组,每组5只。GMTI组于超声引导下经导管注射药物至胰腺(4.63ml/10kg), GM组静脉滴注GM(4.625ml/10kg),模型组经导管注射等量0.9%生理盐水。分别于术后即刻、1d、2d、3d、7d行超声造影检查。记录腹腔积液量及引流量。于术前、术后1d、2d、3d、7d测定血清AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α、血WBC及尿TAP。术后7d取材行胰腺组织病理学检查。结果(1)泊洛沙姆P-407单独对胰蛋白酶活性无影响；与泊洛沙姆P-407相比,10mg/ml和20mg/mlGM及GMTI可完全抑制胰蛋白酶活性(P0.01)。(2)与对照组相比,PT组血清AMS、CRP、TAP水平显著增高(P0.01)：与PT组相比,GM组AMS、CRP、TAP水平显著下降(P0.01),10mg/ml、20mg/ml组GMTI可显著抑制AMS、CRP、TAP的表达(P0.01)；4组GMTI均完全抑制了TAP的表达(P0.01)。PT组病理改变较GM组与GMTI组明显,出现胰腺水肿,部分腺泡及胰岛结构破坏,核深染,伴有炎细胞浸润及少量出血。(3)与对照组相比,PT组AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α水平均明显升高(P0.01)；与PT组相比,GMTI组各指标均明显降低(P0.01)；与GMTI组相比,造模后1h PT组各指标明显升高(P0.01),GMTI组略下降(P0.01),造模后6h与24h,PT组AMS活性明显升高(P0.01),GMTI治疗组各指标明显降低(P0.01)。GMTI组较PT组腹水量明显减少(P0.01)。PT组镜下见大范围的腺泡结构破坏,间质脂肪组织坏死,炎细胞浸润及出血,GMTI组腺泡结构破坏程度明显减轻。(4)超声造影清晰显示创伤灶及活动性出血,创伤灶为双期无增强或低增强。腹腔积液量1d较多,3d下降,腹水AMS、LIP升高。造模后1d至3d,前述各指标均较术前升高,3d开始下降(P0.01,P0.05)。镜下见部分胰腺细胞肿胀变性,核深染,伴灶性出血、坏死灶及炎细胞浸润。(5)超声造影示GMTI组创伤灶未见进一步扩大,PT组可见活动性出血及脓肿形成。腹腔积液量随时间延长减少。GMTI组腹水AMS、LPS较GM组减低(P0.01)。两治疗组血清AMS、LPS、CRP及尿TAP较PT组减低1, P0.05)。GM与GMTI组间无显著差异。镜下三组均出现腺体细胞坏死及纤维化,以GMTI组略轻。结论GMTI体外可抑制胰蛋白酶活性且有效浓度与GM相当；GMTI体内对Ⅱ级和Ⅲ级大鼠胰腺损伤模型及比格犬Ⅲ级胰腺损伤模型均具有明显保护作用,与阳性药物GM相当；超声造影引导下置管并局部注射GMTI治疗胰腺损伤可行,GMTI有效抑制胰酶活性,减轻了胰腺组织的炎症反应及病理改变。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R445.1;R657.5

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本文编号：1139718