肾癌肿瘤干细胞相关抗原CD73和DLL4表达情况研究重组PEAs-pVAX1-DLL4转染移植瘤鼠的实验研究

发布时间：2017-11-15 12:26

  本文关键词：肾癌肿瘤干细胞相关抗原CD73和DLL4表达情况研究重组PEAs-pVAX1-DLL4转染移植瘤鼠的实验研究

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【摘要】：肾细胞癌(Renal Cell Carcinoma,RCC)是起源于肾实质和泌尿小管上皮系统的常见于中老年恶性肿瘤,除了手术治疗,缺乏放化疗等治疗措施。故而,寻找验证其表面分子,开发新的治疗手段实属必要。本研究中,收集从2004.5-2012.5月在兰州大学第二医院肾癌手术患者,选取其中159例肾癌标本(透明细胞癌和移形细胞癌)和30例癌旁正常肾组织,通过免疫组化技术(二步法)对肾癌肿瘤干细胞CD73及表面分子DLL4,P-gp在肾透明细胞癌、移行上皮细胞癌表达判定;分析各表面分子阳性表达与临床分期及预后的关系。采用SPSS19.0软件进行统计学分析。计数资料采用Fisher确切概率法检验数量和百分比进行描述,临床数据相关性采用秩和检验和多元线性回归分析。临床病理参数之间的关系用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis H测试。CD73在159例肾细胞癌中75例表达增强,在与正常肾脏癌旁组织比较后,存在统计学意义(p=0.000),而血管壁上的表达比较后不存在统计学意义(p=0.074);与之不同的是,P-gp在正常肾癌旁组织和肾癌组织的表达不存在明显差异。P-gp的染色在85例肾癌组织中有42例在血管内呈强表达并存在统计意义(p=0.000)。DLL4在肾癌组织中(52/89例;58.43%)与正常癌旁组织(1/17例;5.89%)表达比较有统计学意义(p=0.000),血管中DLL4的表达二者之间无统计学差异。CD73在肾癌细胞中的阳性表达水平与肿瘤类型(p=0.000)、肿瘤TNM分期(p=0.002)、肿瘤分级(p=0.002)存在显著相关性。P-gp在RCC的阳性表达仅与肾细胞癌TNM分期(p=0.015)和肿瘤分级(p=0.026)不同存在统计学意义;P-gp在血管壁上的表达与不同的肿瘤类型存在统计学意义(p=0.001)。DLL4与性别(p=0.975)、肿瘤类型(p=0.197)、肿瘤分级(p=0.786)不存在相关性;却依然与RCC肿瘤TNM分期存在统计学差异(p=0.009)。对所有参数通过Cox回归模型进行生存分析和风险比例评估。在肾癌细胞中只有CD73(p=0.037)和肿瘤分级(p=0.035)与患者生存期相关;而P-gp(p=0.065)和DLL4(p=0.536)的阳性表达与疾病的危险程度无关。CD73强表达的患者中位生存期为62.06±5.35月,明显短于CD73表达欠缺的103.72±3.67月。故而得出CD73的表达水平与肾细胞癌密切相关,有可能作为肾细胞癌的诊断、预后相关因子,同样也可作为肾细胞的的治疗靶点。开发分子靶向免疫疫苗药物对包括肿瘤临床治疗产生了神奇的效果。本研究使用H22细胞株建立昆明鼠皮下移植瘤,从分子生物学水平检测,质粒重组体PEAs-p VAX1-DLL4在体内外转染皮下移植瘤鼠对肿瘤抑制的效果探讨。实验得出,DLL4质粒组的昆明鼠生存时间为33.14±6.06天,而对照组为27.67±6.02天,空质粒组生存天数为27.67±9.54天。Dll4质粒组小鼠离体瘤重4.12±2.52g,空质粒组瘤重(5.90±3.97g)与对照组瘤重(6.26±3.01g)不存在统计学意义。而瘤体对照组(17.11±9.30 cm3)与质粒组体积(5.08±2.75cm3)间存在统计学差异(P=0.035)。质粒组肿瘤生长抑制率为70.31%,瘤重抑制率34.19%。CD4阳性表达在质粒组(32.41±4.19 pg/ml)显著性增高,与对照组15.67±7.02 pg/ml(P=0.001)、正常组17.99±6.71 pg/ml(P=0.005)存在差异。IL2,IL4,r-IFN在质粒组表达最高,存在统计学意义。从而可以得出,DLL4 CDNA可在体外、体内进行转染,延缓肿瘤生长,可能与调动辅助T细胞活动有关,对细胞其他生物学影响小。DLL4 CDNA可能是肿瘤复发预防、联合化放疗治疗的一个前景基因。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.11

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本文编号：1189764