USF1调控TGFβ信号通路对黑色素瘤发生发展的影响

发布时间：2017-12-06 21:38

  本文关键词：USF1调控TGFβ信号通路对黑色素瘤发生发展的影响

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【摘要】：背景:上游刺激因子1(USF1)是一种多功能的转录因子,在真核生物中广泛表达,它在糖脂代谢,细胞增殖以及黑素沉积中均起重要作用。近来研究发现它可以激活转化生长因子-β信号通路。而转化生长因子-β信号通路与黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力有密切关系。但是,USF1在黑色素瘤中的作用不详。目的:探讨USF1在黑色素瘤中的表达以及USF1对黑色素瘤发生发展的影响及其机制。方法:采用实时定量PCR技术和Western blotting技术检测USF1在正常人黑素细胞PIG1和黑色素瘤细胞1205-Lu、DO4、WM3211、WM278中的表达情况;高倍光学显微镜观察在转染USF1后的1205-Lu细胞形态变化;细胞迁移实验检测转染USF1对1205-Lu细胞迁移的影响;为分析转染USF1对1205-Lu细胞上皮间质化的影响,采用实时定量PCR技术和Western blotting技术检测转染USF1后1205-Lu细胞E-cad、α-SMA、Vi和FN表达情况;为进一步分析USF1对黑色素瘤发生发展的影响,采用qRT-PCR和Western blotting检测转染USF1后1205-Lu细胞中(转化生长因子β)TGF-β、Smad2和α-SMA表达情况,以及si RNA干扰USF1后1205-Lu细胞中TGF-β、Smad2和α-SMA表达情况;最后采用Western blotting检测单独或联合转染si-RNA和TGF-β后1205-Lu细胞中Smad2、E-cad、α-SMA、Vi和FN的表达情况,以及高倍光学显微镜观察在单独或联合转染si-RNA和TGF-β后的1205-Lu细胞形态变化。结果:(1)USF1在1205-Lu、DO4、WM3211和WM278细胞的m RNA和蛋白相对表达量均明显高于PIG1细胞,差异具有统计学意义(P均0.05)。其中USF1在1205-Lu细胞中的表达量最高。(2)在转染USF1后,1205-Lu细胞形态变长,呈梭状,与对照组相比变化明显。同时在转染USF1后,1205-Lu细胞迁移能力与对照组相比明显增强。(3)在1205-Lu细胞转染USF1 48小时后,α-SMA、Vi和FN的m RNA和蛋白相对表达量均明显高于未转染USF1的对照组,差异具有统计学意义(P均0.05)。E-cad在1205-Lu细胞转染USF1 48小时后的m RNA和蛋白相对表达量明显低于未转染USF1的对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。(4)在1205-Lu细胞转染USF1 48小时后,TGF-β、Smad2和α-SMA的m RNA和蛋白相对表达量均明显高于未转染USF1的对照组,差异具有统计学意义(P均0.05)。同时在1205-Lu细胞转染si-USF1 48小时后,USF1、TGF-β、Smad2和α-SMA的m RNA和蛋白相对表达量均显著低于未转染si-USF1的对照组,差异具有统计学意义(P均0.05)。(5)采用si RNA干扰USF1 48小时后,Smad2、α-SMA和FN的表达明显低于未转染si-USF1和TGFβ的对照组,差异具有统计学意义(P均0.05);在转染TGFβ48小时后,Smad2、α-SMA、Vi和FN的表达明显高于未转染si-USF1和TGFβ的对照组和转染si-USF1和TGFβ组,差异具有统计学意义(P均0.05);同时在转染TGFβ组中E-cad的表达明显低于未转染si-USF1和TGFβ的对照组和转染si-USF1和TGFβ组,差异具有统计学意义(P均0.05)。在转染si-USF1和TGFβ48小时后,Smad2、E-cad、α-SMA、Vi和FN表达和未转染si-USF1和TGFβ组比较无明显差异(P0.05)。○6在转染TGFβ后,1205-Lu细胞形态变长,呈梭状,与未转染si-USF1和TGFβ的对照组和转染si-USF1和TGFβ组相比变化明显,而转染si-USF1和TGFβ后,能够明显逆转TGFβ诱导的细胞形态学变化。结论:USF1在黑色素瘤细胞中存在明显高表达,同时USF1能够通过激活TGFβ信号通路促进黑色素瘤细胞发生上皮间质转化和迁移,USF1可能成为一个新的黑色素瘤治疗靶点。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.5

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本文编号：1260058