循环肿瘤细胞检测的方法学建立及在中晚期肝细胞癌和结直肠癌肝转移中动态检测的应用研究

发布时间：2017-12-08 16:34

  本文关键词：循环肿瘤细胞检测的方法学建立及在中晚期肝细胞癌和结直肠癌肝转移中动态检测的应用研究

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【摘要】：背景:肿瘤转移是肿瘤治疗中亟待解决的问题。近年来的研究表明,当肿瘤处于癌前病变的时期,肿瘤细胞已经出现循环系统的播散,部分肿瘤细胞可在适宜的环境下定植形成微小的转移灶。因此,早期诊断肿瘤,早期接受有效的治疗,可明显改善患者预后,延长患者生存期。目前研究认为,肿瘤复发的关键因素在于循环肿瘤细胞(Circulating tumor cells,CTCs)潜在的侵袭能力。CTCs在参与肿瘤转移过程中,相关的过程被称之为上皮间质转化,即肿瘤上皮细胞发生相应变化,使肿瘤细胞之间的结合力减弱,这增强了肿瘤的迁移力和浸润能力,使其从原发灶脱落,发展成为远处转移。CTCs携带原发肿瘤相关的信息,可作为“液体活检”,且检查方法方便、创伤小且安全,更能够真实的反映肿瘤的生物学特征,在肿瘤的诊疗过程中起重要作用。CTCs检测可作为“液态活检”,在肿瘤早期进行检测、指导辅助治疗,从而达到肿瘤个体化治疗的目的。CTCs检测阳性常常提示出现远处转移或微转移,因此CTCs检测可对肿瘤进行早期检测早期预防。与此同时,CTCs还能够提供肿瘤的相关生物学信息,实时监测患者病情,从而达到延长生存期改善患者生活治疗的目的。相关研究发现,CTCs计数在非小细胞肺癌、乳腺癌、结直肠癌、肾癌等恶性肿瘤中有良好的应用,可有效对疾病预后进行评估。目的:本文将建立一种有效的检测外周血循环肿瘤细胞的方法,该方法富集系统联合应用梯度密度离心法和免疫磁珠法,并将其应用与临床实验,动态监测中晚期肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)及结直肠癌肝转移(Colorectal cancer liver metastases,CRLM)患者冷冻消融术后循环肿瘤细胞的变化,对冷冻消融术进行疗效评价及对患者行生存分析。方法:1、将不同数量、不同细胞株混入健康人学标本中以模拟肿瘤患者的血样,对该血样进行富集检测,计算掺入细胞实验肿瘤细胞的回收率以验证其方法的有效性。2、采用上述方法联合应用实时定量pcr法监测47例中晚期肝细胞癌及55位结直肠癌肝转移患者冷冻治疗前后外周血ctcs动态变化水平,并对患者行生存分析。结果:1、不同细胞株随着肿瘤细胞浓度的增加,检测到的ctcs数量也随之增加,相关性最好的肝细胞癌细胞株和结直肠癌细胞株为hepg2和cx-1,具有显著相关性。2、将hepg2、cx-1细胞掺入健康志愿者外周血形成梯度稀释,以验证本方法ctcs的回收率,回收的细胞与添加细胞间数量有显著相关性。3、47例中晚期hcc患者冷冻消融术术后7天、30天的与术前的基线相比,ctcs数目明显减少(p0.01)。4、47例中晚期hcc患者冷冻治疗后的ctcs标志物的ct值均升高,2-ct值均小于1,表明冷冻冷冻治疗后肿瘤标记物表达不同程度的减少。统计学分析显示数据有显著统计学意义(p0.01),5、47例中晚期hcc患者接受冷冻消融术后,kaplan-meier生存分析表明,ctcs升高组患者术后生存期显著短于ctcs降低组(p0.05)6、55例crlm患者冷冻消融术术后7天、30天的与术前的基线相比,ctcs数目明显减少(p0.01)。7、55例crlm患者冷冻治疗后的ctcs标志物的ct值均升高,2-ct值均小于1,表明冷冻冷冻治疗后肿瘤标记物表达不同程度的减少。统计学分析显示数据有显著统计学意义(p0.01)8、55例crlm患者接受冷冻消融术后,kaplan-meier生存分析表明,ctcs升高组患者术后生存期显著短于ctcs降低组(p0.05)结论:1、CTCs富集检测方法可有效且敏感的从肿瘤患者外周血细胞中检测出CTCs2、冷冻消融术后CTCs数目明显减少、相关肿瘤标志物mRNA表达水平降低3、CTCs数目降低的患者较CTCs数目升高的患者生存期长。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

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本文编号：1267087