星形胶质细胞NDRG2在七氟烷预处理神经保护作用中的机制研究

发布时间：2017-12-08 19:00

  本文关键词：星形胶质细胞NDRG2在七氟烷预处理神经保护作用中的机制研究

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【摘要】：目的:大量在体研究和离体研究均表明,常用吸入性麻醉药七氟烷预处理可诱导脑缺血耐受,减轻脑缺血再灌注损伤,但其机制尚未完全明了。N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是一个在中枢神经系统内主要表达于星形胶质细胞的基因,与细胞增殖、分化、应激等功能密切相关。我们前期工作发现,局灶性脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带区NDRG2发生了时间和空间上的表达变化,且参与了缺血再灌注损伤后p53介导的细胞凋亡过程。本研究旨在从在体和离体两方面探讨NDRG2及其介导的细胞凋亡和星形胶质细胞功能改变在七氟烷预处理神经保护效应中的作用及机制。方法:在体—健康雄性成年SD大鼠,2%七氟烷预处理1h,预处理结束2h后行大脑中动脉阻闭(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导局灶性脑缺血,缺血120min后抽出线栓恢复灌注。再灌注24 h依据Garcia评分标准评估神经功能,并行TTC(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色计算脑梗死容积百分比,采用Western Blot、real-time PCR、免疫荧光染色、TUNEL(transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labeling,转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素末端标记)染色等测定缺血半暗带区NDRG2表达、分布和细胞凋亡情况。离体—取新生SD鼠的大脑皮层培养原代星形胶质细胞,采用脂质体转染法向细胞内转染NDRG2 si RNA或NDRG2过表达质粒,转染24h给予2%七氟烷预处理1h,预处理结束2h后进行氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)4h,复氧24h检测细胞活力(MTT试验)、细胞毒性(LDH释放率)、凋亡情况(TUNEL染色、活化Caspase-3表达)以及NDRG2表达变化。结果:七氟烷预处理显著降低了局灶性脑缺血再灌注引起的大鼠神经功能损伤和脑梗死容积,减少了缺血半暗带组织TUNEL染色阳性细胞数目和活化Caspase-3表达量,抑制了缺血后NDRG2上调和核转移现象(P0.05)。原代培养星形胶质细胞OGD模型中得到了类似的结果。采用NDRG si RNA降低原代培养星形胶质细胞中NDRG2表达可增加细胞活力,减轻氧糖剥夺引起的LDH(lactate dehydrogenase,乳酸脱氢酶)释放,降低TUNEL阳性细胞数和活化Caspase-3表达(P0.05);而转染NDRG2过表达质粒使原代培养星形胶质细胞中NDRG2上调则可部分逆转七氟烷预处理减轻氧糖剥夺损伤的作用(P0.05)。结论:七氟烷预处理可通过抑制脑组织星形胶质细胞内NDRG2的表达和活性,减轻细胞凋亡,改善星形胶质细胞功能,从而减轻脑缺血再灌注损伤。本研究为七氟烷预处理可能的临床应用提供了可靠的理论支持,也为开发新的脑缺血损伤防治措施提供了新的靶点。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R614
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本文编号：1267453