miR-124对帕金森病中多巴胺能神经元的调控作用及机制研究

发布时间：2017-12-10 10:18

  本文关键词：miR-124对帕金森病中多巴胺能神经元的调控作用及机制研究

  更多相关文章： PD 多巴胺能神经细胞 miR-124 AMPK/mTOR通路 细胞自噬与凋亡

【摘要】：研究背景:帕金森综合症(Parkinson's disease,PD)是一种常见的神经系统变性疾病,多伴有神经细胞线粒体功能紊乱。PD的发病原因以及发病机制尚未完全明确,目前尚无有效延缓或治愈手段。PD的发病与人口老龄化密切相关,探索多巴胺神经元凋亡的原因及PD防治越来越受到老龄化国家的重视。在神经退行性疾病中,自噬相关通路的缺陷和线粒体功能障碍都是PD的病因之一,因此通过调节线粒体自噬进而控制PD的发病过程也是目前研究的主要方向。研究目的:本研究前期实验证实,miR-124在MPP+诱导的神经细胞模型中,随着药物浓度的升高而下调。miR-124对PD细胞模型中自噬相关基因及蛋白的调节作用仍然有待研究。本研究旨在研究miR-124在PD中多巴胺能神经元的凋亡与自噬的潜在作用及相关机理。研究方法:(1)构建MPP+诱导SH-SY5YPD损伤细胞模型,通过MTT、流式检测、Q-PCR研究MPP+对SH-SY5Y增殖以及凋亡的影响及miR-124表达的影响。(2)建立SH-SY5Y细胞的PD损伤细胞模型、miR-124表达下调细胞模型及miR-124过表达细胞模型,通过流式细胞术、Q-PCR和WB等研究miR-124下调或过表达对SH-SY5Y细胞凋亡及自噬水平的影响。(3)建立SK-N-SH细胞系PD损伤细胞模型、miR-124上/下调细胞模型,验证SK-N-SH模型中细胞凋亡、自噬水平的变化。并通过Q-PCR和WB研究模型对自噬相关通路AMPK/mTOR通路的影响。研究结果:(1)MPP+药物建立帕金森病多巴胺能神经元(DA)凋亡模型及miR-124表达水平变化。利用MPP+建立了帕金森病损伤细胞模型并证实MPP+浓度的升高使得miR-124的表达下调。浓度达到200 uM时,细胞内miR-124的表达显著下调(p0.05)。(2)miR-124下调与MPP+给药均可引起SH-SY5Y细胞自噬过程及凋亡水平的升高。miR-124单独下调与MPP+给药均能导致细胞群体中凋亡细胞的比例、自噬指标LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比率和Beclin表达量(P0.05)增加。miR-124补偿表达可以逆转病理模型中细胞凋亡及自噬水平(p0.01)。(3)miR-124通过调控AMPK/mTOR通路磷酸化水平抑制细胞自噬及凋亡与本底对照相比,PD损伤模型中凋亡细胞上升了 2.5倍,miR-124下调组凋亡细胞上升了 2.44倍(p0.05)。对PD损伤细胞回补miR-124,则凋亡细胞明显下降了 65%(P0.05)。MPP+(100uM)作用和下调 miR-124均引起p-AMPK的升高,p-mTOR的下降。而在MPP+作用后回补miR-124,p-AMPK与p-mTOR显著恢复,趋于正常水平(均P0.05),而无论MPP+还是miR-124对AMPK与mTOR的总蛋白水平均没有显著影响(均P0.05)。上述结论可以在SK-N-SH细胞模型中重复验证。结论:MPP+在诱导PD神经细胞损伤模型中对神经细胞凋亡及自噬水平的促进作用进一步得到证实,且能抑制细胞中miR-124的表达。miR-124作为PD损伤细胞模型中重要的负向调节元件,其表达水平的上调可通过对AMPK/mTOR通路中AMPK以及mTOR的磷酸化水平的调控作用,抑制神经细胞内的自噬及凋亡过程。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R742.5

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本文编号：1274113