针刺抑制基质金属蛋白酶可延长脑梗死溶栓时间窗的实验研究

发布时间：2017-12-13 11:04

  本文关键词：针刺抑制基质金属蛋白酶可延长脑梗死溶栓时间窗的实验研究

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【摘要】：本学位论文得到国家自然科学基金面上项目"基于ERK1/2信号转导通路的针刺延长脑梗死溶栓时间窗的实验研究(项目编号81674067)与江苏省自然科学技基金面上项目"针刺抑制基质金属蛋白酶可延长脑梗死溶栓时间窗的实验研究(项目编号BK20131458)的资助。目的:rt-PA静脉溶栓疗法被公认为是治疗急性脑梗死最有效的干预手段。但由于严格溶栓时间窗(4.5h)的限制,限制了其临床的广泛运用,如何延长脑梗死时间窗一直是医学界广泛关注的热点和难点。课题组前期研究发现,针刺具有延长脑梗死溶栓时间窗的潜在可行性。有鉴于此,本研究拟首先明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应,其次探究针刺延长溶栓时间窗的作用机理,为临床延长脑梗死溶栓时间窗提供有效方法和高层次的理论依据,造福于广大急性脑梗死患者。方法:实验选用SPF级、雄性SD大鼠,采用大鼠自体血栓栓塞模型为脑梗死研究对象,分为正常组(Normal group)、假手术组(ShamGroup)、缺血模型组(Model Group)、阿替普酶溶栓组(rt-PA Group)、针刺干预后溶栓组(Acupuncture Group),其中后3组分别按照各溶栓时间点分为3h、4.5h、6h、9h溶栓亚组,急性脑梗死模型建立成功后2h,针刺干预采用"醒脑开窍"针刺法作为干预方法,各组大鼠(除正常组和假手术组外)予以静脉注射rt-PA溶栓治疗,并于24h后取相应组织进行观察。观察对比针刺前后各组大鼠神经行为学改变、脑梗死体积百分比、脑出血量、脑含水量、血脑屏障通透性的改变,并通过HE染色观察、qPCR和western blot方法检测IL-1β、TNF-α、Claudin-5、Occludin的表达,明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的酶活性改变。结果:(1)大鼠神经功能评分:model group与sham group相比较,神经功能评分明显增加,其差异具有统计学意义(P0.01):rt-PA group与model group相比较,超时间窗外溶栓(6h、9h)的各组大鼠神经功能均有不同程度改变,但在时间窗内溶栓(3h、4.5h),大鼠神经功能损伤症状改善程度较为显著,时间窗内rt-PA溶栓治疗有效(P0.05);Acupuncture group与rt-PA group比较,针刺能够有效改善大鼠神经功能损伤症状,尤其以针刺干预6h亚组改善最为显著,其差异具有统计学意义(P0.05)。(2)大鼠脑梗死体积百分比:model group与sham group相比较,脑梗死体积明显增加,其差异具有统计学意义(P0.01);rt-PA group与model group相比较,超时间窗外溶栓(6h、9h)的各组大鼠脑梗死体积均有不同程度降低,但在时间窗内溶栓(3h、4.5h),脑梗死体积改善程度较为显著,提示时间窗内rt-PA溶栓治疗有效(P0.05);Acupuncture group与rt-PA group比较,针刺能够有效改善大鼠脑梗死体积,尤其以针刺干预6h亚组改善最为显著,其差异具有统计学意义(P0.05)。(3)大鼠脑出血量:rt-PA group与model group相比较,超时间窗外溶栓(6h、9h)的各组大鼠脑出血量呈上升趋势,但在时间窗内溶栓(3h、4.5h),脑出血量明显下降,提示时间窗内rt-PA溶栓治疗有效(P0.05);Acupuncture group与rt-PA group比较,针刺能够有效改善大鼠脑出血症状,尤其以针刺干预6h亚组改善最为显著,其差异具有统计学意义(P0.05)。(4)大鼠脑含水量:model group与sham group相比较,大鼠脑组织含水量明显增加,其差异具有统计学意义(P0.01);rt-PA group与model group相比较,超时间窗外溶栓(6h、9h)的各组大鼠脑组织含水量均有不同程度增加,但在时间窗内溶栓(3h、4.5h),大鼠脑组织含水量降低较为显著,提示溶栓治疗有效(P0.05);Acupuncture group与rt-PA group比较,针刺能够有效降低大鼠脑组织含水量,尤其以针刺干预6h亚组改善最为显著,其差异具有统计学意义(P0.05)。(5)伊文氏蓝渗透法:model group与sham group相比较,大鼠血脑屏障损伤程度增加,其差异具有统计学意义(P0.05);rt-PA group与model group相比较,超时间窗外溶栓(6h、9h)的各组大鼠血脑屏障均有不同程度损伤,但在时间窗内溶栓(3h、4.5h),大鼠血脑屏障改善程度较为显著,溶栓治疗有效(P0.05);Acupuncture group与rt-PA group比较,针刺能够有效减轻rt-PA溶栓后大鼠血脑屏障损伤症状,尤其以针刺干预6h亚组改善最为显著,其差异具有统计学意义(P0.05)。(6)各组大鼠脑组织中炎症因子的表达:model group与sham group相比较,超时间窗外溶栓(6h、9h)的各组大鼠脑组织中IL-1β、TNF-α的mRNA和蛋白表达明显增高,但在时间窗内溶栓(3h、4.5h),IL-1β、TNF-α的mRNA和蛋白表达呈明显下降趋势,溶栓治疗有效(P0.05);Acupuncture group与rt-PA group比较,针刺能够下调大鼠缺血区组织中IL-1 β、TNF-α的mRNA和蛋白表达,尤其以针刺干预6h亚组改善最为显著,其差异具有统计学意义(P0.05)。(7)各组大鼠脑组织中MMP-9、MMP-2酶活性的检测::model group与shamm group相比较,超时间窗外溶栓(6h、9h)的各组大鼠脑组织中MMP-9、MMP-2酶活性的抑制并不明显,但在3h、4.5h溶栓之后,MMP-9、MMP-2酶活性抑制明显降低,溶栓干预有效(P0.05);Acupuncture group与rt-PA group比较,针刺能够下调大鼠缺血区组织中MMP-9、MMP-2的活性,尤其以针刺干预6h亚组改善最为显著,其差异具有统计学意义(P0.05)。(8)各组大鼠脑组织中 Occludin、Claudin-5 的表达:model group 与 sham group 相比较,超时间窗外溶栓(6h、9h)的各组中大鼠脑组织中Claudin-5、Occludin的表达下调,但在时间窗内溶栓(3h、4.5h),Claudin-5、Occludin表达呈明显上升趋势,溶栓治疗有效(P0.05);Acupuncture group与rt-PA group比较,针刺能有效上调Occludin、Claudin-5的蛋白表达,尤其以针刺干预6h亚组改善最为显著,其差异具有统计学意义(P0.05)。结论:(1)rt-PA溶栓疗法在急性脑梗死治疗中疗效肯定,但由于受到严格溶栓时间窗限制,极易引发血脑屏障损伤,且并发症的发生和发展程度会因错过最佳溶栓时间而呈逐渐加重趋势。(2)针刺及时干预能够有效改善脑梗死模型大鼠神经功能损伤程度、血脑屏障通透性、脑水肿程度和颅内出血性转化等症状的发展,具有延长脑梗死时间窗的效应,其溶栓时间窗可延长到4.5h外,甚至到6h。(3)针刺能够下调脑缺血损伤组织中炎症因子的mRNA和蛋白表达,减轻炎症反应的程度,继而抑制基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)的过度生成,并通过上调紧密连接蛋白从而实现对血脑屏障结构和功能的保护作用。这可能是针刺延长脑梗死溶栓时间窗的核心机制,对临床有效治疗脑梗死提供了行新的思路和方法。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R245

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1284886