表没食子儿茶素没食子酸酯促进成骨细胞增殖及骨向分化的研究

发布时间：2017-12-14 06:58

  本文关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯促进成骨细胞增殖及骨向分化的研究

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【摘要】：目的为探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)在成骨细胞增殖及骨向分化中的作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法1、在MC3T3-E1细胞中使用MTT法、流水细胞术检测、Edu检测、Real time PCR和Western Blot试验方法探讨不同浓度的EGCG对成骨细胞的毒性作用,并选取合适浓度探讨EGCG对成骨细胞增殖作用的影响。2、使用碱性磷酸酶染色检测、碱性磷酸酶测定、茜素红染色检测、Realtime PCR和Western Blot试验方法证明EGCG对成骨细胞骨向分化的作用。3、使用碱性磷酸酶染色检测、Real time PCR和Western Blot试验方法对EGCG促进成骨细胞增殖分化机制进行初步探讨。结果1、5μM-50μM的EGCG对MC3T3-E1细胞无明显毒性作用,而100μM,2000μM组的EGCG对MC3T3-E1细胞有毒性作用。其中15μM,30μM两个浓度组的OD值比对照组明显升高,提示EGCG在一定的浓度范围可能对MC3T3-E1细胞有促进其增殖的作用。MTT实验证实30μM浓度的EGCG可以促进MC3T3-E1细胞增殖。流式细胞术检测30μM浓度的EGCG可明显促进MC3T3-E1细胞S期进程。Edu实验也显示30μM的EGCG作用组MC3T3-E1细胞处在S期的细胞比例约为51±8%,而空白对照组S期比例约为38±5%,EGCG处理组的MC3T3-E1细胞S期比例明显高于对照组,两组细胞S期比例分布具有统计学差异。30μM的EGCG处理的MC3T3-E1细胞中细胞周期蛋白D1的mRNA表达水平和蛋白表达水平都明显高于空白对照组,差异有统计学意义。2、碱性磷酸酶染色显示EGCG处理组的MC3T3-E1细胞中碱性磷酸酶阳性细胞明显多于对照组,差异有统计学意义。碱性磷酸酶活性测定显示,EGCG处理组的MC3T3-E1细胞中碱性磷酸酶活性明显高于对照组,差异有统计学意义。Realtime PCR和Western Blot的检测结果显示EGCG处理组的MC3T3-E1细胞中碱性磷酸酶的mRNA表达水平和蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义。茜素红染色显示,不管是第7天还是第14天,EGCG处理组的MC3T3-E1细胞的矿化结节都明显高于对照组,差异有统计学意义。3、Real time PCR和Western Blot的检测结果显示,EGCG处理组的MC3T3-E1细胞中β-catenin的mRNA表达水平和蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义。采用ER拮抗剂ICI 182,780和EGCG共同处理MC3T3-E1细胞后,β-catenin的mRNA表达水平和蛋白表达水平与对照组没有统计学差异。采用ER拮抗剂ICI 182,780和EGCG共同处理MC3T3-E1细胞后,碱性磷酸酶的活性与对照组没有统计学差异。结论:一定浓度的EGCG可促进成骨细胞的增殖和骨向分化。其机制可能是通过与雌激素受体相互作用进而激活Wnt信号通路的β-catenin来完成。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R580

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本文编号：1286946