B3型胸腺瘤与胸腺癌中microRNA-454-3p及其靶基因SYT6的分子病理研究

发布时间：2017-12-14 13:00

  本文关键词：B3型胸腺瘤与胸腺癌中microRNA-454-3p及其靶基因SYT6的分子病理研究

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【摘要】：胸腺上皮性肿瘤是发生于前上纵隔的罕见肿瘤,根据细胞组成比例不同和上皮形态差异分为多种亚型。其中,B3型胸腺瘤和胸腺癌恶性程度最高,而且这两个肿瘤无论在组织形态学,还是生物学行为上均存在相似性,常导致误诊。MiRNAs是短链非编码RNA,长度约为22nt。MiRNAs已经被提出可作为肿瘤抑制物和癌症生物学行为的候选标志物。本研究通过多种实验方法对B3型胸腺瘤和胸腺鳞状细胞癌病例进行回顾性分析,研究这两者的临床病理学特征、诊断、鉴别诊断及其在miRNAs方面的差异和功能。材料和方法(1)收集南京军区南京总医院、安徽省立医院南区病理科手术切除的B3型胸腺瘤和胸腺癌病例共59例(30例B3型胸腺瘤和29例胸腺癌),收集完整的临床病理资料,通过免疫组织化学标记方法研究MUC1、GLUT1在胸腺上皮性肿瘤的表达并进行数据分析。(2)选取胸腺增生组织、B3型胸腺瘤及胸腺癌组织各3例,提取组织总RNA,运用miRNA基因芯片法对各组标本进行了miRNA表达谱研究,并对结果进行GO分析及信号通路分析。(3)从下调表达的miRNA中挑选出感兴趣的几种miRNA采用荧光实时定量RT-PCR方法进一步检测这三组组织中miRNA的表达情况。(4)对B3型胸腺瘤及胸腺癌之间差异表达明显的miRNA及其靶基因进行荧光素酶报告基因检测。购买靶基因相关的抗体,进行免疫组化检测,进一步验证靶基因蛋白的表达情况。结果(1)MUC1和GLUT1在胸腺癌中表达高于B3型胸腺瘤,差异有明显统计学意义。(2)B3型胸腺瘤3例及胸腺鳞状细胞癌3例进行miRNA芯片分析,结果显示与B3型胸腺瘤相比,胸腺癌有32个上调miRNA和19个下调miRNA。(3)选取其中下调明显的 miR-192-5p,miR-454-3p 和 miR-148a-3p 进行 QRT-PCR验证,结果显示miR-454-3p和miR-148a-3p与miRNA芯片表达谱的实验结果相符合。(4)通过生物信息学分析研究,胸腺癌中下调表达的miR-454-3p和miR-148a-3p具有共同的靶基因SYT6。利用双荧光素酶报告基因检测方法,显示miR-454-3p对SYT6有显著的抑制作用。免疫组化标记显示SYT6在胸腺鳞状细胞癌中阳性表达,而在B3型胸腺瘤中阴性。结论B3型胸腺瘤和胸腺癌组织学形态、生物学行为相近,可通过免疫组化MUC1、GLUT1辅助鉴别诊断。两者在微小RNA方面亦存在差异,下调组miR-454-3p和miR-148a-3p的表达失调在胸腺癌中是一个经常性的事件。miR-454-3p明显抑制调控靶基因SYT6基因。miR-454-3p是抑癌基因,其靶基因SYT6在胸腺鳞状细胞癌中可能为潜在的原癌基因,miR-454-3p和靶基因SYT6通过促进增殖和分化从而在胸腺癌的发病机制中具有重要作用,可作为诊断标记物和潜在的治疗靶点。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R736.3

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本文编号：1287964