去泛素化酶RPN11促进乳腺癌细胞增殖和迁移

发布时间：2017-12-16 08:17

  本文关键词：去泛素化酶RPN11促进乳腺癌细胞增殖和迁移

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【摘要】：乳腺癌的发病机制尚不明确。泛素化可以在许多方面影响癌症的发生和发展。泛素化是一个动态的、可逆的过程;而泛素化的反向反应和调节是由去泛素化酶控制的。RPN11是一种重要的去泛素化酶,影响细胞活性及肿瘤转化。有研究显示RPN11在癌细胞中表达上调,主要见于黑色素瘤、卵巢癌及白血病细胞,在这些癌中RPN11可作为恶性肿瘤的标志。并可作为癌症治疗的一个靶点。为探讨RPN11在乳腺癌发病机制中所起的作用,我们首先检测对比RPN11在乳腺癌及其癌旁组织的表达情况。采用行业内通用方法qRT-PCR对研究患者体内癌组织中RPN11的表达,结果显示较癌旁组织,乳腺癌组织高表达RPN11。此外,我们检索并分析GSE3744数据集,该数据集包含47例乳腺癌数据,也同样发现乳腺癌组织中高表达RPN11。我们应用western blot的方法检测6例乳腺癌新鲜组织及其癌旁组织中RPN11的表达,也发现RPN11在乳腺癌组织中高表达。我们通过免疫组化的方法检测RPN11在142例乳腺癌病例的组织芯片中的表达情况。结果显示,RPN11在正常组织中表达微弱,在乳腺癌组织中高表达。同时,RPN11高表达与高临床分期密切相关(P0.05)。在乳腺癌细胞系MDA-MB-231及T47D中,我们应用siRNA的方法研究降低RPN11表达后对细胞增殖的影响。通过应用MTT法检测,结果表明降低RPN11的表达显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231及T47D的增殖。此外,我们应用流式细胞技术检测了 RPN11对细胞凋亡及细胞周期的影响。同样,数据表明敲低RPN11的表达可引起细胞凋亡率的提高以及细胞周期抑制。其中我们还观察到,RPN11表达的降低诱导细胞周期在G0/G1停滞。另外,我们通过western blot的方法检测了细胞周期蛋白D1及c-PARP的表达,结果表明,敲低RPN11的表达可上调c-PARP的表达,抑制细胞周期蛋白D1的表达。相反,我们在人乳腺癌细胞系MCF7及Hs578T中通过高表达载体过表达RPN11,结果表明过表达RPN11促进细胞增殖,使细胞周期进展,抑制凋亡。Transwell实验结果表明,敲低RPN11的表达后乳腺癌细胞的迁移能力下降。上皮间质转化(EMT)是肿瘤细胞具有迁移能力的重要一步。我们通过qRT-PCR的方法检测敲低RPN11后EMT相关基因的表达。我们发现E-cadherin表达上调,N-cadherin、FN1及vimentin表达下降。EMT相关的调节因子如Snail(SNAI1)和Slug(SNAI2)也同样受抑制。Western blot检测也显示了类似的结果。总的来说,我们的数据表明,在乳腺癌中Rpn11的高表达可能参与促进癌细胞迁移。本次研究在乳腺癌组织中证实了 RPN11的表达情况并确认其对乳腺癌预后的影响。通过一系列的细胞学实验证实其对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及细胞迁移的影响。RPN11可作为靶点之一,为靶向治疗乳腺癌提供理论依据。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

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本文编号：1295321