苏木、川芎对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠模型原发和复发肿瘤的影响

发布时间：2017-12-19 06:05

  本文关键词：苏木、川芎对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠模型原发和复发肿瘤的影响

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【摘要】：立题依据近年来,尽管对于肺癌的预防、诊断和治疗取得了一定的进步,但其发病率与死亡率仍比其他恶性肿瘤要高,肿瘤的复发和转移一直是影响肿瘤预后的主要原因。根据达尔文进化理论,肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSCs)是一类较普通肿瘤细胞具有更强自我更新能力的细胞。针对肿瘤干细胞的治疗策略,将为肿瘤的治疗提供新的思路。CSCs被认为是具有异质性和无限增殖能力的一小部分细胞亚群,在肿瘤的发生、发展、复发及转移中都表现出来较普通肿瘤细胞更强的恶性生物学行为。根据肿瘤患者的临床表现、血液流变学异常等现象,均可以说明肿瘤患者存在血瘀证,并与肿瘤患者的预后较差相关。另外手术也会损伤患者的血管内皮细胞,激活凝血机制,使血液处于高凝状态。因此在手术前后使用活血药干预血液的高凝状态,对于改善干细胞样细胞荷瘤小鼠的治疗效果有一定的意义。前期研究中已经证实苏木、川芎等活血药可能通过影响CD44V6、p-选择素、CD29、E-cadherin、HIF-1 α的表达在一定程度上抑制肺癌的转移行为。另外,苏木含药血清及苏木水煎剂在体外实验中均可以对肺癌细胞的增殖产生一定的抑制作用,这与其影响细胞的周期、侵袭及黏附能力有关。苏木、川芎联合顺铂可对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠肿瘤组织的HIF-1 α产生抑制作用,并从mRNA水平上抑制肺癌干细胞样细胞的E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail表达,抑制EMT上皮间质转化过程从而抑制肿瘤转移。本课题是前期课题的延续与扩展,结合肿瘤干细胞理论,观察苏木、川芎及顺铂对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠手术模型的生长、复发等恶性生物学行为的影响,以期为临床上合理选择活血药及其应用时机,从肺癌干细胞的角度探索活血药的可能作用机制及作用靶点,为充实肺癌血瘀证的治疗理论及临床上合理应用活血药提供借鉴。研究目的1、研究活血药苏木与川芎对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠模型原发和复发肿瘤的抑制作用;2、从HIF-1 α及上皮间质转化相关分子的角度,研究活血药抑制肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠模型原发和复发肿瘤的作用机制。研究方法1、模型制备:采用无血清培养法分选PG-BE1细胞系中的干细胞样细胞亚群;将干细胞样细胞亚群接种于老鼠下肢脚垫。采用药物对小鼠进行干预,第21天截肢并剥取小鼠原发瘤组织。继续观察小鼠的复发情况,并用药物进行干预,于第40天时获取复发瘤组织;2、分组情况:对原发瘤组织进行分组。依据干预手段的不同,将肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠模型原发瘤组织分为空白组、中药组、中药加顺铂组、顺铂组4组,分别用生理盐水、中药水煎液、中药水煎液加顺铂、顺铂对小鼠进行干预,第21天取原发瘤组织。对复发瘤组织进行分组。依据手术前后干预手段的不同,将肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠分为空白组、中药术前组、中药术后组、顺铂术前组、顺铂术后组、中药加顺铂术前组、中药加顺铂术后组7组。分别用生理盐水、术前用中药水煎液、术后用中药水煎液、术前用顺铂、术后用顺铂、术前用中药水煎液联合顺铂、术后用中药水煎液联合顺铂对小鼠进行干预,第40天取复发瘤组织进行检测;3、活血药抑瘤作用研究:(1)采用观察小鼠成瘤时间法,以观察苏木、川芎对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠成瘤时间的影响。(2)采用称量法,观察苏木、川芎对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠术后体重的影响。(3)观察小鼠肿瘤复发模型情况,计算苏木、川芎对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠肿瘤复发率及复发率抑制率。(4)采用称重法,对原发瘤组织和复发瘤组织进行称重,观察苏木、川芎对原发瘤组织和复发瘤组织瘤重、抑瘤率、复发瘤重及复发瘤重抑制率的影响;4、活血药抑瘤机制研究方法:(1)采用Western Blot法及免疫组化法检测原发瘤组织和复发瘤组织HIF-1 α蛋白的表达,观察苏木、川芎对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠原发瘤组织和复发瘤组织HIF-1 α蛋白表达的影响。(2)采用Western Blot法、免疫组化法及免疫荧光法检测原发瘤组织和复发瘤组织EMT相关分子E-cadherin、CD44S、CD44V6、β1整合素的表达,观察苏木、川芎对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠原发瘤组织和复发瘤组织EMT相关分子的影响。研究结果一、活血药苏木、川芎提高了化疗药顺铂的抑瘤率1、苏木可提高顺铂对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠模型原发肿瘤的抑瘤率:肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠各组体重的实验结果显示,术后各组间体重无统计学差异(P0.05)。原发瘤重方面,苏木联合顺铂组较空白组、苏木组和顺铂组减少(P0.05)。顺铂组原发瘤重较空白组、苏木组降低(P0.05)。苏木组较空白组原发瘤重相当(P＞0.05)。在原发瘤抑制率方面,苏木组抑瘤率为8.93%,顺铂组抑瘤率为35.27%,苏木加顺铂组抑瘤率为48.76%。2、苏木可提高顺铂对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠模型复发肿瘤的抑瘤率:与空白组、苏木术前组、苏木术后组、顺铂术前组、顺铂术后组比较,苏木加顺铂术前组、苏木加顺铂术后组复发瘤重明显下降(P＜0.05),苏木加顺铂术后组较苏木加顺铂术前组复发瘤重下降明显(P＜0.05);与空白组、苏木术前组、苏木术后组比较,顺铂术前组、顺铂术后组复发瘤重明显下降(P0.05),顺铂术后组较顺铂术前组复发瘤重相当(P0.05)。与空白组比较,苏木术前组复发瘤重相当(P＞0.05),苏木术后组复发瘤重减少(P0.05)。肺癌荷瘤小鼠肿瘤复发瘤重抑制率分别为苏木术前组5.69%,苏木术后组23.57%,顺铂术前组41.46%,顺铂术后组45.53%,苏木加顺铂术前组55.28%,苏木加顺铂术后组70.73%。3、川芎可提高顺铂对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠模型原发肿瘤的抑瘤率:肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠各组体重的实验结果显示,术后各组间体重无统计学差异(P＞0.05)。原发瘤重方面,川芎联合顺铂组较空白组、川芎组和顺铂组减少(P＜0.05)。顺铂组原发瘤重较空白组、川芎组降低(P0.05)。在原发瘤抑制率方面,川芎相关各组抑瘤率为川芎组抑瘤率为-0.010%,顺铂组抑瘤率为38.63%,川芎加顺铂组抑瘤率为52.05%。4、川芎可提高顺铂对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠模型复发肿瘤的抑瘤率:与空白组、川芎术前组、川芎术后组、顺铂术前组、顺铂术后组比较,川芎加顺铂术前组、川芎加顺铂术后组复发瘤重明显下降(P0.05),川芎加顺铂术前组与川芎加顺铂术后组表达相当;与空白组、川芎术前组、川芎术后组比较,顺铂术前组、顺铂术后组复发瘤重明显下降(P0.05),顺铂术前组与顺铂术后组相当。与空白组比较,川芎术前组、川芎术后组复发瘤重相当(P＞0.05)。肺癌荷瘤小鼠肿瘤复发瘤重抑制率分别为川芎术前组0.8%,川芎术后组3.23%,顺铂术前组40.32%,顺铂术后组45.97%,川芎加顺铂术前组54.03%,川芎加顺铂术后组 54.03%。二、活血药苏木、川芎通过具体的分子调控机制实现抑瘤作用(一)苏木、川芎使HIF-1α在实验肿瘤模型中的表达减少1、HIF-1α在经苏木干预后的原发肿瘤模型的表达减少:Western Blot 法检测苏木相关各组对原发瘤组织HIF-1 α的表达强度方面,苏木联合顺铂组较顺铂组、苏木组、空白组HIF-1 α表达少,差异有统计学意义(P0.05),顺铂组HIF-1 α表达较苏木组及空白组少,差异有统计学意义(P0.05),苏木组较空白组HIF-1α表达量少,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组化法检测HIF-1α的表达,乏氧环境较常氧环境条件下培养的干细胞样细胞接种到小鼠体内后HIF-1 α的表达增多。原发瘤组织中,苏木联合顺铂组较顺铂组、苏木组、空白组HIF-1α的表达强度降低。顺铂组较苏木组、空白组HIF-1α的表达强度降低。苏木组较空白组HIF-1 α的表达强度相当。2、HIF-1 α在经苏木干预后的肿瘤复发模型中的表达减少:Western Blot法检测苏木相关各组对复发瘤组织HIF-1 α表达方面,苏木相关各组小鼠复发瘤组织HIF-1α的表达强度排序为:空白手术组=苏木术前组苏木术后组顺铂术前组顺铂术后组=苏木加顺铂术前组苏木加顺铂术后组。表明苏木加顺铂术后组较苏木加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、苏木术后组、苏木术前组HIF-1α表达量更少(P0.05)。苏木加顺铂术前组与顺铂术后组HIF-1α表达量相当,较顺铂术前组、苏木术后组、苏木术前组HIF-1α表达量更少(P0.05)。顺铂术前组较苏木术后组、苏木术前组HIF-1 α表达量更少(P0.05)。苏木术后组较苏木术前组HIF-1α表达量更少(P0.05)。苏木术前组与空白手术组HIF-1 α表达相当(P0.05)。免疫组化法检测HIF-1 α的表达,在复发瘤组织中,苏木术前组及苏木术后组较空白组HIF-1 α的表达相当,苏木加顺铂术后组、苏木加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组HIF-1 α的表达较苏木术前组、苏木术后组和空白组降低,但各组间未见显著差异。3、HIF-1 α在经川芎干预后的原发肿瘤模型的表达减少:Western Blot法检测川芎相关各组对原发瘤组织HIF-1 α的表达强度方面,川芎联合顺铂组较顺铂组、川芎组、空白组HIF-1 α表达较少,差异有统计学意义(P0.05),顺铂组HIF-1α表达较川芎组及空白组较少,差异有统计学意义(P0.05),川芎组较空白组HIF-1 α表达量较少,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组化法检测原发瘤组织HIF-1α的表达,川芎加顺铂组与顺铂组表达比较,HIF-1α的表达未见显著差异,较川芎组和空白组HIF-1 α表达明显下调。川芎组与空白组比较,HIF-1α的表达相当。4、HIF-1 α在经川芎干预后的复发肿瘤模型中的表达减少:Western Blot法检测川芎相关各组对复发瘤组织HIF-1 α表达方面,川芎相关各组对小鼠复发瘤组织HIF-1α的表达强度影响的排序为:空白组=川芎术前组川芎术后组顺铂术前组顺铂术后组=川芎加顺铂术前组川芎加顺铂术后组。表明川芎加顺铂术后组较川芎加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、川芎术后组、川芎术前组、K手术组可以明显抑制转移瘤组织HIF-1α的表达(P0.05)。川芎加顺铂术前组与顺铂术后组比较,HIF-lα的表达相当(P＞0.05),但较顺铂术前组、川芎术后组、川芎术前组、空白手术组表达更少(P0.05)。顺铂术前组较川芎术后组、川芎术前组、空白手术组HIF-1α的表达更少(P0.05)。川芎术后组较川芎术前组、空白手术组HIF-1α的表达更少(P0.05)。川芎术前组与空白手术组HIF-1 α的表达相当(P0.05)。免疫组化法检测HIF-1 α的表达,在复发瘤组织中,川芎加顺铂术后组较川芎加顺铂术前组、顺铂术前、顺铂术后组、川芎术前组、川芎术后组、空白手术组HIF-1α表达减少。川芎加顺铂术前组、顺铂术前、顺铂术后组HIF-1α的表达相当。川芎术前与川芎术后组较空白手术组HIF-1 α表达相当。(二)上皮间质转化相关分子在实验肿瘤模型中的表达出现变化1、上皮间质转化相关分子在经苏木干预后的原发肿瘤模型中的表达出现变化:(1)E-Cad表达增多,Western blot法检测苏木相关各组对原发瘤组织E-Cad表达方面,低氧浓度环境较常氧环境下培养的干细胞样细胞接种到小鼠体内的原发瘤组织E-Cad表达弱于常氧环境(P0.05)。苏木加顺铂组较顺铂组、苏木组、空白组E-Cad表达量增加,有统计学差异(P＜0.05)。苏木组及顺铂组E-Cad的表达与空白组相当,无统计学差异(P＞0.05)。免疫组化法检测苏木对原发瘤组织E-Cad表达量的影响,常氧环境培养较低氧环境培养的PG-BE1干细胞样细胞接种到肺癌荷瘤小鼠体内的E-Cad表达强度增加。各用药组与空白组相比,E-Cad的表达无明显差异。(2)CD44V6的表达减少,Western blot法检测苏木相关各组对原发瘤组织CD44V6表达方面,低氧环境较常氧环境下的干细胞样细胞接种到小鼠体内产生的原发瘤组织CD44V6的表达较常氧环境无明显差异(P＞0.05)。苏木加顺铂术前组较顺铂术前组、苏木术前组、空白手术组CD44V6表达较少(P0.05),顺铂组较苏木组、空白组CD44V6的表达较少(P＜0.05),苏木组较空白组CD44V6的表达较少(P0.05)。免疫组化法检测苏木对原发瘤组织CD44V6表达量影响,苏木相关各组CD44V6荧光表达强度相当。(3)β1整合素表达减少,Western blot法检测苏木相关各组对原发瘤组织β1整合素表达量的影响,发现低氧环境下培养的干细胞样细胞接种到小鼠体内后较常氧环境β1整合素的表达上调(P0.05)。苏木加顺铂组较DDP组、苏木组、空白组β1整合素表达较少(P0.05),顺铂组较苏木组、空白手术组β 1整合素表达较少(P0.05),苏木组较空白手术组β1整合素的表达相当(P＞0.05)。免疫组化法检测苏木对原发瘤组织β1整合素表达量的影响,发现在常氧环境较低氧环境下培养的PG-BE1干细胞样细胞接种到小鼠后的β1整合素表达量相当(P＞0.05)。苏木加顺铂组较顺铂组、苏木组、空白手术组β1整合素表达量较低,顺铂组较苏木组、空白组β1整合素表达量较低。苏木组β1整合素表达量较空白组降低。2、上皮间质转化相关分子在经苏木干预后的复发肿瘤模型中的表达出现变化:(1)E-Cad表达增多,Western Blot法检测苏木相关各组对复发瘤组织E-Cad表达方面,苏木加顺铂术后组较苏木加顺铂术前组、空白手术组E-Cad表达量增加,差异有统计学意义(P＜0.05),较苏木加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、苏木术后组、苏木术前组表达量相当(P＞(0.05)。苏木加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、苏木术后组、苏木术前组、空白手术组E-Cad表达量相当,差异不具有统计学意义(P＞0.05)。免疫组化法检测苏木对复发瘤组织E-Cad表达量,苏木加顺铂术后组E-Cad表达量较空白手术组、苏木术前组、苏木术后组、顺铂术前组、顺铂术后组、苏木加顺铂术前组增加。苏木加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、苏木术后组、苏木术前组、空白手术组E-Cad表达量相当。(2)CD44V6的表达减少,Western blot法检测苏木相关各组对复发瘤组织CD44V6表达方面,苏木相关各组小鼠复发瘤组织CD44V6的表达强度排序为:空白手术=苏木术前组苏木术后组顺铂术前组=苏木加顺铂术前组顺铂术后组苏木加顺铂术后组。苏木加顺铂术后组较苏木加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前、苏木术后、苏木术前、空白手术组CD44V6表达较少,差异有统计学意义(P0.05)。顺铂术后组较苏木加顺铂术前组、顺铂术前、苏木术后、苏木术前、空白手术组CD44V6表达较少(P0.05)。顺铂术前组与苏木加顺铂术前组表达相当,较苏木术后组、苏木术前组、空白手术表达较少(P0.05)。苏木术后组较空白手术、苏木术前组CD44V6表达较少(P0.05)。空白手术、苏木术前组表达相当(P0.05)。免疫组化法检测苏木对复发瘤组织CD44V6表达量影响,苏木相关各组CD44V6荧光表达强度相当。(3)β1整合素表达减少,Western blot法检测苏木相关各组对复发瘤组织β1整合素表达量的影响,发现苏木相关各组小鼠复发瘤组织β 1整合素的表达强度排序为空白手术=苏木术前组苏木术后组顺铂术前组苏木加顺铂术前组=顺铂术后组苏木加顺铂术后组。苏木加顺铂术后组较顺铂术后组、苏木加顺铂术前组、顺铂术前组、苏木术后组、苏木术前组、空白手术组可抑制复发瘤组织β]整合素的表达(P0.05)。苏木加顺铂术前组与顺铂术后组β 1整合素的表达相当(P0.05),较顺铂术前组、苏木术后组、苏木术前组、空白手术组表达量少(P0.05)。顺铂术前组较苏木术后组、苏木术前组、空白手术组β1整合素的表达量少(P0.05)。苏木术后组较苏木术前组、空白手术组β 1整合素的表达量少(P0.05)。苏木术前组、空白手术组βl整合素的表达量相当(P0.05)。免疫组化法检测苏木对复发瘤组织β1整合素表达量的影响,发现苏木加顺铂术后组与苏木加顺铂术前组β1整合素的表达相当,较苏木术前、苏木术后、顺铂术前、顺铂术后组降低。苏木术前、苏木术后、顺铂术前、顺铂术后组表达相当,未见明显差异，，较空白手术组β1整合素的表达降低。3、上皮间质转化相关分子在经川芎干预后的原发肿瘤模型中的表达出现变化:(1)CD44V6的表达减少,Western blot法检测川芎对原发瘤组织CD44V6表达方面,川芎加顺铂组较顺铂术前组、川芎组、空白手术组CD44V6表达量低(P0.05)。顺铂组较川芎组、空白手术组CD44V6表达量低(P0.05)。川芎组较空白手术组CD44V6表达量低(P＜0.05)。免疫组化法检测川芎对原发瘤组织CD44V6表达量影响,发现川芎相关各组CD44V6荧光表达强度相当。(2)β 1整合素表达减少,Western blot法检测川芎相关各组对原发瘤组织β1整合素表达量的影响,发现川芎加顺铂组较顺铂组、川芎组、空白手术组β 1整合素表达量显著较少(P0.05)。顺铂组较川芎组、空白手术组β 1整合素表达量显著较少(P0.05)。川芎组较空白手术组β1整合素表达量显著较少(P0.05)。免疫组化法检测川芎对原发瘤组织β 1整合素表达量的影响,发现川芎加顺铂组较顺铂、川芎组、空白手术组β1整合素的表达下调。顺铂组较川芎组、空白手术组β1整合素的表达下调。川芎组较空白手术组91整合素的表达下调。4、上皮间质转化相关分子在经川芎干预后的复发肿瘤模型中的表达出现变化:(1)E-Cad表达增多,Western blot法检测川芎相关各组对复发瘤组织E-Cad表达方面,川芎加顺铂术后组较川芎加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、川芎术后组、川芎术前组、空白手术组E-Cad表达量增加,差异有统计学意义(P0.05)。川芎加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、川芎术后组、川芎术前组、空白手术组E-Cad表达量相当,差异不具有统计学意义(P＞0.05)。免疫组化法检测川芎对复发瘤组织E-Cad表达量,川芎加顺铂术后组较川芎加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、川芎术后组、川芎术前组、空白手术组复发瘤组织E-Cad表达量增加。川芎加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、川芎术后组、川芎术前组、空白手术组E-Cad表达量相当。(2)CD44V6表达减少,Western blot法检测川芎相关各组对复发瘤组织CD44V6表达的影响,川芎相关各组小鼠复发瘤组织CD44V6的表达强度排序为:空白手术=川芎术前组川芎术后组=顺铂术前组=川芎加顺铂术前组顺铂术后组川芎加顺铂术后组。表明川芎加顺铂术后组较川芎加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、川芎术后组、川芎术前组、空白手术可以明显抑制复发瘤组织CD44V6的表达(P0.05)。顺铂术后组较川芎加顺铂术前组、顺铂术前组、川芎术后组、川芎术前组、空白手术组可以明显抑制复发瘤组织CD44V6的表达(P0.05)。川芎加顺铂术前组、顺铂术前组、川芎术后组CD44V6表达相当,较川芎术前组、空白手术组表达较少(P0.05)。川芎术前组、空白手术组表达相当(P0.05)。免疫组化法检测川芎对复发瘤组织CD44V6表达量影响,川芎相关各组CD44V6荧光表达强度相当(P0.05)。(3)β1整合素表达减少,Western blot法检测川芎相关各组对复发瘤组织β 1整合素表达量的影响,发现川芎相关各组对小鼠复发瘤组织β 1整合素的表达强度影响排序为:空白手术=川芎术前组川芎术后组顺铂术前组川芎加顺铂术前组=顺铂术后组川芎加顺铂术后组。川芎加顺铂术后组较川芎加顺铂术前组、顺铂术后组、顺铂术前组、川芎术后组、川芎术前组、空白手术组可明显抑制β1整合素的表达(P0.05),顺铂术后组与川芎加顺铂术前组β1整合素的表达相当(P＞0.05),较顺铂术前组、川芎术后组、川芎术前组、空白手术组β1整合素的表达量少(P0.05)。顺铂术前组较川芎术后组、川芎术前组、空白手术组β1整合素的表达量少(P＜0.05)。川芎术后组较川芎术前组、空白手术组β1整合素的表达量少(P0.05)。川芎术前组、空白手术组β 1整合素的表达量相当(P＞0.05)。免疫组化法检测川芎对复发瘤组织β 1整合素表达量的影响,发现β 1整合素表达强度排序为空白手术=川芎术前组川芎术后组顺铂术前组川芎加顺铂术前组=顺铂术后组川芎加顺铂术后组。研究结论一、活血药具备辅助化疗药顺铂适度抑瘤的作用1、苏木不会对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠成瘤时间产生影响,但苏木联合顺铂组可延长顺铂组的成瘤时间。苏木并未对肺癌荷瘤小鼠原发瘤重产生影响,但苏木可以协同顺铂增加对原发瘤重的抑制作用。2、手术后使用苏木可以协同顺铂发挥对小鼠复发瘤的抑制作用,而且这种抑制作用较术前使用苏木加顺铂的抑制作用更明显。在手术后使用苏木可对复发瘤产生一定程度的抑制作用。3、川芎不会对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠成瘤时间产生影响,但川芎联合顺铂组可延长顺铂组的成瘤时间。川芎并未对肺癌荷瘤小鼠原发瘤重产生影响,但川芎可以协同顺铂增加对原发瘤重的抑制作用。4、手术后及手术前使用川芎可以协同顺铂发挥对小鼠复发瘤的抑制作用,手术前与手术后的抑制作用相当。在手术后使用川芎并未对复发瘤产生一定的抑制作用,但川芎可以协同顺铂增加对复发瘤的抑制作用。二、活血药抑瘤作用的分子机制(一)活血药使HIF-1 α在实验肿瘤模型中的表达减少1、苏木协同顺铂使用可以抑制原发瘤组织中HIF-1 α的表达,而且这种抑制效果要优于顺铂和苏木单独使用。2、手术后使用苏木可以协同顺铂发挥对小鼠模型复发瘤中HIF-1 α的表达抑制作用,而且这种抑制作用较术前使用苏木加顺铂的抑制作用更明显。在手术后使用苏木可对复发瘤模型中HIF-1 α的表达产生一定程度的抑制作用。3、川芎可以协同顺铂增加对原发瘤组织模型中HIF-1 α的表达抑制作用,而且这种抑制效果要优于顺铂和苏木单独使用。4、川芎可以协同顺铂发挥对小鼠术后复发瘤中HIF-1 α的表达抑制作用,而术前使用川芎并不能起到这种抑制作用。(二)上皮间质转化相关分子在实验肿瘤模型中的表达出现变化1、苏木可以协同顺铂增加原发瘤组织E-Cad的表达,减少CD44V6、β1整合素的表达抑制作用,其中对CD44V6的抑制作用要强于顺铂、苏木单独使用,而苏木组并未对原发瘤组织E-Cad、β1整合素表达起到作用,苏木相关各组对原发瘤组织CD44S的表达并未产生影响。2、苏木可以协同顺铂增加对小鼠复发瘤模型E-Cad的表达,减少CD44V6、61整合素的表达,但术前使用苏木加顺铂、术前使用顺铂、术后使用顺铂、术前用苏木、术后用苏木对E-Cad的抑制作用不明显,术前使用苏木并未增加顺铂对CD44V6的抑瘤作用,可增加顺铂对β 1整合素的抑制作用。术后使用苏木可以在一定程度上抑制CD44V6的表达。苏木相关各组对CD44S表达并未产生影响。3、川芎可以协同顺铂增加对原发瘤组织CD44V6、β 1整合素的抑制作用,而且对CD44V6的抑制作用要强于顺铂、川芎。川芎相关各组对原发瘤组织E-Cad表达并未产生影响。川芎可对原发瘤组织β1整合素、CD44V6起到抑制作用,并不会对E-Cad的表达产生抑制作用。川芎相关各组对原发瘤组织CD44S的表达并未产生影响。4、川芎可以协同顺铂增加对小鼠复发瘤模型E-Cad的表达,减少CD44V6、β1整合素的表达,但术前使用川芎加顺铂、术前使用顺铂、术后使用顺铂、术前用川芎、术后用川芎对E-Cad的表达增加作用不明显,术前使用川芎并未增加顺铂对CD44V6表达的抑制作用,可明显增加顺铂对β 1整合素的表达抑制作用。术后使用川芎可以在一定程度上抑制CD44V6、β1整合素的表达。川芎相关各组对CD44S表达并未产生影响。综上所述,在肿瘤生长模型中,合理应用苏木、川芎配合顺铂化疗可以增强对原发瘤的抑制作用,而且这种抑制作用比单纯用顺铂更显著。在术后复发模型中,手术后应用中药联合顺铂对复发瘤组织的抑制作用最佳。这也为临床上合理选择活血药的应用时机提供实验基础。创新性一、建立PG干细胞样细胞荷瘤小鼠手术模型,观察苏木、川芎对肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠肿瘤原发和复发模型的影响,发现苏木、川芎具有一定的抑制肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠原发和复发肿瘤模型的作用,查阅国内外文献未见相关报道。二、苏木、川芎抑制肺癌干细胞样细胞荷瘤小鼠肿瘤原发模型和复发模型的机制与其抑制HIF-1 α和EMT相关分子表达相关。
【学位授予单位】：中国中医科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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本文编号：1307139