淫羊藿素提升miR-370下调PIM1抑制肺癌的作用机制研究

发布时间：2017-12-22 07:19

  本文关键词：淫羊藿素提升miR-370下调PIM1抑制肺癌的作用机制研究　出处：《吉林大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：背景:miRNA在多种肿瘤发生发展中起着重要的作用,了解肺癌与miRNA的关系,对深入探讨肺癌的机制至关重要,也为肺癌的治疗提供了潜在的新靶点和新方法。淫羊藿素是传统中药淫羊藿中主要的有效成分,现代药理学研究已经证实了淫羊藿素具有抗肿瘤的实际功效。不过,淫羊藿素对肺癌的作用及其机制尚属未知。目的:本文从临床、动物、细胞三个角度,对肺癌发生发展中miRNA家族成员miR-370的作用及其对PIM1的调控进行了深入的探讨。在此基础之上,对淫羊藿素的肺癌抑制作用及其机制进行了分析,为淫羊藿素在肺癌领域的临床应用奠定一定的基础。方法:采集肺癌临床标本检测miR-370水平,对肺癌患者生存时间进行随访,分析肺癌样本中miR-370与PIM1的关系。以micro RNA数据库与功能分析软件对miR-370匹配蛋白进行预测,构建荧光报告质粒以双荧光素酶测定法检测miR-370与PIM1蛋白的结合情况。培养肺癌及正常肺部细胞株,定量PCR检测mRNA转录,western-blot检测蛋白表达,以CCK-8法测定肺癌细胞存活率、克隆形成实验检测肺癌细胞生长、Annexin V-FITC/PI流式细胞技术及caspase-3表达检测肺癌细胞凋亡、划痕实验检测肺癌细胞迁移能力、transwell实验检测肺癌细胞侵袭能力,构建miR-370慢病毒、miR-370过表达质粒、PIM1慢病毒、PIM1过表达质粒,分别对miR-370和PIM1进行沉默和过表达,分析miR-370和PIM1在细胞中的作用。构建肺癌移植裸鼠模型,观察淫羊藿素对裸鼠体重、瘤体积的影响,以tunel法及casapse-3免疫组化法检测淫羊藿素对裸鼠肺癌组织凋亡的作用,以定量PCR和western-blot对裸鼠肺癌组织中miR-370和PIM1的表达进行检测。培养肺癌细胞,观察淫羊藿素对肺癌细胞的活性、生长、凋亡、迁移、侵袭的影响。结果:通过临床研究发现,肺癌组织中miR-370的表达低于正常肺组织,并且miR-370高表达的肺癌患者在预后明显好于miR-370低表达的患者;肺癌患者组织中miR-370与PIM1表达呈负相关。microRNA数据库与功能分析软件表明,miR-370可以与PIM1蛋白匹配,这一结果由双荧光素报告实验进一步证实。细胞实验也发现正常肺部细胞中miR-370的含量远高于两种肺癌细胞中miR-370的含量,并且miR-370通过下调PIM1对肺癌细胞的活性、生长、迁移、侵袭等生物学行为均具有明显的抑制作用,对肺癌细胞的凋亡具有显著的促进作用。肺癌移植瘤裸鼠动物实验的结果显示:淫羊藿素能够提升组织中miR-370水平、抑制PIM1表达,以此抑制肺癌瘤体积增长、促进肺癌荷瘤小鼠肿瘤细胞的凋亡。细胞实验也证实了淫羊藿素能够显著地抑制肺癌细胞的活力、生长、迁移和侵袭,并促进肺癌细胞的凋亡,其抑制作用与提升miR-370和下调PIM1有关。结论:miR-370通过下调PIM1对肺癌具有的抑癌作用,淫羊藿素的肺癌抑制作用与提升miR-370和下调PIM1有关。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

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1 韩玲;淫羊藿素提升miR-370下调PIM1抑制肺癌的作用机制研究[D];吉林大学;2017年

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本文编号：1318911