MLF1IP在Luminal型乳腺癌中的表达及其对他莫昔芬敏感性的影响

发布时间：2017-12-24 16:19

  本文关键词：MLF1IP在Luminal型乳腺癌中的表达及其对他莫昔芬敏感性的影响　出处：《南方医科大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:内分泌治疗是Luminal型乳腺癌的重要治疗方法,但原发或继发性内分泌治疗耐药问题已成为乳腺癌临床治疗的一大难题。有研究显示人髓细胞白血病因子1相互作用蛋白基因(The myelodysplasia/myeloid leukemia factor 1-interacting protein,MLF1IP)与多种恶性肿瘤相关,但关于MLF1IP基因与Luminal型乳腺癌关系尚未见报道。因此,本课题拟探讨MLF1IP在Luminal型乳腺癌中的表达情况及其与他莫昔芬敏感性的关系,为乳腺癌内分泌治疗敏感人群的筛选提供新的指标,以及为逆转他莫昔芬耐药提供新的思路。方法:1.采用实时荧光定量PCR检测Luminal型乳腺癌组织及配对癌旁组织中MLF1IP mRNA相对表达水平。并通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据集研究MLF1IP基因在Luminal型乳腺癌中的表达情况及其对生存预后的影响。同时,采用免疫组化染色对Luminal型乳腺癌组织中的MLF1IP蛋白表达进行定位和半定量检测,进一步验证实验结果。2.构建MLF1IP基因沉默慢病毒载体,利用其感染MLF1IP高表达乳腺癌细胞株建立相关细胞模型,并采用实时荧光定量PCR和Western Blot验证其MLF1IP沉默效果。采用CCK-8检测细胞增殖能力,采用流式细胞周期分析检测细胞周期构成,采用流式细胞凋亡分析检测细胞凋亡水平。采用Western Blot检测多种细胞周期相关蛋白的表达,观察MLF1IP对细胞周期不同阶段相关蛋白表达的影响。3.实时荧光定量PCR检测他莫昔芬对MLF1IP诱导作用。CCK-8检测MLF1IP基因沉默对乳腺癌细胞他莫昔芬药物敏感性的影响。并在有或无他莫昔芬处理条件下,采用流式细胞凋亡分析检测凋亡在MLF1IP介导乳腺癌细胞他莫昔芬耐药中的作用。另外,采用Western Blot检测多种细胞凋亡、P13K/AKT信号通路相关蛋白的表达水平变化,进一步分析相关作用机制。结果:1.实时荧光定量PCR及TCGA数据库检索结果均显示MLF1IP mRNA在Luminal型乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织。且MLF1IP高表达与Luminal型乳腺癌患者PR状态、淋巴结转移及不良预后等密切相关。免疫组化结果显示MLF1IP蛋白主要定位于细胞浆,癌组织中阳性细胞比例明显高于癌旁对照,并与肿瘤大小、淋巴结转移、PR状态显著相关。2.MLF1IP基因沉默可显著降低MCF-7细胞增殖能力,促使其细胞周期停滞于G1期,并可促进MCF-7细胞死亡,但其对凋亡的作用有待于进一步研究。此外,Western Blot实验结果表明MCF7-shRNA细胞的Cyclin D1蛋白表达水平显著低于MCF7-NC细胞,而Cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6蛋白表达水平在两组细胞间均无显著差异。3.他莫昔芬可诱导MCF-7细胞MLF1IP表达。MLF1IP基因沉默可显著增加MCF-7细胞他莫昔芬敏感性。在他莫昔芬刺激条件下,MLF1IP基因沉默可显著抑制MCF-7细胞增殖并促进其凋亡,两组间差异大于无他莫昔芬刺激条件下增殖、凋亡水平的差异。Western Blot分析显示,在他莫昔芬刺激条件下,MLF1IP基因沉默可显著上调Bax、Caspase3、Caspase7、Caspase9蛋白表达水平,并下调Bcl-2蛋白表达水平。另外,对P13K/AKT信号通路的Western Blot检测结果显示MCF7-shRNA细胞的PTEN蛋白表达水平明显高于MCF7-NC细胞,同时p-AKT蛋白表达水平明显低于MCF7-NC细胞。提示MLF1IP可促进AKT磷酸化,激活PI3K/AKT信号通路,而这种作用可能是通过抑制PTEN表达所致。结论:1.MLF1IP表达与Luminal型乳腺癌的发生、发展密切相关,MLF1IP是Luminal型乳腺癌患者预后的潜在预测指标。2.MLF1IP通过上调CyclinD1影响细胞周期,促进MCF-7细胞增殖。MLF1IP基因沉默可显著降低MCF-7细胞增殖能力,并可促进MCF-7细胞死亡,但其对凋亡的作用有待于进一步研究。3.MLF1IP相关的凋亡抵抗在MLF1IP介导乳腺癌细胞TAM特异性耐药中扮演重要角色。MLF1IP可作为Luminal型乳腺癌他莫昔芬敏感性的预测因子,并且MLF1IP可能通过影响PI3K-PTEN/AKT信号通路活性,从而促进乳腺癌细胞他莫昔芬耐药。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

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本文编号：1329081