31种融合基因在儿童急性白血病中的表达及临床意义

发布时间：2017-12-25 08:20

本文关键词：31种融合基因在儿童急性白血病中的表达及临床意义　出处：《重庆医科大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分31种融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达目的分析儿童急性淋巴细胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的分子遗传学改变与临床特征的关系。方法收集并分析255例初诊ALL患儿临床及实验室资料,所有患儿均做骨髓细胞学、免疫分型、染色体核型分析并利用多重巢式PCR检测31种白血病基因,检测为阳性者应用split-out PCR验证。结果255例ALL中男性153例,女性102例,平均年龄63.07±2.67月。共104例检出白血病基因(阳性率40.78%),包括ETV6/RUNX1基因42例,E2A/PBX1基因17例,BCR/ABL基因15例,MLL基因16例,SIL/TAL1基因5例,HOX11基因5例,EVI1基因3例及SET/CAN基因1例。T-ALL基因检出率低于B-ALL;ETV6/RUNX1、BCR/ABL基因C-B-ALL多见,E2A/PBX1和MLL基因分别多见于pre-B-ALL和pro-B-ALL;ETV6/RUNX1基因多见于1-10岁组,MLL基因多发于1岁组,BCR/ABL基因多见于10岁组(P0.05)。结论采用多重巢式RT-PCR结合split-out PCR方法可方便快速检测31种儿童常见的白血病基因,有助于儿童ALL精确分型、指导危险度分层和治疗。T-ALL基因检出率较低,提示T-ALL可能需要其它方法进行分子遗传学分型。不同年龄组B-ALL分子遗传学改变存在差异,可能是不同年龄儿童B-ALL化疗效果存在差异的原因之一。第二部分31种融合基因在儿童急性髓细胞白血病中的表达目的分析儿童急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemia,AML)的分子遗传学改变与临床特征的关系。方法收集并分析133例初诊AML患儿临床及实验室资料,所有患儿均做骨髓细胞学、免疫分型、染色体核型分析并利用多重巢式PCR检测31种白血病基因,初筛试验为阳性者应用split-out PCR验证。结果133例AML患儿中包括急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)28例,非APL的AML患儿105例(男性62例,女性43例,平均年龄73.03±4.54月)。共98例检出白血病基因(阳性率73.68%),包括:AML/ETO基因31例,PML/Ra Rα基因28例,MLL重排基因12例,CBFβ-MYH11基因10例,HOX11基因及TLS/ERG基因1例。EVI1基因22例(其中7例合并MLL重排基因)。APL患儿中检出罕见型PML/Ra Rα基因2例。非APL患儿中AML/ETO及EVI1基因阳性率最高,但各年龄组分子遗传学分布无显著性差异(p0.05)。染色体检查6例未见分裂象,可供分析99例患儿中73例为异常核型(阳性率73.74%)。AML患儿染色体异常核型及基因检出率均高于ALL(p0.05)。结论多重巢式RT-PCR结合split-RT-PCR方法可方便快速检测儿童AML常见融合基因,有助于完善AML精细分型。多重巢式RT-PCR联合基因测序有助于检测AML融合基因罕见突变位点,提高AML融合基因检出率。比较ALL而言,联合细胞遗传学及检测AML常见基因在指导儿童AML危险度分层和临床治疗中具有更大意义。第三部分ETV6/RUNX1、E2A/PBX1或MLL基因在儿童急性B淋巴细胞白血病微小残留病监测中的价值目的分别利用流式细胞术(flowcytometry,FCM)及PCR技术监测儿童急性B淋巴细胞性白血病(B cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)治疗后微小残留病(Minimal residual disease,MRD)水平,分析两种检测方法的灵敏度及与预后的关系。方法61例初诊时B-ALL患儿分为A组(ETV6/RUNX1基因阳性)、B组(E2A/PBX1基因阳性)和C组(MLL基因阳性)并接受CCCG-ALL-2008方案化疗,治疗后不同时间点(time piont,TP)行骨髓穿刺,使用FCM及PCR技术检查评估TP2及TP3时MRD水平并分析与预后的关系。结果TP2及TP3时FCM-MRD和PCR-MRD检测阳性率无显著差异(P0.05)。B组PCR-MRD检测阳性率高于FCM-MRD。随访至2017.02,61例患儿平均生存时间43.928±2.226月,3年EFS为80.0±5.4%。A组、B组和C组平均生存时间分别为50.325±1.129月、24.867±3.608月及31.852±7.201月,3年EFS分别为93.1±4.7%、60.0±12.6%和62.9±17.9%,A组疗效好于B组和C组(P0.05)。结论按照分子遗传学进行危险度分组并分层治疗可以有效提高儿童ALL的疗效。使用FCM或PCR技术均可以有效检测儿童B-ALL的MRD水平并指导其分层治疗。虽然FCM或PCR技术检测MRD效果相似,但B组和C组患儿可能更适合选择PCR技术检测MRD。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.71

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