紫草素对皮肤成纤维细胞增殖、凋亡的调控及抑制增生性瘢痕形成的机制研究

发布时间：2017-12-26 08:16

  本文关键词：紫草素对皮肤成纤维细胞增殖、凋亡的调控及抑制增生性瘢痕形成的机制研究　出处：《浙江中医药大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： Shh信号通路 成纤维细胞(HSF) 紫草素(Shikonin)

【摘要】：目的通过研究Shh信号通路在人源成纤维细胞系和分离自增生性瘢痕组织的原代细胞的激活状态,特异性调控Shh信号通路对成纤维细胞增殖、迁移、周期、凋亡等生物学特性的影响,以及对一些瘢痕形成关键基因、凋亡关键基因表达的影响,阐明Shh信号通路在增生性瘢痕形成过程中的作用机制。通过研究中药制剂紫草膏中的主要成分紫草素对成纤维细胞增殖、迁移、凋亡等生物特性的影响和一些关键基因的表达变化,以及联合Shh信号通路抑制剂cyclopamine分子对人源HSF细胞增殖及关键基因表达的影响,进一步探讨增生性瘢痕形成机制和紫草素对皮肤成纤维细胞增殖、凋亡的调控及抑制增生性瘢痕形成的作用机制,为进一步应用开发提供基础研究依据。方法1.培养两种人真皮成纤维细胞,采用定量PCR法和Western-blot法检测细胞中Shh信号通路关键基因Ptch-1、Smo和Gli-1等基因的表达情况。2.采用不同浓度重组人rhShh因子和cyclopamine分子刺激成纤维细胞,分别应用MTT法检测细胞增殖情况,侵袭小室法检测细胞迁移能力变化、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化,RT-qPCR和Western-blot法检测瘢痕形成相关基因VEGF和Ⅰ型胶原酶,凋亡相关基因CyclinD1和Bcl-2基因表达变化。3.采用不同浓度紫草素干预成纤维细胞,分别应用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,RT-qPCR法和Western-blot检测瘢痕形成相关基因VEGF和Ⅰ型胶原酶,Shh信号通路关键基因Ptch-1和Gli-1表达情况,凋亡相关基因CyclinD1和Bcl-2基因表达变化。4.使用紫草素联合cyclopamine分子干预成纤维细胞,分别应用MTT法检测细胞增殖情况,侵袭小室法检测细胞迁移能力变化、流式细胞仪检测细胞凋亡变化,RT-qPCR法和Western-blot检测瘢痕形成相关基因VEGF和Ⅰ型胶原酶,凋亡相关基因CyclinD1和Bcl-2基因表达变化。结果1.在两种人源成纤维细胞中均检测到Shh信号通路基因Ptch-1、Smo和Gli-1表达均增高,其中HHSF组表达增高更明显。2.重组人rhShh可以促进成纤维细胞增殖,且呈浓度依赖型,当rhShh浓度超过1μg/ml后浓度继续增加对细胞增殖的促进作用没有明显加强,cyclopamine对成纤维细胞增殖呈浓度依赖性抑制,浓度超过8μM时抑制能力没有明显增强,同时rhShh分子可以促进成纤维细胞迁移、抑制凋亡,促进瘢痕形成相关基因VEGF和Ⅰ型胶原酶、凋亡相关基因CyclinDl和Bcl-2高表达,cyclopamine作用与rhShh相反。3.紫草素对成纤维细胞的增殖能力有较强的抑制作用,当紫草素浓度达到5μM时,约50%左右的细胞受到抑制,浓度达到10μM时超过90%的细胞受到抑制,同时紫草素可以抑制细胞迁移,促进细胞凋亡,可以明显下调瘢痕形成相关基因VEGF和Ⅰ型胶原酶、凋亡相关基因CyclinD1和Bcl-2的表达;紫草素对Shh信号通路基因Ptch-1和Gli-1的表达有一定的抑制作用,在HHSF组抑制作用更明显。4.紫草素联合Shh信号通路抑制剂cyclopamine可以增强对成纤维细胞增殖的抑制,促进细胞凋亡,VEGF、Ⅰ型胶原酶和Bcl-2等相关基因下调更加明显。结论1.Shh信号通路在瘢痕修复过程中的成纤维细胞中呈激活状态。2.阻断Shh信号通路可以抑制成纤维细胞增殖,诱导成纤维细胞凋亡。3.紫草素可以抑制成纤维细胞过度增殖,同时下调VEGF、Ⅰ型胶原酶、cyclinD1、Bcl-2基因的表达水平。4.阻断Shh信号通路对紫草素抑制成纤维细胞增殖和诱导成纤维细胞凋亡有增效作用。
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

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本文编号：1336508