升降散治疗血管性痴呆的临床及实验研究

发布时间：2017-12-30 18:03

本文关键词：升降散治疗血管性痴呆的临床及实验研究　出处：《南京中医药大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:研究升降散治疗血管性痴呆的疗效及作用机理,从临床和实验两方面入手,临床研究方面,按照随机、平行、对照的原则,判断治疗血管性痴呆(VD)患者的临床效果;实验研究分为动物体内和体外实验,观察升降散对VD大鼠学习记忆能力的影响及神经保护分子机制,探讨其可能作用的机理。方法:临床研究,选取我院诊治的120例VD患者,采用随机分为升降散组、对照组各60例,两组均服用尼莫地平、奥拉西坦、石杉碱甲治疗,升降散组同时服用方剂升降散,两组疗程12周。比较两组患者治疗前后的MMSE各项目评分、颈总动脉RI、ID检测值、血清IL-1β、TNF-α水平、ADL评分差异,判定其疗效;动物实验研究方面,SD大鼠,随机分为正常组、假手术组,模型组,阳性药物组(盐酸多奈哌齐,1mg·kg-1),升降散低、中、高剂量组(0.67,1.33,2.66 g·kg-1),每组10只,除正常组和假手术组外,其余各组采用改良的2VO法制作慢性脑缺血VD模型,手术1周后开始给药,连续ig给药8周。采用2VO两血管阻断法观察升降散对VD各组大鼠学习和记忆的影响、定位航行和空间探索行为功能,分析其学习记忆和空间辨认的能力;采用苏木素-伊红(HE)染色考察海马区病理形态;利用蛋白质免疫印迹(Westernblot)和免疫组织荧光化学染色法检测血管内皮生长因子(VEGF),巢蛋白(Nestin),Wnt信号通路关键蛋白,磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白(p-LRP),磷酸化糖原合成酶激酶(p-GSK3β)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平,初步探讨升降散对VD大鼠海马组织保护作用机制;体外实验,海马神经干细胞分为正常组,模型组,升降散低剂量(0.5mg/ml),升降散中剂(1mg/ml)和升降散高剂量(2mg/ml)。将海马神经干细胞接种于6孔板中,待合适浓度后除正常组外其余各组做缺氧缺糖处理,同时给药各组给不同浓度的药物。24h后取细胞提取蛋白。利用蛋白质免疫印迹(Westernblot)检测血管内皮生长因子(VEGF),巢蛋白(Nestin),初步探讨升降散对VD大鼠海马组织保护作用机制。结果:1.临床研究方面,治疗前升降散组和对照组患者的MMSE各项目评分、颈总动脉RI、ID检测值、ADL评分差异无统计学意义(P0.05);治疗后,升降散组的定向力、记忆力、回忆能力、语言能力、MMSE总分均高于对照组(P0.05),升降散组的颈总动脉ID检测值高于对照组(P0.05),升降散组的ADL评分高于对照组(P0.05);治疗后,升降散组血清IL-1β、TNF-α水平低于对照组(P0.05);治疗后,升降散组的总有效率93.33(56/60),对照组总有效率80.00%(48/60),两组临床疗效比较差异具有统计学意义(P0.05)。2.动物实验研究,与模型组比较,升降散能延长VD大鼠的避暗实验的潜伏期、缩短VD大鼠水迷宫定位航行和空间探索实验的潜伏期,升降散呈剂量依赖性促进海马区的病理性损伤修复及VEGF和Nestin表达,并呈剂量依赖性;升降散呈剂量依赖性上调海马组织Wnt信号通路关键蛋白p-LRP,p-GSK3β和β-catenin蛋白水平,且上调作用呈剂量依赖性,均具有一定的统计学意义(P0.05,P0.01)。3.体外实验研究,建立了体外培养海马神经干细胞模型,与模型组比较,升降散呈剂量依赖性促进海马区的VEGF和Nestin表达。结论:1.升降散联合尼莫地平、奥拉西坦、石杉碱甲治疗VD患者有较好的临床效果,能显著提高VD患者的认知功能、日常生活活动能力。2.升降散改善VD大鼠学习记忆和空间辨认的行为学能力可能与激活海马组织Wnt信号通路活性有关。3.升降散改善VD大鼠学习记忆和空间辨认的行为学能力可能与促进海马区的VEGF和Nestin表达有关。
[Abstract]:Objective : To study the effect and mechanism of the treatment of vascular dementia ( VD ) on VD rats . The expression level of vascular endothelial growth factor ( VEGF ) , Nestin , Wnt signaling pathway , phosphorylated low - density lipoprotein receptor - related protein ( p - LRP ) , phosphorylated glycogen synthase kinase ( p - GSK3 尾 ) and 尾 - catenin in VD rats were investigated by Western blot . Conclusion : 1 . The behavior and memory of VD rats and the behavior of spatial recognition may be related to the activation of Wnt signaling pathway in hippocampus .

【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R277.7

【参考文献】