风湿性心脏病慢性房颤患者的血浆蛋白质组学和代谢组学研究

发布时间：2018-01-02 21:13

  本文关键词：风湿性心脏病慢性房颤患者的血浆蛋白质组学和代谢组学研究　出处：《北京协和医学院》2017年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:心房颤动(atrial fibrillation)简称房颤,是临床常见的快速性心律失常。本研究通过对风湿性心脏病慢性房颤及窦性心律患者进行血浆蛋白质组学和代谢组学研究,从蛋白质组和代谢组水平揭示心房颤动时的细胞生物学改变,深入阐明房颤机理,为发现更安全有效的房颤防治方法奠定基础。方法:选取2013年1月-2016年12月就诊于天津泰达国际心血管病医院并诊断为风湿性心脏病、进行心脏瓣膜置换手术的患者100例(慢性房颤患者70例,窦性心律患者30例)纳入研究。手术前一日采集患者外周静脉血2ml,离心后取上层血浆-80℃冻存备用。选取慢性房颤和窦性心律(sinus rhythm,SR)患者各12例进行蛋白质组学测定,采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术标记样本后,利用质谱(mass spectrometry,MS)技术对样本中的肽段进行识别,将串联质谱数据与数据库中的理论质谱数据匹配分析后,得到蛋白质的鉴定结果。以蛋白质的差异变化倍数(fold change,FC)为1.2倍且p-value =0.05为标准筛选差异蛋白。对差异蛋白质进行生物信息学分析,包括GO富集分析、KEGG pathway分析和蛋白互作(PPI)分析。选取差异蛋白中的10种进行酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)验证。利用气相色谱与质谱联用技术(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)对 30 例慢性房颤患者和26例窦性心律患者的血浆进行代谢组学研究分析。采用多维分析和单维分析相结合的办法筛选组间差异代谢物,并对差异代谢物进行KEGG pathway分析。在血浆蛋白质组学和代谢组学研究的基础上,结合相关文献报道,利用生物信息学工具进行整合组学分析。结果:iTRAQ测定共发现了 27344个Unique肽段,鉴别出447种非冗余蛋白质,以FC变化为1.2倍且p-value=0.05为条件筛选出57种差异蛋白,其中33种蛋白质表达上调,24种蛋白质表达下调。KEGG pathway分析发现过氧化物酶体增殖剂激活受体α通路、肾素-血管紧张素-醛固酮系统及凝血和补体系统等多个通路在房颤的发生发展中发挥着重要的作用。选取载脂蛋白A1(apolipoprotein A1)、载脂蛋白 A2(apolipoproteinA2)、LIM 结构域蛋白 7(LIMdomainonly protein 7)、凝血酶原片段 1+2(prothrombin fragment 1+2)、玻连蛋白(vitronectin)、血管紧张素原(angiotensinogen)、ficolin-3、血清淀粉样蛋白P(serum amyloid P-component)、巨噬细胞集落刺激因子受体1(macrophage colony-stimulating factor 1 receptor)、嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase)等 10 种蛋白质进行 ELISA 检测,其中载脂蛋白A1(房颤组为499.5 ± 59.79ug/ml,窦性心律组为725.8 ± 83.75ug/ml)、LIM结构域蛋白7(房颤组为22.31±1.50pg/ml,窦性心律组为16.99±1.88pg/ml)、巨噬细胞集落刺激因子受体1(房颤组为37.76 ±2.65ng/ml,窦性心律组为66.30 ± 10.82ng/l)、玻连蛋白(房颤组为53.28 ± 7.20ug/ml,窦性心律组为84.89 ± 15.87ug/ml)、凝血酶原片段F1+2(房颤组为0.97±0.06nmol/ml,窦性心律组为0.76±0.05 nmol/ml)和血管紧张素原(房颤组为208.3 ± 18.29pg/ml,窦性心律组为294.1 ± 36.84pg/ml)在房颤组和窦性心律组差异表达。采用GC-MS代谢组学技术检测发现了 322种代谢产物,以OPLS-DA模型VIP1,且p值0.05为标准筛选出差异代谢物55种,其中表达上调的差异代谢物有38种,表达下调的差异代谢物有17种。对差异代谢物进行KEGG pathway分析,发现半乳糖代谢、不饱和脂肪酸合成、亚油酸代谢、ABC转运子和淀粉与蔗糖代谢等代谢通路与慢性房颤有关。结论:本研究发现风湿性心脏病慢性房颤患者与窦性心律患者的血浆中存在差异表达的蛋白质和代谢产物,这些差异蛋白和差异代谢物及其参与的过氧化物酶体增殖剂激活受体α通路、肾素-血管紧张素-醛固酮系统、凝血和补体系统、半乳糖代谢、不饱和脂肪酸合成、亚油酸代谢、ABC转运子和淀粉与蔗糖代谢等通路与房颤密切相关。另外,慢性房颤时心脏出现代谢重构,心肌对脂肪酸的利用减少,对葡萄糖的利用增加,而PPARα通路在心脏的代谢重构中发挥着重要作用。
[Abstract]:Objective : To study the changes of plasma proteomic and metabolic groups in patients with chronic atrial fibrillation and sinus rhythm in patients with chronic atrial fibrillation ( AF ) and sinus rhythm . iTRAQ娴嬪畾鍏卞彂鐜颁簡 27344涓猆nique鑲芥��,閴村埆鍑，

本文编号：1370928