结晶样视网膜变性及常染色体显性遗传性视神经萎缩的临床与基础研究

发布时间：2018-01-02 22:40

本文关键词：结晶样视网膜变性及常染色体显性遗传性视神经萎缩的临床与基础研究　出处：《北京协和医学院》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:对结晶样视网膜变性(Bietticrystallinedystrophy,BCD)的临床表现进行总结分析,通过分子遗传学研究确定致病突变,并探讨表型与基因型的联系。对部分患者进行血浆脂代谢组分析,试图探索BCD患者特异的脂代谢异常。方法:纳入1998年—2017年3月在北京协和医院眼科遗传门诊就诊的BCD患者及家系。1.临床研究:详细询问患者病史,家族史并绘制家系图。行一般眼科检查(视力,屈光度,眼前节及眼底等),共聚焦显微镜检查角膜缘,眼底彩色照相,光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT),眼底自发荧光成像,视野(visualfield,VF)以及视网膜电流图(electroretinogram,ERG)检查。2.分子遗传学研究:采集患者及家族成员静脉血,提取基因组DNA。对先证者CYP4V2基因的11个外显子及外显子-内含子交界处进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增及直接测序。直接测序未发现突变者将行多重连接依赖探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplication,MLPA)检测。表现不典型的 BCD患者将进行二代测序。3.脂质组学分析:采集不同年龄组的BCD患者及无亲缘关系正常对照的血浆,采用超高效液相色谱-质谱法进行非靶向脂代谢组分析。结果:共纳入来自139个家系共168名BCD患者。139名患者(先证者)中,男性65例,女性74名,年龄17～75岁。发现有近亲结婚史的家系11个(8.3%),假显性遗传14个(10.6%)及假X连锁遗传家系2个(1.5%)。1.临床表现:BCD患者中位发病年龄27岁。62.1%以夜盲为首发症状,19%以视力下降为首发症状,16.0%主诉视力下降伴夜盲为首发症状,3例患者无自觉症状(2%),1例患者主诉眼前黑影飘动。BCD患者最佳矫正视力介于LP～1.5。40.4%合并轻度近视,35.1%合并中度近视,15.8%合并高度近视,约一半的患者合并散光。17.8%的患者在裂隙灯下观察到角膜缘结晶颗粒。配合了角膜缘共聚焦显微镜检查的16例BCD患者(其中包括10例在裂隙灯下未观察到结晶的患者,及6例眼底偶见或未见结晶颗粒的患者)均观察到结晶颗粒。结晶颗粒位于角膜上皮层及浅基质层,结晶形态有针尖样,杆状或点状。BCD患者的眼底表现为数量不等的结晶颗粒沉积于视网膜,位置可以集中于后极部或散在分布,视网膜色素上皮层(retinal pigment epithelium,RPE)层及脉络膜毛细血管层不同程度萎缩,伴不规则色素团块沉积。共14例患者合并眼底并发症(9.5%),其中8例为黄斑区脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)(57.1%),4 例为黄斑裂孔(macular hole,MH)网脱(28.6%)。OCT表现为椭圆体带不连续或消失,RPE萎缩,透见脉络膜大血管及巩膜信号,平均黄斑中心凹厚度116.6μm。依据疾病进展模式将132例BCD患者(先证者)分为中央型(24例,占18.2%),周围型(87例,占66.9%)2个类型。21例患者因处于疾病晚期而无法分型(占15.9%)。中央型BCD以后极部视网膜受累为主,逐渐累及周边部视网膜。周围型BCD周边视网膜首先受累,逐渐发展累及后极部视网膜,进展过程类似于视网膜色素变性。两者在首发症状,平均视力,合并眼底并发症的风险,VF缺损类型及视网膜总体功能方面存在显著差异(P0.001)。2.分子遗传学研究:一代测序联合MLPA共确定了 96.4%患者的CYP4V2致病突变,IVS6-8del17bp/insGC是最常见的突变等位基因(61.7%)。确定CYP4V2致病突变共33个,其中51.5%为新发突变。尚未发现不同突变与表型的相关性。二代测序发现2例多基因共同作用的CYP4V2相关性视网膜变性。此外,还报道了 1例合并手指异常的BCD患者,为IVS6-8de117bp/insGC和c.A761G复合杂合突变。3.血浆脂质组学分析:初步分析发现有10余种脂类化合物在BCD患者血浆中较正常对照明显升高,这些脂类化合物主要属于酰基甘油和游离脂肪酸。结论:BCD患者具有较特异的眼部表现,但轻重、形态各有差异。眼底并发症在BCD患者中并不少见。新的分型方法可以较好地解释临床表型及判断预后。共聚焦显微镜有助于BCD的诊断。一代测序可以确定绝大多数BCD患者的致病突变。中国BCD患者中也存在CYP4V2基因大片段改变的现象。对于表型不典型的BCD患者,采用二代测序的方法有助于发现潜在的多基因缺陷。CYP4V2等位基因突变频率在中国人群中较高,应建议BCD患者的配偶进行CYP4V2基因筛查。BCD患者血浆脂代谢组研究为进一步探究BCD发病机制,诊断与治疗提供了新的线索。目的:常染色体显性遗传性视神经萎缩(ADOA)是遗传性视神经萎缩最常见的类型之一。大部分ADOA是由OPA1基因突变导致的。本研究的目的在于分析一组中国ADOA家系的临床特征及基因突变情况。方法:对来自8个ADOA家系共17名患者进行了详细的临床评估。从患者外周血中提取基因组DNA。对7个典型ADOA家系进行OPA1基因全部外显子及外显子/内含子交界处进行Sanger测序。对1个表型不典型的ADOA家系进行外显子捕获联合二代测序。RT-PCR用于检测剪切突变mRNA的改变。结果:所有17名患者均表现为视力低下及视盘苍白,然而他们临床表型的轻重程度却各有差异。其中2名患者合并听力下降。本研究共确定6个OPA1新发突变及 2 个已知突变,包括 4 个错义突变(c.T2235G,c.T2340G,c.T1468C and c.A1 567G),2 个剪切突变(c.2984-1_2986del and c.2983+5GA),1 个小片段缺失(c.2960_2968delGCGTTCAAC)以及 1 个小片段插入突变(c.3009_3010insA)。RT-PCR 结果显示 c.2984-1_2986del 将导致 mRNA 碱基缺失(r.2819_2824del)。结论:17名ADOA患者临床表型差异较大,其中2名患者合并听力下降。共确定6个OPA1新发突变及2个已知突变。二代测序有助于确诊具有不典型表型的ADOA患者。
[Abstract]:Objective : To investigate the clinical manifestation of crystalline retinal degeneration ( BCD ) , and to determine the relationship between phenotype and genotype by molecular genetics . The results showed that the crystalline particles were located in the posterior polar part or in the superficial stroma . The results showed that the crystalline particles were not continuous or disappeared . All 17 patients showed poor vision and paleness , but the severity of their clinical phenotype was different . The results showed that there were six new mutations and two known mutations , including four missense mutations ( c.T2235G , c.T2340 , c.T1468C and c.A1 567g ) , two shear mutations ( c.2984 - 1 _ 2986del and c.2983 + 5GA ) , one minor fragment deletion ( c.2960 _ 2968delGCGTTCAAC ) , and one small fragment insertion mutation ( c.3009 _ 3010insA ) . Conclusion : There are six new mutations in the OPA1 and two known mutations . Second - generation sequencing can help diagnose ADOA patients with atypical phenotype .

【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R774.63

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