子宫内膜病变中医证型、证素分析及清热解毒方干预的分子机制

发布时间：2018-02-04 12:37

  本文关键词： 子宫内膜癌 LC3 清热解毒方 自噬　出处：《北京中医药大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:通过回顾性研究分析子宫内膜增生和子宫内膜癌病例的中医辨证分型,探讨子宫内膜增生及子宫内膜癌的中医证型证素分布规律。通过测定子宫内膜病变病理组织中LC3的表达含量变化,探讨"自噬"在子宫内膜病变中的表达规律。通过实验研究清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)醇提及水提物对人子宫内膜癌细胞株HEC-1A细胞及Ishikawa细胞增殖和凋亡和自噬的影响。方法:1.回顾性分析120例子宫内膜增生及子宫内膜癌病例的中医诊断资料,分析总结子宫内膜增生及子宫内膜癌的中医证型、证素分布规律。2.用免疫组化的方法测定子宫内膜增生和子宫内膜癌病理组织中LC3的表达含量变化,探讨"自噬"在子宫内膜病变中的表达规律。3.根据LC3检测结果,探讨自噬与中医证型和中医证素的相关性。4.MTS法测定清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)正丁醇提物及水提物对子宫内膜癌细胞株HEC-1A及Ishikawa体外增殖抑制的影响。5.流式细胞仪检测清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)正丁醇提物及水提物对子宫内膜癌细胞株HEC-1A及Ishikawa细胞凋亡及周期的影响。6.Transwell检测清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)正丁醇提物及水提物对子宫内膜癌细胞株HEC-1A及Ishikawa细胞侵袭能力的影响。7.Western-blot检测清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)正丁醇提物及水提物对子宫内膜癌细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响。8.Real Time PCR检测清热解毒方正丁醇提物及水提物干预后子宫内膜癌细胞各组中LC3B基因表达量的变化。9.PhosflowTM检测清热解毒方正丁醇提物及水提物干预子宫内膜癌细胞自噬相关通路MTOR、AKT的表达。10.免疫荧光染色观察清热解毒方正丁醇提物及水提物对子宫内膜癌细胞自噬蛋白LC3的影响11.投射电镜观察清热解毒方正丁醇提物及水提物对子宫内膜癌细胞自噬的影响。结果:1.120例子宫内膜增生及子宫内膜癌病例的最常见的中医证型有气虚血瘀、肾虚血瘀和肾阴虚,子宫内膜癌最常见的病性证素是血瘀、气虚、热(火)、阴虚、湿、湿热。2.LC3在中医诊断中的分布由高到低依次为经断复来、月经过多、经间期出血、ve瘕、崩漏和经期延长。3.子宫内膜癌组的LC3测定值高于子宫内膜增生组,具有统计学意义。4.不同中医证型LC3测定值不同,肾虚中测定值为最高。5.清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)正丁醇提物在不同浓度、不同时间里对2种内膜癌细胞系的增殖有显著抑制作用。其中,作用24小时、48小时,HEC-1A细胞1.25mg、0.625mg、0.3125mg组间细胞抑制率有显著性差异(P0.01);Ishikawa 细胞 5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL、0.3125mg/mL、0.15625mg/mL组间细胞抑制率有显著性差异(P0.01);作用24小时,HEC-1A 细胞、Ishikawa 细胞 10mg、5mg、0.625mg、0.078125mg 组间细胞抑制率有显著性差异,(P0.01)。清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)正丁醇提物作用于HEC-1A细胞、Ishikawa细胞,与正常组比较,给药组细胞凋亡率显著增高,差异显著。清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)正丁醇提物及水提物,能显著阻滞HEC-1A及Ishikawa细胞周期,降低细胞侵袭力。6.清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)正丁醇提物及水提物,能够抑制HEC-1A及Ishikawa细胞发生自噬,并通过AKT-MTOR通路抑制HEC-1A及Ishikawa细胞自噬从而达到抗肿瘤作用。结论:1.子宫内膜增生及子宫内膜癌病例的最常见的中医证型有气虚血瘀、肾虚血瘀和肾阴虚,子宫内膜癌最常见的病性证素是血瘀、气虚、热(火)、阴虚、湿、湿热。2.自噬与子宫内膜癌的发生、发展具有相关性。3.清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)正丁醇提物及水提物能够抑制HEC-1A及Ishikawa细胞发生自噬,并通过AKT-MTOR通路抑制HEC-1A及Ishikawa细胞自噬从而达到抗肿瘤作用。4.以中医辨证论治理论为基础,有效结合辨病论治和辨证论治,清热解毒方(黄连15g、白花蛇舌草15g、半枝莲15g、生黄芪20g等)对子宫内膜癌各个证型及病程的治疗均有指导意义。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of water extract on the proliferation and apoptosis of endometrial carcinoma cells ( HEC - 1A ) , and the effect of water extract on the proliferation and apoptosis of endometrial carcinoma cells ( HEC - 1A ) . There was a significant difference in the cell inhibition rate between the two groups ( P 0.01 ) . The inhibition rate of the cells was significantly higher than that in normal group ( P 0.01 ) . Conclusion : 1 . The most common TCM syndromes in endometrial hyperplasia and endometrial carcinoma are blood stasis , qi deficiency , heat ( fire ) , yin deficiency , dampness and damp heat .

【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R271.9

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本文编号：1490229