双辛鼻鼽散及其活性成分黄芩苷治疗过敏性鼻炎的药效学及机制探讨

发布时间：2018-03-02 18:33

本文选题：过敏性鼻炎　切入点：证候　出处：《北京中医药大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景:过敏性疾病已成为国内外关注的公共卫生问题。过敏性鼻炎(AR)近年来发病趋势明显增加,不仅严重影响人们生活质量,更是哮喘等重大疾病的重要诱发因素。中医药治疗过敏性鼻炎,在改善临床症状及预防复发等方面的优势得到了人们认可。目前上市的中成药大多以治疗急慢性鼻炎为主,较少有针对过敏性鼻炎治疗者。针对AR主要证型的经验方的研究及新药开发则很有意义。目的:通过回顾性研究分析鼻鼽主要证型,基于动物实验评价其临床有效方剂双辛鼻鼽散(SXBQS)及其有效活性成分的药效药理机制。1.分析鼻鼽患者中医临床证型的分布及构成情况,提炼主要证型。2.制备BN大鼠及Balb/C小鼠过敏性鼻炎模型。3.评价SXBQS药效,探讨其时效-量效关系及药理机制。4.研究SXBQS中黄芩苷(BAL)药代动力学。5.研究SXBQS活性成分BAL的抗过敏药效及机制。方法:1.采用回顾性分析方法,收集2015年1月至2016年12月期间王庆国教授门诊244例鼻鼽患者,建立CRF表,整理患者主要信息,应用计算机进行数据录入与分析,根据辨证分型标准统计患者证型,总结提炼主证型。2.采用腹腔注射致敏和鼻内滴注激发的方法分别制备卵清蛋白(OVA)诱导的BN大鼠及Balb/C小鼠AR模型。根据鼻部行为学、血清IgE含量、鼻粘膜病理形态学评价模型。3.统计SXBQS给药后不同时间点各组大鼠喷嚏、挠鼻次数,基于鼻部行为学指标初步探讨SXBQS时效-量效关系。药效学及机制:检测各组大鼠血清中IgE、组胺、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-17及鼻腔灌洗液中IgE、组胺、IL-4含量;HE及甲苯氨蓝染色检测鼻粘膜组织炎症细胞浸润。4.SXBQS 灌胃后 30 min,1h,2 h,3 h,4 h,6 h,8 h,10 h,12 h 大鼠尾尖定量取血,利用BAL酶联免疫分析方法(ELISA)研究SXBQS中BAL药代动力学。将药代动力学与鼻部行为学结果进行曲线拟合,初步分析BAL药代学-药动学相关性。5.BAL药效学:(1)比较各组行为学差异;基于激光多普勒技术评价鼻粘膜血流量变化;检测血清IgE、组胺含量;HE及甲苯氨蓝染色检测鼻粘膜组织炎症细胞浸润;流式细胞术检测小鼠脾细胞中Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞、Treg细胞比例。(2)通过检测不同时间点OVA致敏大鼠鼻腔灌流液中Evens blue含量,分析BAL对BN大鼠鼻粘膜毛细血管通透性的影响。结果:1.证候分型:鼻鼽发病集中于中年人群,男女比例为1:1.6。临证少有单一证型发病患者,两证相兼者以肺肾两虚证最多;多数患者是三证相兼,研究据此提出鼻鼽发病由内外合邪而致,以肺肾两虚为根本,可分别兼夹风邪外袭、脾阳亏虚、胆经郁热。2.模型评价:(1)行为学评价:BN大鼠及Balb/C小鼠AR模型鼻部行为学评分与空白对照组均有显著差异。生理盐水激发后,各组BN大鼠行为学差异无统计学意义;OVA溶液及组胺激发后5 min内,BN大鼠模型组喷嚏、挠鼻次数较空白对照组明显增加,差异有统计学意义。(2)模型组动物血清IgE均较空白对照组显著升高,且鼻粘膜组织有明显的炎症细胞浸润。3.SXBQS量效-时效关系:(1)1h激发,SXBQS高、中剂量及西替利嗪组鼻部症状较模型组明显缓解;(2)4h激发,SXBQS各剂量及西替利嗪组鼻部症状较模型组缓解,SXBQS高剂量组及西药组与模型组有差异;(3)8h激发,SXBQS高剂量及西药组喷嚏、挠鼻次数较模型组减少,差异有统计学意义;(4)12h激发,SXBQS高剂量组可缓解鼻部过敏症状,与模型组有差异。4.SXBQS药效及机制:(1)SXBQS各剂量组及西替利嗪组大鼠体重无差异,均较空白对照组降低;各组大鼠脾重基本无差异。(2)SXBQS高、中剂量组可明显抑制鼻粘膜组织炎性细胞浸润,减轻粘膜水肿。(3)血涂片结果提示,SXBQS高、中剂量及西替利嗪组嗜酸性粒细胞较模型组减少。(4)血清学指标:SXBQS各剂量组及西替利嗪组IgE均较模型组下降,其中SXBQS高、中剂量组与模型组差异有统计学意义;SXBQS各剂量组及西替利嗪组血清组胺含量均较模型组降低,高剂量组及西替利嗪组与模型组有差异;SXBQS高剂量组可显著降低IL-5水平;SXBQS各剂量组及西替利嗪组不同程度上调血清IFNγ水平、降低血清IL-4、IL-17水平。(5)鼻腔灌洗液:SXBQS高剂量及西替利嗪组显著降低鼻腔灌流液总蛋白浓度;SXBQS高、中剂量及西替利嗪组IgE含量较模型组降低;各组大鼠鼻腔灌洗液组胺含量无明显差异;各组IL-4水平有不用程度回降,SXBQS高剂量组与模型组差异有统计学意义。5.建立了 BAL的ELISA检测方法,线性范围在31.25 ng·ml-1～1000 ng·mL-1,回收率在93.58-107.18%之间(平均99.42%),RSD10%,符合生物样品检测要求。SXBQS中BAL在灌胃后2-3 h出现第一个峰值,高中低剂量显示线性药代动力学特征。药动与药效相关性分析提示SXBQS缓解BN大鼠鼻部过敏症状,BAL可能发挥了重要作用。6.BAL药效:(1)西替利嗪及BAL高、中剂量均能降低小鼠喷嚏、挠鼻次数。(2)西替利嗪组及BAL高、中剂量组鼻粘膜层水肿减轻,嗜酸性粒细胞浸润减少;西替利嗪组及BAL各组肥大细胞均有不同程度减少。(3)西替利嗪及BAL高、中剂量组可降低AR模型血清IgE水平。西替利嗪及BAL各剂量组均可降低血清中组胺含量。(4)流式细胞结果:BAL高剂量组Th1细胞比例增加,与AR模型组差异有统计学意义;BAL各剂量均可下调Th2细胞比例;AR模型组较空白对照组Th17细胞比例升高,BAL高剂量可下调Th17细胞比例;西替利嗪及BAL高、中剂量可上调Treg细胞比例。(5)LDF结果:与空白对照组相比,AR模型组鼻粘膜血流量显著下降。西替利嗪及BAL高剂量组可上调鼻粘膜血流量。(6)鼻粘膜血管通透性结果:鼻腔灌流30min时AR模型组大鼠鼻腔灌流液伊文斯蓝含量最多,与空白组有显著差异,BAL可以降低灌洗液中伊文斯蓝含量,与模型组差异有统计学意义。结论:1.提出鼻鼽核心病机为肺肾两虚,在此基础上有外风、脾虚、郁热之异。2.SXBQS灌服后1h即起效,起效时间超过12h,长于西替利嗪。SXBQS可以缓解AR模型鼻部过敏症状,降低血清IgE、组胺含量,减轻鼻粘膜炎症细胞浸润,且成剂量依赖性,初步证明了 SXBQS治疗AR的药效。SXBQS各组可不同程度地上调IFNy表达,并下调IL-4、IL-5、IL-17的表达,说明SXBQS有可能通过调控T细胞平衡发挥抗过敏效应。SXBQS还可明显降低鼻腔灌流液IL-4含量,推测SXBQS不仅可整体免疫调节,对AR鼻腔局部治疗也比较敏感。3.鼻部行为学评分与黄芩苷含量有良好的相关性,推测黄芩苷可能是SXBQS抗过敏药效的主要活性成分之一。4.BAL可缓解小鼠AR模型鼻部过敏症状,减少鼻粘膜炎症细胞数量,降低血清IgE、组胺含量,初步证明了 BAL有治疗AR的作用。BAL可上调Th1、Treg细胞,下调Th2、Th17细胞,说明其可调控Th细胞平衡。鼻粘膜血流量及血管通透性实验进一步验证了 BAL抗组胺效应。
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【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R276.1

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