vMIP-ⅡN端肽靶向PDGFRα逆转乳腺癌EMT的机制研究

发布时间：2018-03-05 13:18

  本文选题：乳腺癌　切入点：紫杉醇　出处：《中国科学技术大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：肿瘤转移是临床治疗失败和死亡的主要原因,研究其分子机制是开发治疗措施,提高存活率的关键。上皮间质转换(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)是一个多基因参与的生物过程,在肿瘤细胞转移和化疗耐药中发挥重要的作用,探讨EMT的内在调控机制具有重要的科学价值。紫杉醇(Paclitaxel,Taxol)为治疗复发性或转移性乳腺癌单药及联合用药的一线化疗药物,其耐药是导致乳腺癌化疗失败的巨大障碍。本研究旨在揭示乳腺癌化疗耐药的分子机制,克服化疗耐药性,以获得更好的临床疗效。趋化因子受体CXCR4与其配体基质细胞源性因子-1 alpha(stromal cell-derived factor-1 alpha,SDF-1α)相互作用能有效促进肿瘤细胞的增殖和侵袭,在乳腺癌器官特异性,如淋巴以及肺和骨髓的转移中发挥重要的调控作用。CXCR4信号通路与紫杉醇耐药、EMT形成机制存在Cross-talking,可作为临床辅助化疗的靶点。来源于病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ(Virus macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)N 末端 21 个氨基酸的多肽(NT21MP),通过与SDF-1α竞争结合CXCR4受体,在乳腺癌细胞凋亡诱导和增殖抑制中发挥重要的作用。但其调控EMT的效应和机制尚不清楚。血小板源性生长因子(The platelet-derived growth factor,PDGF)信号途径通过调控细胞增殖、凋亡、迁移、趋化及EMT诱导,促进了恶性肿瘤的发生发展。血小板源性生长因子受体-alpha(Platelet-derived growth factor receptor-alpha,PDGFRα)在乳腺癌中异常高表达,与EMT诱导相关,赋予肿瘤细胞耐药表型和侵袭能力。本研究首先利用生物信息学技术分析NT21MP结合CXCR4的关键氨基酸和理化性质;其次,以乳腺癌亲本细胞株MCF-7,SKBR-3和MDA-MB-231,以及其紫杉醇耐药细胞株(SKBR-3/PR和MCF-7/PR)为研究对象,采用体外实验和联合免疫缺陷小鼠体内乳腺癌耐药模型进行研究。体内实验以SKBR-3/PR细胞构建乳腺癌紫杉醇耐药裸鼠模型,NT21MP通过尾静脉注射,紫杉醇和生理盐水通过腹腔注射;分析肿瘤重量、增殖凋亡活性、肺转移和EMT标志物等蛋白表达改变;体外实验中,利用荧光定量技术,Western blot法检测基因表达,利用增殖、凋亡、迁移和趋化等实验检测生物学活性。结果显示SDF-1αN端Lys1和Ser4以疏水作用力和氢键分别与CXCR4的关键活性位点的氨基酸Asp262和Arg188结合,对阻断CXCR4信号可能发挥关键的作用。NT21MP可部分逆转紫杉醇诱导的EMT表型,并可下调耐药细胞中PDGFA,PDGFB及其受体PDGFRα的表达,随之抑制后续AKT和ERK1/2的信号通路活性,从而逆转EMT。
[Abstract]:Tumor metastasis is the main cause of failure and death in clinical treatment. Studying its molecular mechanism is the key to develop therapeutic measures and improve survival rate. Epithelial-mesenchymal transition (EMTT) is a multigene involved biological process. Paclitaxel Taxol is a first-line chemotherapeutic agent for the treatment of recurrent or metastatic breast cancer, which plays an important role in tumor cell metastasis and chemotherapeutic resistance. The aim of this study was to reveal the molecular mechanism of chemoresistance in breast cancer and to overcome chemoresistance. The interaction between chemokine receptor CXCR4 and its ligand stromal cytokine 1 alpha(stromal cell-derived factor-1 alphaSDF-1 伪 can effectively promote the proliferation and invasion of tumor cells. CXCR4 signaling pathway and paclitaxel resistant EMT formation mechanism exist Cross-talking.It can be used as a target of clinical adjuvant chemotherapy. It is derived from viral macrophage inflammatory protein 鈪，

本文编号：1570418