丹参有效成份配伍配比对血管外膜成纤维细胞和自发性高血压大鼠模型的作用及其机制研究

发布时间：2018-03-09 03:18

  本文选题：高血压　切入点：丹参有效成份　出处：《河北医科大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分均匀设计与正交设计联用筛选丹参有效成份抑制成纤维细胞增值的最佳配伍配比目的:丹参是我国用于治疗心脑血管疾病的传统中药,包含4种主要水溶性成份:丹参素(DSS,S)、丹酚酸A(Sal-A,A)、丹酚酸B(Sal-B,B)和原儿茶醛(PAL,P),我们简称为(SABP)。大量的研究已经证实,每种成份都可通过不同的作用机理起到心血管保护作用。血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblast,AF)作为一个生物学处理中心从外向内(outside-in)调节血管的结构和功能,血管在应答应激和损伤的过程中,AF首先被快速激活,通过本身改编而显示不同功能和结构的行为,被视为血管应答的始动因素。目前中药有效成份配伍研究已经成为中药创新研究的一种新模式。因此,我们设想运用均匀设计和正交设计联合应用的方法,通过观察其对AF增殖的作用,找出丹参4种主要水溶性成份的最佳配伍配比关系。方法:本实验选用成年Sprague Dawley(SD)大鼠,培养其胸主动脉外膜成纤维细胞,运用MTT方法,观察药物对其增殖的抑制作用,应用酶标仪读取结果并计算抑制率。筛选步骤如下:1、初步筛选注射用丹参(冻干)粉(salvia miltiorrhiza lyophilized powder,SMLP)及丹参的四种有效成份各自的有效应用剂量范围。2、采用均匀设计和正交设计联用的方法,进行成份剂量和配伍的筛选。3、把实验得到的最优组合再次排列组合进行验证。结果:1药物浓度初筛结果:每种药物对AF的抑制率最显著的有效浓度范围是:Sal-A,Sal-B,DSS的有效浓度范围都是(10-3 mol/L,10-4 mol/L,10-5 mol/L),PAL的有效浓度范围是(10-2 mol/L,10-3 mol/L,10-4 mol/L),但是SMLP对血管外膜成纤维细胞无明显的抑制作用,且各浓度之间没有统计学差异;2均匀设计实验结果:结合初筛药物浓度实验得到的结果,四个成份各选取有效剂量范围内6个不同浓度,然后按照均匀设计表,即4因素6水平均匀表u6(64)安排实验,结果显示第3组是最有效的配伍组合,抑制作用最显著,有统计学差异。即:s3(10-4mol/l),a6(10-6mol/l),b2(5×10-4mol/l),p4(5×10-4mol/l);3正交设计实验结果:结合均匀设计实验得到的结果,在最优的处理中,根据各成份对应剂量相距较近的范围内,再次选择低、中、高3个不同剂量,对dss、sal-a、sal-b、pal四个成份的有效剂量低、中、高进行正交设计实验研究,选择l9(34)正交表,结果显示第6组是抑制作用最显著的配伍组合,具有统计学差异。即:s2(1.5×10-4mol/l),a3(7×10-6mol/l),b1(3×10-4mol/l),p2(5×10-4mol/l);4将丹参4种成份再次进行排列组合,进一步验证最佳配伍配比。根据均匀设计和正交设计的结果,为各成份确定一个最适宜有效剂量,对dss、sal-a、sal-b、pal四个成份再次排列组合:s、a、b、p,sa、sb、sp、ab、ap、bp、sab、sap、sbp、abp、sabp共15个,再次考察各种配伍组合对af增殖的影响,结果显示sabp组的抑制率最大,为最佳配伍配比组合。结论:本实验运用均匀设计和正交设计联合应用的实验方法,筛选出丹参的四种主要水溶性成份(dss、sal-a、sal-b、pal),抑制血管外膜成纤维细胞增殖的最佳配伍配比关系和浓度,即s(1.5×10-4mol/l),a(7×10-6mol/l),b(3×10-4mol/l),p(5×10-4mol/l),比例为(150，

本文编号：1586762