兔髓核间充质干细胞移植治疗退变椎间盘的实验研究

发布时间：2018-03-14 07:53

  本文选题：椎间盘退行性变　切入点：髓核间充质干细胞　出处：《南方医科大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：实验目的:研究髓核间充质干细胞和髓核细胞修复退变椎间盘能力的差异,为髓核间充质干细胞治疗退变椎间盘的进一步应用提供实验根据。实验方法:1.髓核间充质干细胞的分离培养及生物活性检测:髓核间充质干细胞是通过流式细胞分选术获得并培养,并进行成骨、成软骨、成脂细胞诱导分化实验。成骨分化检测包括碱性磷酸酶染色和和茜素红染色。成软骨分化与成脂肪检测分别是通过甲苯胺蓝染色鉴定与油红O染液染色完成。2.毮核细胞的分离培养及生物活性检测:髓核细胞是通过细胞贴壁法获得并培养,进行增殖能力的检测、Ⅱ型胶原染色和甲苯胺蓝染色。3.实验分组:将32只兔子进行退变椎间盘模型建立,造模后随机分为A、B、C、D组,分别为空白对照组,髓核间充质干细胞移植组,髓核细胞移植组,单纯培养液对照组。4.影像学检查:在细胞移植1d前及细胞移植12w后,行X线检查以评估椎间盘高度指数(DHI%),行MRI检查以计算髓核区域相对信号强度(RSI)。5.PCR检测:提取总RNA,把内参引物序列GAPDH的表达量除胶原蛋白Ⅱ、蛋白聚糖的表达量,得到胶原蛋白Ⅱ、蛋白聚糖的相对表达量。6.蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白定量检测。7.统计学分析:选用spss20.0软件进行数据统计学分析。计量资料用均数±标准差(x±s)表示,组间进行单因素方差分析,以P0.05表示统计学差异显著,P0.05表示无明显统计学差异。主要结果:1.髓核间充质干细胞在成骨诱导分化及检测中,碱性磷酸酶染色和和茜素红染色均显示阳性显色。在成软骨和成脂诱导分化及检测中见甲苯胺蓝染色见细胞呈蓝色,并有大小不等的脂滴形成。2.兔原代髓核细胞呈圆形,形态大小均一。细胞增殖活力在早期较低,而在5d-13d时明显增强。甲苯胺蓝染色与Ⅱ型胶原蛋白免疫组化染色见阳性。3.在移植12w后,B组的高度指数(DHI%)与其他组相比明显增高,有显著性差异(P0.05)。B组的RSI值比C组明显增强,显著性差异(P0.05)。4.在PCR检测和蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白定量检测可知,B组在蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白的基因表达水平高于其他组,有统计学意义。B组比C组蛋白聚糖的蛋白表达水平高,有显著性差异,但四组在Ⅱ型胶原蛋白表达水平上差异无统计学意义(P0.05)。实验结论:髓核间充质干细胞与髓核细胞均能提高退变椎间盘内蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白基因水平的表达,促进退变椎间盘的修复,但髓核间充质干细胞的修复效果比髓核细胞更好。髓核间充质干细胞或许能进一步应用于治疗退变椎间盘方面。
[Abstract]:Objective: to study the difference of the ability of mesenchymal stem cells and nucleus pulposus cells to repair degenerative intervertebral disc. To provide experimental basis for further application of nucleus pulposus mesenchymal stem cells in the treatment of degenerative intervertebral disc. Experimental method: 1. Isolation, culture and bioassay of mesenchymal stem cells of nucleus pulposus: mesenchymal stem cells of nucleus pulposus are derived from flow cytometry. Sorting is obtained and cultivated, And osteogenesis, cartilage formation, Osteogenic differentiation was detected by alkaline phosphatase staining and alizarin red staining. Cartilage differentiation and adipogenesis were detected by toluidine blue staining and oil red O staining. Isolation, culture and bioactivity of nuclear cells: nucleus pulposus cells were obtained and cultured by cell adherence. The proliferative ability was tested, type 鈪，

本文编号：1610280