突触核蛋白自噬性降解障碍在环境毒素鱼藤酮导致帕金森症中机制研究.pdf

  本文关键词：α-突触核蛋白自噬性降解障碍在环境毒素鱼藤酮导致帕金森症中机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

博士学位论文 论文题目 α-突触核蛋白自噬性降解障碍在环境毒素 鱼藤酮导致帕金森症中机制研究 研究生姓名 吴 锋 指导教师姓名 秦正红 专 业 名 称 药理学 研 究 方 向 神经药理学 论文提交日期 2015 年3 月 α-突触核蛋白自噬性降解障碍在环境毒素鱼藤酮导致帕金森症中机制研究 中文摘要 α-突触核蛋白自噬性降解障碍在环境毒素鱼藤酮导致帕 金森症中机制研究 中文摘要 目的：环境毒素鱼藤酮能够引发 α-突触核蛋白 （α-synuclein ）在中脑黑质区多巴 胺神经元中蓄积、导致多巴胺神经元发生退行性病变，其分子机制尚不完全明确；我 们证明鱼藤酮能够通过损伤溶酶体，引起自噬流阻滞，蛋白降解障碍，α-synuclein 在 中脑黑质区多巴胺神经元内堆积后导致帕金森症发病。 方法：我们在长期鱼藤酮皮下注射 Lewis 大鼠制备的帕金森大鼠模型和多巴胺能 细胞系 PC12 细胞鱼藤酮体外干预模型基础上，观察鱼藤酮引起的 α-synuclein 自噬降 解障碍并探讨其作用机制。在体内模型中，我们分别通过免疫组织化学法观察大鼠中 脑黑质区多巴胺神经元数量，免疫印迹法检测纹状体和腹侧中脑区酪氨酸羟化酶 （tyrosine hydroxylase ，，TH ）含量，动物自发活动仪进行行为学研究，明确帕金森症 动物造模成功。然后通过形态学检测大鼠中脑黑质区多巴胺神经元内 α-synuclein 聚 集体，电镜观察自噬体数量，腹侧中脑取材后 PCR 法检测 α-synuclein 的mRNA 水平， 免疫印迹法检测 α-synuclein 以及自噬标记物 microtubule-associated protein 1 light chain 3-II （LC3-II ），Beclin 1 ，和 p62 等蛋白水平。免疫荧光法双标 TH/α-synuclein， TH/LAMP2，TH/cathepsin D 。在体外模型中，我们使用 CCK8 法检测 PC12 细胞活 力确定鱼藤酮

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