MiR-374a在非小细胞肺癌中的表达、功能及分子机制的初步研究

发布时间：2018-03-31 08:01

  本文选题：miR-374a　切入点：非小细胞肺癌　出处：《南方医科大学》2017年博士论文

【摘要】：肺癌是全球发病率最高的肿瘤,其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占85%,临床症状出现时,多已发展到中晚期,5年生存率小于15%。对中晚期肺癌患者而言,传统的治疗方法效果不理想,延长生存期有限。通过对肺癌基因及其作用机制的研究,实施精准分子靶向治疗成为当前有前景的重要研究方向。microRNA(miRNA)是具有调控功能的非编码小RNA,主要通过直接调节细胞生长或作用于转录因子、信号通路阻断细胞程序性死亡,发挥类似于癌基因或抑癌基因的功能。其中,miR-374a已被报道在骨肉瘤,结肠癌,乳腺癌和胃癌中发挥癌基因作用。但数项miR-374a在肺癌的作用研究报道结果并不一致,这表明miR-374a在肺癌中作用复杂,其究竟扮演何种角色,其调节的具体信号通路需要深入研究探讨。基于此,本课题的目的是研究miR-374a在非小细胞肺癌中的功能、其参与的信号转导通路,为NSCLC发病机制提供新思路,为诊断和治疗提供新的策略。我们首先用慢病毒载体在非小细胞肺癌细胞中过表达miR-374a,转染miR-374a mimics 和 inhibitors,应用 qRT-PCR 检测转染前后 miR-374a 的表达情况;应用MTT,平板克隆,流式细胞术,Edu,Transwell,Boyden,裸鼠皮下成瘤,裸鼠肝包膜等方法检测miR-374a转染前后非小细胞肺癌细胞株的增殖,侵袭和转移变化;再通过双荧光素酶报告基因实验和Westernblot实验验证miR-374a能直接结合CCND1和PTEN的3'UTR端;用Westernblot实验检测miR-374a调控之信号通路蛋白;通过原位杂交和免疫组化方法检测miR-374a和CCND1以及PTEN在非小细胞肺癌的表达,并分析两两之间的相互关系。结果发现:1,稳定过表达miR-374a可以抑制A549细胞增殖、克隆和体内成瘤能力,但促进SPCA-1和H1975细胞增殖、克隆和体内成瘤能力。miR-374a Inhibitors能够逆转稳定过表达或瞬时过表达miR-374a后A549、SPCA-1和H1 975细胞的增殖、侵袭和迁移能力。2,A549细胞中miR-374a能够直接靶向CCND1和PTEN的3'UTR区,过表达miR-374a后,A549细胞中CCND1的表达下调,而SPCA-1和H1975细胞中PTEN表达下调,瞬时转染miR-374a inhibitor后能够逆转这一作用。3,Western blot检测稳定过表达miR-374a后A549细胞中pPI3K、pAkt、c-Myc、CDK4 及 N-cadherin 的表达下调;P21 及 E-cadherin 的表达则上调,miR-374a inhibitor能逆转相关蛋白表达。稳定过表达miR-374a后SPCA-1和H1975细胞中β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、TCF4、c-Myc、P21和N-cadherin的表达上调;而P21的表达则下调。miR-374a inhibitor能逆转过表达相关蛋白的表达。4,瞬时干扰CCND1后,A549细胞中pPI3K、pAkt、c-Myc、CDK4及N-cadherin的表达下调;E-cadherin和P21表达上调。,瞬时干扰PTEN后 SPCA-1 和 H1975 细胞中 β-catenin 信号通路相关蛋白 β-catenin、TCF4、c-Myc、P21和N-cadherin的表达上调;而P21的表达下调。5,早期NSCLC肺组织中高表达miR-374a的患者预后好,晚期NSCLC肺组织中高表达miR-374a则不利于预后,低表达miR-374a与淋巴结转移密切相关。在早期NSCLC组织中,miR-374a与CCND1表达呈正相关,在晚期NSCLC组织中,miR-374a和CCND1无相关性;晚期NSCLC组织中,miR-374a与PTEN表达呈负相关,而在早期NSCLC组织中,miR-374a和PTEN却无相关性。研究结论是:miR-374a在不同的非小细胞肺癌细胞中发挥的功能不同,在非小细胞肺癌不同阶段扮演的角色也不相同。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

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本文编号：1689843