白介素和糖尿病视网膜病变的关系

发布时间：2018-03-31 21:48

本文选题：IL-17A　切入点：Act1　出处：《南京医科大学》2017年博士论文

【摘要】：目的:糖尿病视网膜病变是糖尿病后期最严重的并发症之一,造成全世界范围内,i青壮年的患者致盲而失去劳动能力的主要原因,糖尿病视网膜病变的病因机制复杂的,涉及炎症因子,血管及神经等各个方面,糖网发展过程引起糖尿病视网膜的结构和功能的改变,引起越来越多临床医师的重视,整个病程中最主要显示糖尿病视网膜病变的早期,调节炎症的细胞因子包括白介素IL-1,白介素IL-6白介素IL-8,白介素IL-10,白介素IL-12和白介素IL-18,在糖尿病患者的眼内液中有明显的增加,糖尿病视网膜的病理炎症性改变促使了血视网膜屏障破坏,视网膜新生血管化,造成视网膜中谷氨酸代谢的障碍,随后引发视网膜神经元的凋亡,核心的实验研究主要通过挑选研究白介素家族中IL-17A在糖尿病视网膜病变中的作用,来阐明白介素和糖网的关系。实验一开始先以Ins2秋田糖尿病鼠和高血糖培养的原代的Muller细胞作为模拟糖尿病视网膜病变的病理学模型。高糖和糖尿病都可以诱导了网膜表达IL-17A,再由IL-17A去激动的Act1信号通路下游的信号通路,从而诱导了 Muller细胞的激动并引发其细胞功能的障碍。实验中还可以证实用IL-17A进行玻璃体腔内注射可以加剧糖尿病诱导的视网膜血管的白细胞淤滞和血管渗漏以及节细胞的凋亡等病理变化,反之,对于Act1信号的压制或者抗IL-17A单克隆抗体可以改善视网膜血管的损伤和其造成的神经元细胞的凋亡,这些发现证实了 IL-17A通过Act1信号通路而损伤Muller细胞功能,进而加速恶化了糖尿病视网膜病变的病理过程。而对其进行阻断性的实验治疗研究则可能在将来代表着一种对于糖尿病视网膜病变的崭新的治疗方法。方法:本项研究分两方面进行。第一方面在于动物模型实验雄性杂合秋田鼠可以自行发展出胰岛素依赖的糖尿病,这些秋田鼠都接受了玻璃体腔内的注射,高血糖的秋田鼠的视网膜会表现出糖尿病视网膜病变的病理学特征。玻璃体腔内的注射用鼠源性重组IL-17A(8或40ng/2uL或者是中性化的单克隆抗体抗-IL-17A。(mAb,2或10ng/2ul)注射入实验秋田鼠的玻璃体腔内。另一种是以腺病毒作载体基因表达的短发夹RNA,标定为Act1(Ad-Act1-shRNA)的制成品,也被注射入秋田鼠的玻璃体腔内。这批实验小鼠接受了玻璃体体腔内的腺病毒注射,并用于网膜造影的检查。详细计数每张网膜上粘附的白细胞,评估网膜血管的白细胞淤滞。用免疫荧光显微镜观察网膜造影的结果。通过免疫组化和TUNEL染色确认凋亡的视网膜神经节细胞。第二方面在于细胞培养和处理原代的大鼠网膜Muller细胞的培养,高糖处理,注入IL-17A(25ngml-1)和/或者/IKK的阻断剂(菊内酯),高糖条件下,腺病毒载体-Act-shRNA作为多样性感染感染原代Muller细胞。分别进行免疫着色分析,酶联免疫吸附测定,以及通过高效液相色谱法进行数量化计算。结果:相对于野生型小鼠,在糖尿病开始后的三个月后,在秋田鼠的糖尿病动物模型中,网膜Muller细胞IL-17A和IL-17RA的表达被上调了,同时在网膜中也表现出了 IL-17A的成分明显增加。在高糖处理的Muller细胞中和秋田鼠的网膜组织中,Act1/TRAF6/IKK/NF-κB信号系统会被加强,如用IL-17A处理后,会进一步加强。通过Act1/IKK信号系统IL-17A恶化了高糖诱导的Muller细胞的活动和功能不良.通过Act1信号系统,IL-17A恶化了秋田鼠的血视网膜屏障的崩解,在秋田鼠中,通过Act1信号系统IL-17A可以增加网膜神经节细胞的凋亡.结论:在网膜的Muller细胞中,糖尿病诱导了 IL-17A的制造和IL-17RA/Act1/TRAF6/IKK/NF-κB的信号系统的起动,外因性的IL-17A注入可以恶化糖尿病诱导的Muller细胞的活动和功能不良,以及血视网膜屏障的分裂以及网膜神经元的凋亡,然而,阻断IL-17A可以减轻这些网膜的病理改变,另外,阻断这些炎症信号的通路,用Act1调低或者一种IKK的阻断剂,可以减缓糖尿病视网膜病变的病理性改变,这些发现都表明,在糖尿病中,在网膜Muller细胞中IL-17A的产出和Act1信号系统的活动代表了一种炎性反应,这一反应加速了糖尿病视网膜病变的进展。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between IL - 17A and IL - 17A in diabetic retinopathy . The expression of IL - 17A and IL - 17RA in the retinal ganglion cells induced by high glucose was investigated by immunohistochemistry and TUNEL staining .

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R587.2;R774.1

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