肥胖参与胃癌发生及进展的临床和基础研究

发布时间：2018-04-01 01:27

  本文选题：肥胖　切入点：胃粘膜上皮内瘤变　出处：《北京协和医学院》2017年博士论文

【摘要】：第一部分研究背景萎缩性胃炎,肠上皮化生和胃粘膜上皮内瘤变被证实是胃癌的癌前疾病,并且其进展为胃癌的几率逐次升高,被认为是胃癌发生的“级联反应”。在这些病变中,胃粘膜上皮内瘤变(尤其是高级别瘤变)被认为是进展为胃癌的最后一步。但是,关于胃粘膜上皮内瘤变尤其是高级别瘤变的危险因素目前人没有被充分阐述。肥胖已经被证实是多种恶性肿瘤发生的危险因素,包括胃癌、乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、结直肠癌、食管癌、肝癌、胰腺癌、胆囊癌及肾癌。高胆固醇血症已经被证实是多种疾病尤其是心血管疾病的危险因素。除此之外,一些研究也证实了较低的血清胆固醇水平可能增加癌症病人的死亡率。同时,高血清胆固醇水平也被证实与胃癌的发生相关,特别是肠型胃癌。但是,肥胖和血清胆固醇水平与胃粘膜上皮内瘤变之间风险关系目前还没有被详细的研究。研究目的研究肥胖、血清总胆固醇水平与胃粘膜上皮内瘤变之间的风险关系研究方法回顾性分析北京协和医院2000年1月-2015年12月胃粘膜上皮内瘤变的患者及同期健康对照人群,采集相关人群体重指数(body mass index,BMI)和血清总胆固醇水平,计算相关风险因素的OR值和相应的95%可信区间(95%confidence intervals,CI)。研究结果(1)在校正了年龄、吸烟史、酗酒史、胃癌或食管癌家族史以及血清总胆固醇水平之后,肥胖(BMI ranging from27.5 to 29.9)被证实是胃粘膜上皮内瘤变的危险因素(adjusted OR=1.87 for men with 95%CI of 1.24-2.81;adjusted OR=2.72 for women with 95%CI of 1.44-5.16)。但是对于超重(BMI ranging from 23.0 to 27.4)和重度肥胖(BMI=30.0 or more)而言,在矫正年龄、吸烟史、酗酒史、胃癌或食管癌家族史以及血清总胆固醇水平之后,没有发现其是胃粘膜上皮内瘤变的危险因素。(2)高血清总胆固醇血症(4.55mmol/L)可以增加女性胃粘膜上皮内瘤变的发病风险(adjusted OR=1.83,95%CI=1.25-2.69)。但与男性胃粘膜上皮内瘤变的发病无关。研究结论(1)27.5≤BMI30是男性胃粘膜上皮内瘤变的独立危险因素。(2)27.5≤BMI30是女性胃粘膜上皮内瘤变的独立危险因素。(3)血清总胆固醇水平4.45mmol/L是女性胃粘膜上皮内瘤变的独立危险因素。第二部分研究背景NUCKS1(nuclear,casein kinase and cyclin-dependent kinase substrate 1)是一种分子量为27kDa的蛋白质,与HMG家族成员相似。编码NUCKS蛋白的基因定位于人染色体1q32。NUCKS广泛表达在人体的多种组织中,参与人体的营养代谢。研究显示,在人体脂肪组织中,NUCKS1的表达与体重指数(Body mass index,BMI)呈负相关,提示NUCKS1可能与细胞的代谢相关。BeiyingQiu等研究显示在敲除NUCKS基因后,小鼠更容易出现体重增加和胰岛素抵抗,进而可导致肥胖和糖尿病。同时,研究显示NUCKS1在包括乳腺癌、结直肠癌、胰腺癌等多种恶性肿瘤中高表达,提示NUCKS1在恶性肿瘤中可能行使癌基因的作用。NUCKS1具体的作用机制目前还没有被完全解释清楚,Beiying Qiu等的研究结果显示,NUCKS通过PI3K/AKT信号通路调节细胞的能量代谢。而PIK3/Akt/mTOR信号通路还被报道参与多种恶性肿瘤的有氧糖酵解和肿瘤增殖。综上所述,提示NUCKS1可能通过调控调控PIK3/Akt/mTOR信号通路的激活,并以此调节肿瘤增殖。研究目的研究NUCKS1在胃癌中的功能及其具体的作用机制。研究方法(1)收集北京协和医院胃腺癌癌石蜡标本及相应癌旁组织标本;应用免疫组织化学法检测NUCKS1蛋白在组织及癌旁组织的表达;研究中分类变量的比较采用chi-square检验;NUCKS1在胃癌及癌旁组织的表达差异的检测采用Mann-Whitney U检验。使用Kaplan-Meier法构建生存曲线,同时组间生存差异的比较采用Log-rank检验。而后我们采用Cox regression进行危险因素的单因素分析和多因素分析以评估NUCKS1蛋白在胃癌患者总生存期和无病生存期中的作用。(2)采用weternblot检验NUCKS1在几种常用胃癌细胞系中的表达,采用小干扰RNA(Small interferingRNA,siRNA)敲低 SGC-7901 和 NCI-N87 细胞系中 NUCKS1 的表达,或用质粒载体在AGS细胞系中过表达NUCKS1;Transwell法检测各组胃癌细胞的迁移、侵袭能力;CCK8法检测相关胃癌细胞的增殖能力;流式细胞仪检测胃癌细胞的细胞周期分布情况及凋亡情况;Western blotting法检测与迁移、侵袭及细胞周期有关的蛋白MMP-2、MMP-9和KLF4的表达。(3)敲低或过表达NUCKS1后,采用weternblot检验PI3K/Akt/mTOR信号通路中关键分子的表达。然后,在AGS中过表达NUCKS1后敲低IGF-1R后,用之前方法检测细胞增殖、迁移、侵袭能力及PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制情况。随后,使用免疫组化检验人胃腺癌组织中IGF-1R与NUCKS1表达的相关性,同时使用双荧光素酶报告基因检测NUCKS1对IGF-1R转录的调控情况。研究结果(1)NUCKS1蛋白在人胃腺癌组织中的高表达率为42%,高于癌旁组织的12.2%(P0.001)。同时,NUCKS1在病理分级G3-G4级(P=0.021),或Lauren分型弥漫型(P=0.042),或有脉管浸润(P=0.036),或TNM分期Ⅲ期期(P=0.006)的胃腺癌组织中表达明显升高。此外,NUCKS1高表达组胃癌患者的5年总生存率(overall survival,OS)是 16.7%,显著低于 NUCKS1 正常表达者(55.2%,P0.001),同时NUCKS1高表达患者5年无病生存率为18.6%,NUCKS1正常表达患者为53.4%,两组差异具有统计学意义(P0.001)。(2)Western blot 显示 NUCKS1 在胃癌细胞株 SGC-7901,NCI-N87 和 MGC-803 中阳性表达,在胃癌细胞株AGS和HGC-27及胃粘膜上皮永生化细胞GES-1低表达。使用siRNA敲低NUCKS1后,SGC-7901和NCI-N87细胞的增殖、迁移和侵袭能力得到削弱,细胞周期阻滞在G1/G0期,细胞凋亡率增加。使用质粒载体过表达NUCKS1后,AGS细胞的的增殖、迁移和侵袭能力得到增强,细胞周期中G1/G0期的比例减少。同时,高表达NUCKS1后,体内实验证实肿瘤增殖加快。(3)使用siRNA在AGS-NUCKS1中敲低IGF-1R后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力得到削弱,细胞周期G1/G0期比例升高,细胞凋亡率增加。过表达NUCKS1后,western blot显示PI3K/Akt/mTOR信号通路中关键分子表达水平升高,继而敲低IGF-1R后,相关分子表达水平下降。免疫组化显示在人胃腺癌组织中IGF-1R的表达与NUCKS1的表达呈正相关(r=0.6237,P0.001)。双荧光素酶报告基因显示过表达NUCKS1可增强IGF-1R启动子的活性(P=0.011)研究结论(1)NUCKS1蛋白在人胃腺癌组织中高表达,其表达水平与胃癌患者病理分级、TNM分期、Lauren分型及脉管浸润呈正相关。同时,NUCKS1高表达作为胃癌患者的预后不良的独立危险因子。(2)NUCKS1可作为癌基因促进胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭及成瘤能力。(3)NUCKS1可正向调控IGF-1R的转录,进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路在胃癌细胞中行使癌基因的功能。第三部分研究背景胃癌是全球发病率第四位的恶性肿瘤,并在恶性肿瘤导致的死亡中排名第三位。胃癌的高发区为东亚,尤其在我国,胃癌严重威胁我国人民健康。在我国,胃癌的发病率在男性中居第二位,在女性中居第三位。目前,手术是治疗胃癌最主要的手段。但自从1989年Wilke等首先报道了在胃癌中使用新辅助化疗后,新辅助化疗在胃癌的治疗中越来越被接受,新辅助化疗的优点主要有:使肿瘤降期;提高根治性切除率;消灭肿瘤微转移灶。越来越多额RCT研究也证实新辅助化疗可以提高胃癌患者的总生存期。新辅助化疗的另一个优点是可以评估患者对化疗的反应,从而指导医生对患者术后化疗方案的选择。当然,新辅助化疗疗效的评估和预测也是目前研究的难点和焦点。因此,我们分析2007年2月至2017年3月于本院就诊的进展期胃癌行新辅助化疗治疗患者的临床资料,评估进展期胃癌患者行新辅助治疗后的临床病理特征及效果,探索影响新辅助化疗疗效的因素研究目的研究新辅助化疗对进展期胃癌的作用及新辅助化疗前后T分期降期对进展期胃癌患者预后的预测作用研究方法回顾性分析我院2007年2月至2017年3月180例进展期胃癌行新辅助化疗的病历资料,分析新辅助化疗对T3-4期进展胃癌患者预后的影响。同时,评价新辅助化疗后T分期降期对T3-4期胃癌预后的预测作用。研究结果(1)男性占70%(126/180),女性占30%(54/180)。年龄19-82岁,平均年龄59±11.86岁。R0切除者166例,占92.2%。患者平均接受2-5周期的新辅助化疗。术中清扫淋巴结5-77枚,平均28枚,淋巴结阳性者占68%(100/148)。220例患者新辅助化疗后评价为CR(完全缓解)者6例,PR(部分缓解)者91例,SD(疾病稳定)者63例,PD(疾病进展)者20例。化疗有效率(CR+PR)为53.9%(97/180),疾病控制率(CR+PR+PD)为88.9%(160/180)。在接受新辅助化疗及根治性手术的患者中,有156人(94%)基线T分期为T3-4。在这156人中,67人经过新辅助化疗T分期降期为ypT0-2(42.9%),术后病理分期为ypT3-4的病人为89人(57.1%)。(2)对于cT3-4期进展期胃癌患者,新辅助化疗组五年总生存率为50.6%,对照组五年总生存率为42.5%,两组差异具有统计学意义(P=0.046)。新辅助化疗组五年无病生存率为55.2%,对照组五年无病生存率为40.4%,两组差异具有显著统计学意义(P=0.007)(3)生存分析结果显示降期组(病理结果示降期至ypT0-T2)五年总生存率为81.9%,未降期组(病理结果示未降期至ypT0-T2期)五年总生存率为36.3%,两组差异具有显著统计学意义(P=0.003)。降期组五年无病生存率为82.3%,未降期组五年无病生存率为40.0%,两组差异具有显著统计学意义(P=0.002)。研究结论(1)新辅助化疗可提高cT3/T4期进展期胃癌患者的5年无病生存率和5年总生存率。(2)新辅助化疗后病理T分期为ypT0-2是cT3/T4期进展期胃癌患者预后良好的独立预测指标。
[Abstract]:High serum cholesterol levels have been shown to be a risk factor for gastric cancer . However , high serum cholesterol levels have been shown to be a risk factor for gastric cancer . However , there has been no detailed study of the risk factors associated with gastric cancer , including gastric cancer , breast cancer , endometrial carcinoma , ovarian cancer , colorectal cancer , esophageal cancer , liver cancer , pancreatic cancer , gallbladder cancer and renal cancer . anging from27.5 to 29.9)琚�璇佸疄鏄�鑳冪矘鑶滀笂鐨�鍐呯槫鍙樼殑鍗遍櫓鍥犵矗�

本文编号：1693369