从线粒体途径研究川芎嗪诱导HepG2细胞凋亡效应机制

发布时间：2016-11-15 13:43

  本文关键词：从线粒体途径研究川芎嗪诱导HepG2细胞凋亡效应机制，由笔耕文化传播整理发布。

《南京中医药大学》 2015年

从线粒体途径研究川芎嗪诱导HepG2细胞凋亡效应机制

冯全服  

【摘要】：恶性肿瘤是人类健康面临的重大问题之一。目前放疗、化疗等治疗方法仍然存在副作用大、耐药等问题。因此,寻找防治肿瘤有效药物成为当务之急。川芎嗪(Tetramethylpyrazine, TMP)具有多种药理活性,如抗氧化、改善微循环及抗肿瘤等。近年来,川芎嗪抗肿瘤作用日益受到关注,但围绕川芎嗪诱导肿瘤细胞凋亡机制需进一步探索。线粒体是细胞凋亡过程中起关键作用的细胞器。线粒体途径凋亡(Mitochondrial pathway of apoptosis)主要是线粒体上游信号分子启动后作用于线粒体膜,线粒体膜的功能状态改变引起Bcl-2蛋白家族活化,线粒体PT孔(Permeability transition pore, PT)打开,色素细胞c (Cytochrome c, Cyt-c)启动释放,引起含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase)蛋白家族活化,促使细胞凋亡。目的通过Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测肿瘤细胞增殖抑制并筛选靶肿瘤细胞株。探讨川芎嗪诱导细胞凋亡量效关系、时效关系以及影响线粒体相关蛋白表达及功能变化。重点研究川芎嗪对HepG2细胞凋亡、线粒体功能及相关蛋白表达的影响,探讨川芎嗪抑制HepG2细胞增殖的分子机制,探索从线粒体途径揭示川芎嗪诱导HepG2细胞凋亡效应机制。方法采用CCK-8法观察川芎嗪对HepG2、A549、SMMC-7721、MCF-7、 MCF-10A、L-O2、及BEAS-2B细胞增殖抑制作用。通过IC50及靶向作用效果筛选出HepG2细胞,并观察川芎嗪抑制HepG2增殖作用及量效关系。通过实时细胞分析技术观察川芎嗪对HepG2细胞增殖抑制能力的影响。流式细胞技术观察川芎嗪对HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。通过全自动蛋白系统,观察川芎嗪对HepG2细胞P53蛋白以及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。高内涵系统观察川芎嗪对HepG2细胞Cyt-c的释放以及线粒体跨膜电位的影响；通过全自动蛋白分析系统,观察川芎嗪对HepG2细胞cleaved-Caspase-3及cleaved-Caspase-9的蛋白表达的影响,以期探讨川芎嗪诱导HepG2凋亡效应机制。结果1.川芎嗪抑制HepG2细胞增殖。10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、 100μg/mL、200μg/mL及400μg/mL组抑制率与对照组比较有显著性差异(P0.01),且400μg/mL及400μg/mL组抑制率高于阳性药组。川芎嗪干预HepG2细胞12、24和48h后均能显著抑制HepG2细胞的增殖(P0.01)。川芎嗪干预HepG2细胞后能显著降低细胞核大小(P0.05),显著增加Annexin V-FITC (P0.01)和PI(P0.01)荧光值。川芎嗪能显著诱导HepG2细胞凋亡,呈量效、时效相关。2.川芎嗪显著影响HepG2细胞周期。100 μg/mL川芎嗪干预HepG2细胞12h后,能显著增加HepG2细胞处于G0/G1期的数量(P0.01)。100μg/mL川芎嗪干预HepG2细胞24h和48h后,HepG2细胞凋亡数量显著增加(P0.01)。3.川芎嗪显著增加Cyt-c转位(P0.01)；显著降低线粒体膜电位(P0.05)。显著增加cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9蛋白的表达(P0.01)。100μg/mL川芎嗪干预HepG2细胞使得p53蛋白的表达显著上升(P0.01)。100 μg/mL川芎嗪干预HepG2细胞使得Bcl-2/Bax蛋白表达比率显著下降(P0.01)。结论1.川芎嗪对HepG2、A549、SMMC-7721及MCF-7等肿瘤细胞细胞增殖有抑制作用。2.川芎嗪对HepG2增殖抑制呈剂量依赖性和时间依赖性,IC50剂量低,抑制作用显著。3.川芎嗪干预HepG2细胞12h主要诱导细胞G0/G1期阻滞；作用24h和48h后能够显著诱导HepG2细胞凋亡。4.川芎嗪能够显著增加p53蛋白表达、降低Bcl-2/Bax表达比率,促发线粒体膜电位降低,显著增加Cyt-c转位,从而增加cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9蛋白表达,表明川芎嗪通过Caspase依赖性线粒体介导的细胞凋亡途径抑制HepG2细胞增殖。

【关键词】：
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张凯;朱永士;马楠;孔德志;;肾癌根治性切除术后应用中药联合干扰素的疗效观察[J];中医药临床杂志;2011年08期

2 何维来;陈如坤;周汝元;;川芎嗪对结扎犬LAD损伤冠脉内皮及心肌的保护作用[J];第四军医大学学报;2005年23期

3 景士兵,王振元;细胞因子(IL-8)与肿瘤研究进展[J];中国肺癌杂志;2002年01期

4 张宏图,胡祥;循环中血管内皮生长因子与肿瘤的关系[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2001年02期

5 周昌奎,吴晓华;川芎嗪临床应用及研究进展[J];海峡药学;2004年06期

6 刘志良;崔伦伯;;川芎嗪对小鼠小细胞肺癌血管生长和VEGF表达的抑制[J];辽宁医学院学报;2009年01期

7 高婷;凌斌;赵卫东;周颖;石永云;王梅梅;;卵巢恶性肿瘤免疫状态与转录因子T-bet/GATA3相关性及川芎嗪干预研究[J];南京中医药大学学报;2007年02期

8 张栋,简隆磊,苗华;活血化瘀中药抑制肿瘤血行转移的分子机制[J];山东生物医学工程;2000年01期

9 肖伟,郑春燕,孙继平,张春玲,王爱华;肺癌患者Th1/Th2状态及川芎嗪的调节作用[J];上海免疫学杂志;2001年04期

10 徐晓玉,严鹏科,陈刚,廖端芳;川芎嗪对小鼠肺癌血管生长和VEGF表达的抑制[J];中国药理学通报;2004年02期

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 赵卫东;卵巢恶性肿瘤患者Th2优势状态及其逆转研究[D];安徽医科大学;2004年

2 王敏;Bcl-2、Bax和Caspase-3在骨肉瘤中的表达及其意义[D];山西医科大学;2005年

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 马君义;张继;徐小龙;姚健;;分子蒸馏及其在天然产物分离提纯方面的应用研究进展[J];安徽农业科学;2009年21期

2 吴著群;胡建鹏;任慧慧;;中医药治疗肺癌的研究进展[J];安徽医药;2007年06期

3 彭长林;针刺配川芎嗪穴位注射治疗假性延髓麻痹54例[J];安徽中医学院学报;2002年04期

4 完茂林;刘子荣;桂双英;鲁传华;林腾;王蕾;;川芎嗪口服油包油微乳的研制及大鼠体内药物代谢动力学研究[J];安徽中医学院学报;2011年02期

5 袁淑兰,王修杰;丹参酮抗肿瘤作用及其机理的研究[J];癌症;2003年12期

6 秦凯;崔小兵;徐智勇;岳岭;闻侃;李伟;;川芎嗪药理作用研究进展[J];现代农业科技;2009年20期

7 王建敏,黄绳武,翁洪伟;风痛灵颗粒制备工艺研究[J];浙江中医学院学报;2003年03期

8 陈良良;黄健飞;;丹参及其提取物对肿瘤转移影响的研究述评[J];浙江中医药大学学报;2006年04期

9 辛海;肺癌的中医临床治疗进展[J];北京中医;2003年06期

10 曲正,侯培珍,曲伟,王颖慧;川芎嗪逆转人胃癌耐药细胞SGC7901/ADM多药耐药的实验研究[J];包头医学院学报;2005年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 冯彬彬;张建海;徐晓玉;陈红;;抗肿瘤中药研究进展[A];2011年中华名中医论坛暨发挥中西医优势防治肿瘤高峰论坛论文集[C];2011年

2 袁媛;陈光英;;中药复方制剂制备工艺中挥发油取舍问题探讨[A];海南省药学会2007年论文汇编[C];2007年

3 王瑞平;薛维伟;;中药抗肿瘤血管生成研究近况[A];肿瘤药物及肿瘤传统医学治疗研究[C];2005年

4 欧志福;;川芎嗪注射液联合脑蛋白水解物治疗眩晕61例[A];2011年全国医药学术论坛交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班论文集[C];2011年

5 李道睿;祁鑫;于明薇;裴迎霞;张培彤;林洪生;;榄香烯对人肺癌细胞表面所表达与侵袭转移相关粘附蛋白的影响[A];第十届全国中西医结合肿瘤学术大会论文汇编[C];2006年

6 王静;王淑美;陈刚;徐晓玉;李卓恒;何瑶;;川芎嗪对糖尿病大鼠肾脏VEGF表达的影响[A];第二届临床中药学学术研讨会论文集[C];2009年

7 张建海;冯彬彬;陈红;徐晓玉;;中药抗肿瘤动物试验研究进展[A];第二届临床中药学学术研讨会论文集[C];2009年

8 潘玉真;殷东风;周立江;;柴胡龙牡汤对Lewis肺癌小鼠T细胞亚群、NK细胞活性及IFN-γ、IL-10水平影响研究[A];2009年首届全国中西医肿瘤博士及中青年医师论坛论文集[C];2009年

9 迈小敏;王宏洁;边宝林;;川芎、杭黄菊药材单提与合提挥发油成分的比较[A];中华中医药学会中药炮制分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年

10 刘冬立;;活血行气法治疗缺血性中风的临床和实验研究[A];国家中医药管理局脑病重点研究室建设研讨会暨中风病科研成果推广交流会论文汇编[C];2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 柴小姝;消积饮维持治疗晚期肺癌及其对PI3K/AKT/mTOR信号通路影响的研究[D];广州中医药大学;2011年

2 任敏;芩丹胶囊对血管外膜成纤维细胞TGF-β1/Smad信号转导通路影响的研究[D];山东大学;2011年

3 陈哲;川芎嗪在土三七诱导的小鼠肝小静脉闭塞病中的防治作用及机制探讨[D];中南大学;2011年

4 尹建华;清胰化积方对人胰腺癌肝转移的实验研究[D];复旦大学;2010年

5 张乐;川芎嗪对模拟高原低氧暴露下大鼠肺水肿的保护作用及机制研究[D];第三军医大学;2011年

6 林琳;黄芪甲苷、β-榄香烯抗肝癌作用及其免疫机制的研究[D];南京中医药大学;2011年

7 姜山;猫眼草活性成分提取物的肺癌抑制作用及其机制研究[D];中国海洋大学;2011年

8 张子臻;益气升陷活血方治疗慢性充血性心力衰竭的研究[D];天津大学;2009年

9 陈德玉;食管癌微环境淋巴细胞亚群及免疫调节分子的临床意义研究[D];江苏大学;2012年

10 韩经丹;通络化痰胶囊及其有效成分对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及机制研究[D];北京中医药大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 章艳;西洋参茎叶皂苷对局灶性脑缺血后Caspase-8和Caspase-9表达的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年

2 曲晓妮;四物汤及其拆方对血虚大鼠血管内皮损伤的影响研究[D];山东中医药大学;2010年

3 张超;洋葱、莪术、川芎三种植物挥发性成分的提取和分析[D];华东理工大学;2011年

4 吴晶晶;红曲霉（Monascus .spp）产生川芎嗪的发酵工艺条件研究[D];浙江大学;2011年

5 李光月;川芎嗪抗废用性肌萎缩药效与作用机制初步研究[D];西北大学;2011年

6 马强;“脑神经血管单元”体外模型的构建及梓葛冻干粉对其缺氧缺糖损伤的保护研究[D];西南大学;2011年

7 王小翠;内异消对子宫内膜异位症大鼠血管生成与雌激素的影响研究[D];西南大学;2011年

8 周剑宇;益气活血药防治大鼠心力衰竭心脏重塑的调节机制研究[D];北京中医药大学;2011年

9 雷志丹;舒胸片血清药物化学研究[D];湖南中医药大学;2011年

10 李倩;消积饮对晚期非小细胞肺癌患者血清血管内皮生长因子的影响研究[D];广州中医药大学;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 邬万新,江悦琴,姜叙诚;Caspase-3和bcl-x_L在胃癌中的表达及意义[J];癌症;2001年07期

2 李艳梅,樊玉玲,霍希利;低分子量肝素钙与川芎嗪治疗肺心病并呼吸衰竭59例临床分析[J];滨州医学院学报;2004年03期

3 高维娟;小鼠脑缺血再灌后海马组织SDH、CCO活力的动态变化[J];承德医学院学报;2005年01期

4 向永臣;赖先荣;张婧;;均匀设计法优选川芎提取物的提取工艺研究[J];成都中医药大学学报;2008年03期

5 吴国祥,李涛,李承晏,吴建平;Bcl-2/Bax蛋白表达与星形细胞瘤恶性程度的相关性研究[J];中国医师杂志;2003年01期

6 黄鲁豫,王臻,黄耀添,吕荣,张金山,马福成;细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax在骨肉瘤中的表达[J];第四军医大学学报;1997年01期

7 裘秀春,张惠中,何大为,杨连甲,范清宇;人成骨肉瘤组织中bcl-2,bax和c-fos基因表达及意义[J];第四军医大学学报;1999年12期

8 楚治群,马妮;川芎嗪注射液佐治小儿支气管肺炎临床观察[J];儿科药学杂志;2004年01期

9 杨楚耀;黄新明;;2-溴甲基-3,5,6-三甲基吡嗪及其衍生物的制备[J];复旦学报(自然科学版);1980年04期

10 郎海滨;Bcl-2家族蛋白与线粒体凋亡路径研究进展[J];国外医学(卫生学分册);2004年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王东生,袁肇凯,郭志华;细胞凋亡与中医药[J];中国中医药信息杂志;2000年12期

2 万晓艳,于苏国,郭玉芹,何庆;细胞凋亡与自身免疫性甲状腺疾病的研究进展[J];中国地方病防治杂志;2002年06期

3 祝伟民,林建棣,马晓东,段小平;运动与细胞凋亡[J];中国临床康复;2004年27期

4 王会玲,景文莉,张小红,高维娟;细胞凋亡与心肌缺血-再灌注损伤[J];承德医学院学报;2005年04期

5 梁薇;细胞凋亡的中药调节机制[J];四川中医;2005年11期

6 张松彪;细胞凋亡与细胞养生[J];中国科技产业;2005年01期

7 杨竹林,伍汉文;细胞凋亡调控因素有关基因的研究[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);1997年02期

8 刘恩梅,杨锡强;细胞凋亡及其影响因素[J];重庆医学;1998年01期

9 ;美开发调控细胞凋亡药物[J];中国肿瘤;1999年07期

10 管孝鞠,廖明阳;细胞凋亡在致畸中的作用[J];卫生毒理学杂志;2000年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈颖丽;李前忠;;不同亚细胞位置的细胞凋亡蛋白质的结构特性分析[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年

2 孙英丽;赵允;朱山;翟中和;;植物细胞凋亡及其机理的研究[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年

3 刘二龙;袁慧;;锌与细胞凋亡[A];2003全国家畜内科学学术研讨会论文专辑[C];2003年

4 邱洁;高海青;;锌在细胞凋亡中的作用研究进展[A];山东省微量元素科学研究会第三届学术研讨会论文汇编[C];2006年

5 俞雅萍;;细胞凋亡的机制及途径和影响因素[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年

6 于青;袁伟杰;姚建;;晚期糖基化终末产物引起足细胞凋亡的机制[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨锋;;调控细胞凋亡的线粒体因素[A];肿瘤病因学研究与中西医结合肿瘤综合诊疗交流研讨会论文集[C];2009年

8 吴经纬;汤长发;;运动中细胞凋亡的线粒体变化特征[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年

9 蒲小平;李长龄;屠鹏飞;宋志宏;;中药肉丛蓉成分抗神经细胞凋亡的实验研究[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年

10 江键;宋诚荣;崔黎丽;方影;王小平;;静电场对细胞凋亡作用的初步探讨[A];中国物理学会第九届静电学术年会论文集[C];2000年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 商东;[N];中国医药报;2001年

2 张志军;[N];中国医药报;2002年

3 ;[N];中国高新技术产业导报;2002年

4 记者张建松;[N];科技日报;2002年

5 李明辉;[N];医药导报;2002年

6 洪敏;[N];中国医药报;2008年

7 陶春祥;[N];中国医药报;2003年

8 本报实习记者 梁媛媛;[N];北京科技报;2010年

9 高书明;[N];中国医药报;2004年

10 勇汇;[N];中国医药报;2002年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 杨利;系列多氮类化合物的抗肿瘤活性研究[D];武汉大学;2012年

2 张浩;从分子、细胞和动物水平研究铅诱发氧化损伤及细胞凋亡的效应与机理[D];山东大学;2015年

3 何欣怡;家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）抑制家蚕BmN细胞凋亡的功能研究[D];浙江大学;2015年

4 冯全服;从线粒体途径研究川芎嗪诱导HepG2细胞凋亡效应机制[D];南京中医药大学;2015年

5 张晓倩;高糖诱导Bim蛋白高表达而促肾近曲小管上皮细胞凋亡的机制探讨[D];山东大学;2015年

6 孙健玮;PTEN基因负调控Raf1磷酸化的作用及其对PC3细胞凋亡的影响[D];昆明医科大学;2014年

7 徐林艳;肿瘤细胞凋亡过程中TNFRSF10B和CFLAR调控机制研究[D];山东大学;2015年

8 柳惠斌;普通针毛蕨DEDC诱导肿瘤细胞凋亡信号传导机制研究[D];华中科技大学;2011年

9 姚展;细胞凋亡的多级分子调控机制[D];中国科学技术大学;2008年

10 季明杰;中药姜黄组分芳姜黄酮诱导肿瘤细胞凋亡的研究[D];山东大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 曹璐璐;2,2’,4,4’-四溴联苯醚(BDE-47)对人胚肾细胞(HEK293)的毒理效应及作用机制研究[D];中国科学院烟台海岸带研究所;2015年

2 张薇;蒜头果蛋白诱导HepG-2细胞凋亡的研究[D];云南民族大学;2015年

3 唐建国;视黄醇X受体出核抑制对神经元细胞凋亡的影响[D];福建医科大学;2015年

4 安璐;3-氯-1,2-丙二醇细胞毒性及其诱导HEK293细胞凋亡途径探究[D];江南大学;2015年

5 杨翔;Procaspase-8的异常表达抑制TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡[D];昆明理工大学;2015年

6 张昌明;I3C通过调控p53泛素化对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响[D];延边大学;2015年

7 彭涵;共轭亚油酸对仔猪脂肪细胞凋亡的影响[D];西南大学;2015年

8 李立辉;ΔFosB通过MMP-9调控山羊乳腺上皮细胞凋亡的分子机制[D];西北农林科技大学;2015年

9 杨鑫铖;Hedgehog信号通路在大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡中的作用[D];河北医科大学;2015年

10 贾琼琼;MicroRNA-214对H_2O_2损伤L6骨骼肌成肌细胞增殖和凋亡的影响[D];河北医科大学;2015年

  本文关键词：从线粒体途径研究川芎嗪诱导HepG2细胞凋亡效应机制，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：175714