Ezrin基因在子宫颈癌迁移浸润中的作用及机制

发布时间：2016-11-17 09:32

  本文关键词：Ezrin基因在子宫颈癌迁移浸润中的作用及机制，由笔耕文化传播整理发布。

《延边大学》 2015年

Ezrin基因在子宫颈癌迁移浸润中的作用及机制

孔界男  

【摘要】：目的：研究Ezrin基因对宫颈癌细胞生物学行为的影响,探讨Ezrin基因在宫颈癌演进过程中的分子机制；同时研究Ezrin蛋白表达检测在宫颈癌生物学行为判定中的临床病理学意义。材料与方法：1.体外实验：通过Western blotting方法检测Ezrin蛋白在宫颈癌细胞系HeLa, SiHa, C33A, CaSki,宫颈癌以及正常宫颈组织中的表达情况,同时应用蛋白印迹和免疫荧光法验证HeLa和SiHa细胞中沉默Ezrin基因的效果。应用平板克隆实验检测Ezrin基因沉默前后宫颈癌细胞增殖能力的改变；利用划痕实验、侵袭小室实验检测Ezrin基因沉默前后宫颈癌细胞迁移、浸润能力的变化；通过Western blotting和免疫荧光法检测HeLa和SiHa细胞中Ezrin基因沉默对EMT标记物表达水平的改变,包括上皮标记物E-cadherin和CK-18以及间质标记物Vimentin、β-Catenin和MMP-2蛋白；最后,应用蛋白印迹法检测Ezrin基因的沉默对Akt、S6和4EBP-1蛋白表达的影响。2.体内实验：采用硅胶环为接种癌细胞的载体,运用假气室法建立鸡胚绒毛尿囊膜侵袭模型,检测Ezrin基因沉默前后,宫颈癌细胞HeLa和SiHa侵袭、浸润CAM膜能力的变化。3.应用免疫组化方法检测Ezrin蛋白在239例宫颈上皮内瘤变、226例宫颈鳞癌、9例宫颈腺癌、17例宫颈腺上皮内瘤变以及52例正常宫颈组织中的表达情况,并分析Ezrin蛋白的表达与患者临床病理学特征的相关性,qRT-PCR法检测Ezrin mRNA的表达水平,同时检测HPV感染的基因型分型。并利用生存期分析Ezrin蛋白的表达对临床患者预后评估的价值。结果：1.体外实验：Western blotting结果显示,Ezrin蛋白在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A和CaSki以及宫颈癌组织中均高表达,而在正常的宫颈组织中无表达；蛋白印迹和免疫荧光实验结果显示,在HeLa和SiHa细胞中可沉默Ezrin基因的表达;倒置显微镜观察发现,Ezrin基因沉默后,对照组中细胞与细胞问连接松散成扁梭形,而Ezrin基因沉默组中细胞与细胞间连接紧密：平板克隆实验结果表明,Ezrin基因沉默后,宫颈癌细胞HeLa和SiHa的增殖能力明显受到抑制；划痕实验以及侵袭小室实验也表明,Ezrin基因沉默后,宫颈癌细胞的迁移与浸润能力明显下降；Western blotting和免疫荧光结果显示,Ezrin基因的沉默,上调了上皮标记物E-cadherin和CK-18蛋白的表达,下调了间质标记物VImentun、β-Catenin和MMP-2蛋白的表达；Ezrin基因的沉默抑制了p-Akt蛋白的表达。2.体内实验：Ezrin基因沉默后,宫颈癌细胞HeLa和SiHa侵袭、浸润CAM膜的能力明显下降。3.免疫组化结果显示：与癌旁正常组织相比,宫颈癌、宫颈上皮内瘤变以及宫颈腺上皮内瘤变中Ezrin蛋白表达明显升高,且Ezrin蛋白的表达与肿瘤的临床分期、分化程度以及淋巴结转移情况密切相关。在早期宫颈癌中,Ezrin蛋白的高表达可提示患者的不良预后。结论：Ezrin基因可能是通过诱导宫颈癌上皮间质转化这一过程促进肿瘤细胞的增殖、迁移与浸润；Ezrin基因可以激活PI3K/Akt信号通路；Ezrin蛋白的过表达可提示患者的不良预后,并可作为宫颈癌早期诊断和预后评估的参考,有望为宫颈癌治疗提供新的分子靶点。

【关键词】：
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

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本文编号：178617